| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-24页 |
| ·乳酸菌简介 | 第10-12页 |
| ·乳酸菌的生理特性 | 第10-11页 |
| ·乳酸菌的应用领域 | 第11页 |
| ·乳酸菌的生理功能 | 第11-12页 |
| ·乳酸菌中的嗜热链球菌 | 第12-17页 |
| ·嗜热链球菌的生物学特性 | 第13页 |
| ·嗜热链球菌的生长条件和营养要求 | 第13-14页 |
| ·嗜热链球菌的代谢 | 第14-15页 |
| ·嗜热链球菌的耐性 | 第15-16页 |
| ·嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌的相互作用 | 第16页 |
| ·嗜热链球菌对酸奶后酸化过程的影响 | 第16-17页 |
| ·双向电泳技术 | 第17-19页 |
| ·双向电泳基本原理 | 第17-18页 |
| ·样本的制备 | 第18页 |
| ·蛋白一维等点聚焦 | 第18页 |
| ·二维SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第18-19页 |
| ·双向电泳的缺点 | 第19页 |
| ·质谱分析在蛋白质组学中的应用 | 第19-20页 |
| ·样品预处理 | 第19页 |
| ·质谱中的基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱测量法 | 第19-20页 |
| ·质谱中的电子喷雾电离质谱测量法 | 第20页 |
| ·RT-qPCR技术 | 第20-21页 |
| ·实时荧光定量PCR原理 | 第20页 |
| ·RT-qPCR的优点及其对结果的影响因素 | 第20-21页 |
| ·实时定量PCR的应用 | 第21页 |
| ·基因敲除技术 | 第21-23页 |
| ·基因敲除技术的基本原理 | 第21页 |
| ·基因敲除常用技术 | 第21-22页 |
| ·基因敲除技术的应用 | 第22-23页 |
| ·本课题研究背景和意义 | 第23页 |
| ·研究内容 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| ·实验材料与仪器 | 第24-27页 |
| ·实验菌株与载体 | 第24页 |
| ·实验试剂 | 第24-25页 |
| ·实验仪器 | 第25-26页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-38页 |
| ·嗜热链球菌生长特性的测定 | 第27页 |
| ·利用蛋白质组学方法获取嗜热链球菌耐酸性基因 | 第27-29页 |
| ·RT-qPCR验证差异基因的表达 | 第29-32页 |
| ·耐酸性基因CiaH上下臂与pMD 18-T载体的构建 | 第32-35页 |
| ·CiaH上下臂+pMD 18-T与氯霉素抗性基因的载体构建 | 第35-36页 |
| ·基因敲除 | 第36-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-64页 |
| ·嗜热链球菌生长特性的测定 | 第38-39页 |
| ·酸刺激前后的蛋白质组结果 | 第39-42页 |
| ·差异点蛋白的质谱鉴定 | 第42-54页 |
| ·与金属离子压力相关的蛋白 | 第42-44页 |
| ·与逆境下修复保护机制相关的蛋白 | 第44-46页 |
| ·与代谢途径相关的一些酶和亚基 | 第46-49页 |
| ·与ATP合成酶相关的蛋白,转录因子 | 第49-51页 |
| ·与氨基酸代谢相关的酶蛋白 | 第51-53页 |
| ·其它蛋白 | 第53-54页 |
| ·RT-qPCR.验证差异基因的表达 | 第54-58页 |
| ·样品总RNA的提取 | 第54-55页 |
| ·RT-qPCR引物特异性 | 第55-56页 |
| ·RT-qPCR结果分析 | 第56-58页 |
| ·耐酸性基因CiaH基因敲除载体的构建 | 第58-63页 |
| ·CiaH基因上下臂片段的扩增 | 第58页 |
| ·CiaH上下臂与pMD 18-T载体连接的筛选 | 第58-60页 |
| ·氯霉素抗性基因的扩增 | 第60-61页 |
| ·CiaH上下臂+pMD 18-T与氯霉素抗性基因连接的筛选 | 第61-63页 |
| ·基因敲除 | 第63-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-74页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第74-75页 |
| 8 致谢 | 第75页 |
