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菊糖果糖转移酶和双果糖酐水解酶构效关系研究

摘要第3-5页
Abstract第5-7页
符号与缩略语说明第12-13页
第一章 绪论第13-31页
    1.1 引言第13页
    1.2 两种双果糖酐和菊二糖理化性质及功能第13-18页
        1.2.1 理化性质方面第13-15页
        1.2.2 双果糖酐功能第15-18页
    1.3 三型双果糖酐DFA-Ⅲ安全性第18页
    1.4 双果糖酐的合成第18-20页
        1.4.1 化学合成第18-20页
        1.4.2 酶法合成第20页
    1.5 菊糖果糖转移酶IFTase和双果糖酐水解酶DFAase的研究第20-29页
        1.5.1 三型菊糖果糖转移酶IFTase-Ⅲ的研究情况第20-24页
        1.5.2 一型菊糖果糖转移酶IFTase-Ⅰ的研究情况第24页
        1.5.3 双果糖酐水解酶的研究情况第24-25页
        1.5.4 菊糖果糖转移酶IFTase和双果糖酐水解酶DFAase结构研究情况第25-28页
        1.5.5 国内菊糖果糖转移酶IFTase和双果糖酐水解酶DFAase研究情况第28-29页
    1.6 课题立题依据和意义第29-30页
    1.7 课题研究思路和主要内容第30-31页
第二章 Clostridium clostridioforme AGR2157中一型菊糖果糖转移酶的鉴定第31-51页
    2.1 引言第31页
    2.2 实验材料第31-34页
        2.2.1 菌株和质粒第31-32页
        2.2.2 主要实验试剂第32页
        2.2.3 主要实验仪器第32页
        2.2.4 培养基配制第32-33页
        2.2.5 主要试剂配制第33-34页
    2.3 实验方法第34-39页
        2.3.1 基因克隆和质粒构建第34-35页
        2.3.2 大肠杆菌感受态细胞制备第35页
        2.3.3 pET22b-CcIFTase-Ⅰ重组质粒的转化、抽提、保藏第35-36页
        2.3.4 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的诱导表达以及分离纯化第36页
        2.3.5 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的SDS-PAGE以及全分子量测定第36-37页
        2.3.6 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的浓度测定第37页
        2.3.7 一型双果糖酐DFA-I的测定以及鉴定第37-38页
        2.3.8 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ催化产物的鉴定第38页
        2.3.9 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ酶学性质测定第38-39页
    2.4 结果与讨论第39-50页
        2.4.1 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ氨基酸序列对比第39-41页
        2.4.2 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的分离纯化第41-42页
        2.4.3 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ催化菊糖的产物鉴定第42-44页
        2.4.4 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ酶学性质研究第44-50页
    2.5 本章小结第50-51页
第三章 Arthrobacter aurescens SK8.001中三型双果糖酐水解酶的鉴定第51-68页
    3.1 引言第51页
    3.2 实验材料第51-52页
        3.2.1 菌株和质粒第51页
        3.2.2 主要实验试剂第51-52页
        3.2.3 主要实验仪器第52页
        3.2.4 培养基配制第52页
        3.2.5 主要试剂配方第52页
    3.3 实验方法第52-57页
        3.3.1 基因调取、克隆以及质粒构建第52-54页
        3.3.2 大肠杆菌感受态细胞制备第54页
        3.3.3 质粒转化、抽提、保藏第54页
        3.3.4 诱导表达以及分离纯化第54页
        3.3.5 分子量和浓度测定第54页
        3.3.6 酶活测定第54页
        3.3.7 产物菊二糖的鉴定第54-55页
        3.3.8 酶学性质研究第55-56页
        3.3.9 三型双果糖酐水解酶AaDFA-Ⅲase结构建模与分子对接第56页
        3.3.10 定点突变第56-57页
    3.4 结果与讨论第57-67页
        3.4.1 三型双果糖酐水解酶AaDFA-Ⅲase基因获取第57-58页
        3.4.2 分离纯化及分子量测定第58-59页
        3.4.3 产物的鉴定第59-61页
        3.4.4 酶学性质研究第61-62页
