| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 数量性状 | 第15-19页 |
| 1.1.1 数量性状的复杂性 | 第15-16页 |
| 1.1.2 数量性状位点的定位方法 | 第16-19页 |
| 1.2 酿酒酵母 | 第19-21页 |
| 1.3 酿酒酵母低温耐受性的研究现状 | 第21-25页 |
| 1.3.1 低温发酵对葡萄酒品质的影响 | 第21页 |
| 1.3.2 低温对酿酒酵母的影响 | 第21页 |
| 1.3.3 酿酒酵母对低温胁迫的响应 | 第21-24页 |
| 1.3.4 提高酿酒酵母低温耐受性的途径 | 第24-25页 |
| 1.4 研究目的与内容 | 第25-27页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第25页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 本土酿酒酵母的低温耐受性的研究 | 第27-36页 |
| 2.1 材料与仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.1.1 菌株 | 第27-28页 |
| 2.1.2 培养基 | 第28页 |
| 2.1.3 试剂与溶液 | 第28页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第28页 |
| 2.2 试验方法 | 第28-29页 |
| 2.2.1 酿酒酵母的生长能力鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.2 酿酒酵母的发酵能力鉴定 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.3.1 酿酒酵母在不同低温条件下的生长能力 | 第29-31页 |
| 2.3.2 酿酒酵母在不同低温条件下的发酵能力 | 第31-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34页 |
| 2.5 小结 | 第34-36页 |
| 第三章 低温耐受性极端表型单倍体亲本的筛选及缺陷型菌株的构建 | 第36-55页 |
| 3.1 材料与仪器设备 | 第36-39页 |
| 3.1.1 菌株 | 第36-37页 |
| 3.1.2 质粒 | 第37页 |
| 3.1.3 培养基 | 第37-38页 |
| 3.1.4 试剂与溶液 | 第38-39页 |
| 3.1.5 主要仪器与设备 | 第39页 |
| 3.2 试验方法 | 第39-46页 |
| 3.2.1 二倍体菌株HO基因的敲除 | 第39-43页 |
| 3.2.2 单倍体酵母菌株的获得 | 第43-44页 |
| 3.2.3 酿酒酵母低温耐受性的测定 | 第44页 |
| 3.2.4 营养缺陷型单倍体亲本菌株的构建 | 第44-46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-53页 |
| 3.3.1 二倍体酵母菌株HO基因的敲除 | 第46-48页 |
| 3.3.2 单倍体的获得 | 第48-49页 |
| 3.3.3 低温耐受表型极端单倍体亲本的筛选 | 第49-50页 |
| 3.3.4 营养缺陷型单倍体亲本菌株的构建 | 第50-52页 |
| 3.3.5 营养缺陷型菌株的遗传稳定性检测及其低温耐受性分析 | 第52-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-54页 |
| 3.4.1 Cre-loxP重组系统在酵母的多基因敲除中的应用 | 第53页 |
| 3.4.2 通过敲除二倍体酵母的HO基因获得交配型稳定的单倍体后代 | 第53-54页 |
| 3.5 小结 | 第54-55页 |
| 第四章 酿酒酵母低温耐受性QTL的定位 | 第55-67页 |
| 4.1 材料与仪器设备 | 第55-56页 |
| 4.1.1 菌株 | 第55页 |
| 4.1.2 培养基 | 第55-56页 |
| 4.1.3 试剂与溶液 | 第56页 |
| 4.1.4 主要仪器与设备 | 第56页 |
| 4.2 试验方法 | 第56-59页 |
| 4.2.1 F2 分离群体的构建 | 第56-57页 |
| 4.2.2 子代极端混池的构建 | 第57页 |
| 4.2.3 QTL分析 | 第57-59页 |
| 4.3 结果与分析 | 第59-64页 |
| 4.3.1 F2 分离群体的构建及子代极端混池的获得 | 第59-60页 |
| 4.3.2 测序数据分析 | 第60-61页 |
| 4.3.3 SNP的检测与注释 | 第61-62页 |
| 4.3.4 QTL定位 | 第62-64页 |
| 4.4 讨论 | 第64-66页 |
| 4.4.1 SNP标记是定位酵母数量性状QTL的常用工具 | 第64页 |
| 4.4.2 BSA方法在酿酒酵母数量性状研究中的应用 | 第64-66页 |
| 4.5 小结 | 第66-67页 |
| 第五章 酿酒酵母低温耐受性候选基因的克隆与鉴定 | 第67-90页 |
| 5.1 材料与仪器设备 | 第67-69页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第67-68页 |
| 5.1.2 培养基 | 第68页 |
| 5.1.3 试剂与溶液 | 第68-69页 |
| 5.1.4 主要仪器与设备 | 第69页 |
| 5.2 试验方法 | 第69-79页 |
| 5.2.1 基因敲除 | 第69-72页 |
| 5.2.2 相互半合子分析(RHA,reciprocal hemizygosity analysis) | 第72-73页 |
| 5.2.3 候选基因编码区和上游基因调控区的序列分析 | 第73页 |
| 5.2.4 等位基因替换 | 第73-77页 |
| 5.2.5 NAT1、YOR365C基因的突变位点在其他酿酒酵母菌株中的存在情况 | 第77页 |
| 5.2.6 QTN的鉴定 | 第77-78页 |
| 5.2.7 本土酿酒酵母菌株NX9412低温耐受能力的改善 | 第78-79页 |
| 5.2.8 蛋白结构域的预测 | 第79页 |
| 5.3 结果与分析 | 第79-87页 |
| 5.3.1 IV染色体上QTL基因的鉴定 | 第79-81页 |
| 5.3.2 XV染色体上QTL基因的鉴定 | 第81-82页 |
| 5.3.3 两亲本NAT1、YOR365C基因的序列差异分析 | 第82-83页 |
| 5.3.4 NAT1、YOR365C等位基因的替换 | 第83-85页 |
| 5.3.5 NAT1、YOR365C的非同义突变位点在其他酿酒酵母菌株的存在情况 | 第85-86页 |
| 5.3.6 QTN的鉴定 | 第86页 |
| 5.3.7 本土酿酒酵母菌株NX9412低温耐受能力的改善 | 第86-87页 |
| 5.3.8 YOR365C蛋白的结构域的预测 | 第87页 |
| 5.4 讨论 | 第87-89页 |
| 5.4.1 NAT1、YOR365C是控制本土酿酒酵母低温耐受性的主效基因 | 第87-88页 |
| 5.4.2 从QTL到QTN的发展是数量性状解析的重大突破 | 第88-89页 |
| 5.5 小结 | 第89-90页 |
| 第六章 结论、创新点与展望 | 第90-92页 |
| 6.1 结论 | 第90页 |
| 6.2 创新点 | 第90页 |
| 6.3 展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-103页 |
| 附录 | 第103-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 个人简历 | 第113页 |
