| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-31页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 两种双果糖酐和菊二糖理化性质及功能 | 第13-18页 |
| 1.2.1 理化性质方面 | 第13-15页 |
| 1.2.2 双果糖酐功能 | 第15-18页 |
| 1.3 三型双果糖酐DFA-Ⅲ安全性 | 第18页 |
| 1.4 双果糖酐的合成 | 第18-20页 |
| 1.4.1 化学合成 | 第18-20页 |
| 1.4.2 酶法合成 | 第20页 |
| 1.5 菊糖果糖转移酶IFTase和双果糖酐水解酶DFAase的研究 | 第20-29页 |
| 1.5.1 三型菊糖果糖转移酶IFTase-Ⅲ的研究情况 | 第20-24页 |
| 1.5.2 一型菊糖果糖转移酶IFTase-Ⅰ的研究情况 | 第24页 |
| 1.5.3 双果糖酐水解酶的研究情况 | 第24-25页 |
| 1.5.4 菊糖果糖转移酶IFTase和双果糖酐水解酶DFAase结构研究情况 | 第25-28页 |
| 1.5.5 国内菊糖果糖转移酶IFTase和双果糖酐水解酶DFAase研究情况 | 第28-29页 |
| 1.6 课题立题依据和意义 | 第29-30页 |
| 1.7 课题研究思路和主要内容 | 第30-31页 |
| 第二章 Clostridium clostridioforme AGR2157中一型菊糖果糖转移酶的鉴定 | 第31-51页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第31-32页 |
| 2.2.2 主要实验试剂 | 第32页 |
| 2.2.3 主要实验仪器 | 第32页 |
| 2.2.4 培养基配制 | 第32-33页 |
| 2.2.5 主要试剂配制 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-39页 |
| 2.3.1 基因克隆和质粒构建 | 第34-35页 |
| 2.3.2 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第35页 |
| 2.3.3 pET22b-CcIFTase-Ⅰ重组质粒的转化、抽提、保藏 | 第35-36页 |
| 2.3.4 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的诱导表达以及分离纯化 | 第36页 |
| 2.3.5 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的SDS-PAGE以及全分子量测定 | 第36-37页 |
| 2.3.6 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的浓度测定 | 第37页 |
| 2.3.7 一型双果糖酐DFA-I的测定以及鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.8 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ催化产物的鉴定 | 第38页 |
| 2.3.9 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ酶学性质测定 | 第38-39页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第39-50页 |
| 2.4.1 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ氨基酸序列对比 | 第39-41页 |
| 2.4.2 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的分离纯化 | 第41-42页 |
| 2.4.3 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ催化菊糖的产物鉴定 | 第42-44页 |
| 2.4.4 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ酶学性质研究 | 第44-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 Arthrobacter aurescens SK8.001中三型双果糖酐水解酶的鉴定 | 第51-68页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第51页 |
| 3.2.2 主要实验试剂 | 第51-52页 |
| 3.2.3 主要实验仪器 | 第52页 |
| 3.2.4 培养基配制 | 第52页 |
| 3.2.5 主要试剂配方 | 第52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-57页 |
| 3.3.1 基因调取、克隆以及质粒构建 | 第52-54页 |
| 3.3.2 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第54页 |
| 3.3.3 质粒转化、抽提、保藏 | 第54页 |
| 3.3.4 诱导表达以及分离纯化 | 第54页 |
| 3.3.5 分子量和浓度测定 | 第54页 |
| 3.3.6 酶活测定 | 第54页 |
| 3.3.7 产物菊二糖的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3.8 酶学性质研究 | 第55-56页 |
| 3.3.9 三型双果糖酐水解酶AaDFA-Ⅲase结构建模与分子对接 | 第56页 |
| 3.3.10 定点突变 | 第56-57页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第57-67页 |
| 3.4.1 三型双果糖酐水解酶AaDFA-Ⅲase基因获取 | 第57-58页 |
| 3.4.2 分离纯化及分子量测定 | 第58-59页 |
| 3.4.3 产物的鉴定 | 第59-61页 |
| 3.4.4 酶学性质研究 | 第61-62页 |
| 3.4.5 三型双果糖酐水解酶AaDFA-Ⅲase结构模型构建 | 第62-64页 |
| 3.4.6 三型双果糖酐水解酶AaDFA-Ⅲase催化位点研究 | 第64-67页 |