        3.4.5 三型双果糖酐水解酶AaDFA-Ⅲase结构模型构建第62-64页
        3.4.6 三型双果糖酐水解酶AaDFA-Ⅲase催化位点研究第64-67页
    3.5 本章小结第67-68页
第四章 三型双果糖酐水解酶晶体结构及催化机制研究第68-102页
    4.1 引言第68页
    4.2 实验材料第68-69页
        4.2.1 主要试剂第68页
        4.2.2 主要仪器第68-69页
    4.3 实验方法第69-73页
        4.3.1 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase分子克隆和质粒构建第69页
        4.3.2 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase质粒转化、抽提、保藏第69页
        4.3.3 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase制备以及分离纯化第69-70页
        4.3.4 酶纯度和分子量测定第70页
        4.3.5 酶活测定第70页
        4.3.6 产物鉴定第70-71页
        4.3.7 酶学性质测定第71页
        4.3.8 转化三型双果糖酐水解酶为三型菊糖果糖转移酶第71-72页
        4.3.9 动力学研究第72页
        4.3.10 结晶方法第72页
        4.3.11 X-衍射晶体数据收集第72-73页
        4.3.12 数据处理和结构解析第73页
        4.3.13 定点突变与等温滴定量热(ITC)实验第73页
    4.4 结果与讨论第73-101页
        4.4.1 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase的分离纯化第73-75页
        4.4.2 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase的鉴定第75-77页
        4.4.3 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase酶学性质研究第77-78页
        4.4.4 结晶条件筛选和衍射数据收集第78-79页
        4.4.5 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase结构第79-82页
        4.4.6 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase和DFA-Ⅲ复合物结构第82-91页
        4.4.7 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase和GF_2复合物结构第91-94页
        4.4.8 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase-lidˉ及其和GF_2复合物结构第94-98页
        4.4.9 三型双果糖酐水解酶AcDFA-Ⅲase催化总结第98-100页
        4.4.10 微生物的三型双果糖酐水解酶和三型菊糖果糖转移酶第100-101页
    4.5 本章小结第101-102页
第五章 三型双果糖酐水解酶DFA-Ⅲase的分子改造第102-109页
    5.1 引言第102页
    5.2 实验材料第102页
        5.2.1 主要试剂第102页
        5.2.2 主要仪器第102页
    5.3 实验方法第102-103页
        5.3.1 突变体C387A分子克隆和质粒构建第102-103页
        5.3.2 突变体制备以及分离纯化第103页
        5.3.3 突变体C387A的结晶第103页
        5.3.4 X-衍射晶体数据收集第103页
    5.4 结果与讨论第103-108页
        5.4.1 突变体的分离纯化第103-104页
        5.4.2 突变位点的理性选择和作用机制第104-108页
    5.5 突变的意义第108页
    5.6 本章小结第108-109页
第六章 一型菊糖果糖转移酶IFTase-Ⅰ结构的研究第109-119页
    6.1 引言第109页
    6.2 实验材料第109页
    6.3 实验方法第109-110页
        6.3.1 分离纯化第109-110页
        6.3.2 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的结晶第110页
    6.4 结果与讨论第110-118页
        6.4.1 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ的分离纯化第110-112页
        6.4.2 结晶条件筛选和衍射数据收集第112-113页
        6.4.3 一型菊糖果糖转移酶IFTase-Ⅰ的结构第113-116页
        6.4.4 一型菊糖果糖转移酶CcIFTase-Ⅰ活性中心第116-118页
    6.5 本章小结第118-119页
主要结论和展望第119-120页
论文创新点第120-121页
致谢第121-122页
参考文献第122-131页
附录 :作者在攻读博士期间发表的论文第131页

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