| 3.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第四章 三型双果糖酐水解酶晶体结构及催化机制研究 | 第68-102页 |
| 4.1 引言 | 第68页 |
| 4.2 实验材料 | 第68-69页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第68页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第68-69页 |
| 4.3 实验方法 | 第69-73页 |
| 4.3.1 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase分子克隆和质粒构建 | 第69页 |
| 4.3.2 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase质粒转化、抽提、保藏 | 第69页 |
| 4.3.3 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase制备以及分离纯化 | 第69-70页 |
| 4.3.4 酶纯度和分子量测定 | 第70页 |
| 4.3.5 酶活测定 | 第70页 |
| 4.3.6 产物鉴定 | 第70-71页 |
| 4.3.7 酶学性质测定 | 第71页 |
| 4.3.8 转化三型双果糖酐水解酶为三型菊糖果糖转移酶 | 第71-72页 |
| 4.3.9 动力学研究 | 第72页 |
| 4.3.10 结晶方法 | 第72页 |
| 4.3.11 X-衍射晶体数据收集 | 第72-73页 |
| 4.3.12 数据处理和结构解析 | 第73页 |
| 4.3.13 定点突变与等温滴定量热(ITC)实验 | 第73页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第73-101页 |
| 4.4.1 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase的分离纯化 | 第73-75页 |
| 4.4.2 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase的鉴定 | 第75-77页 |
| 4.4.3 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase酶学性质研究 | 第77-78页 |
| 4.4.4 结晶条件筛选和衍射数据收集 | 第78-79页 |
| 4.4.5 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase结构 | 第79-82页 |
| 4.4.6 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase和DFA-Ⅲ复合物结构 | 第82-91页 |
| 4.4.7 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase和GF_2复合物结构 | 第91-94页 |
| 4.4.8 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase-lidˉ及其和GF_2复合物结构 | 第94-98页 |
| 4.4.9 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase催化总结 | 第98-100页 |
| 4.4.10 微生物的三型双果糖酐水解酶和三型菊糖果糖转移酶 | 第100-101页 |
| 4.5 本章小结 | 第101-102页 |
| 第五章 三型双果糖酐水解酶DFA-Ⅲase的分子改造 | 第102-109页 |
| 5.1 引言 | 第102页 |
| 5.2 实验材料 | 第102页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第102页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第102页 |
| 5.3 实验方法 | 第102-103页 |
| 5.3.1 突变体C387A分子克隆和质粒构建 | 第102-103页 |
| 5.3.2 突变体制备以及分离纯化 | 第103页 |
| 5.3.3 突变体C387A的结晶 | 第103页 |
| 5.3.4 X-衍射晶体数据收集 | 第103页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第103-108页 |
| 5.4.1 突变体的分离纯化 | 第103-104页 |
| 5.4.2 突变位点的理性选择和作用机制 | 第104-108页 |
| 5.5 突变的意义 | 第108页 |
| 5.6 本章小结 | 第108-109页 |
| 第六章 一型菊糖果糖转移酶IFTase-Ⅰ结构的研究 | 第109-119页 |
| 6.1 引言 | 第109页 |
| 6.2 实验材料 | 第109页 |
| 6.3 实验方法 | 第109-110页 |
| 6.3.1 分离纯化 | 第109-110页 |
| 6.3.2 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的结晶 | 第110页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第110-118页 |
| 6.4.1 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的分离纯化 | 第110-112页 |
| 6.4.2 结晶条件筛选和衍射数据收集 | 第112-113页 |
| 6.4.3 一型菊糖果糖转移酶IFTase-Ⅰ的结构 | 第113-116页 |
| 6.4.4 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ活性中心 | 第116-118页 |
| 6.5 本章小结 | 第118-119页 |
| 主要结论和展望 | 第119-120页 |
| 论文创新点 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-131页 |
| 附录 ：作者在攻读博士期间发表的论文 | 第131页 |
