| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 植物乳杆菌的菌种特性及其研究应用 | 第11-15页 |
| 1.2.1 植物乳杆菌的菌种特性 | 第11-12页 |
| 1.2.2 植物乳杆菌的研究与应用 | 第12-15页 |
| 1.3 乳酸杆菌的分离鉴定方法的研究 | 第15-18页 |
| 1.3.1 乳酸杆菌的分离和培养 | 第15-16页 |
| 1.3.2 分子生物技术在乳酸杆菌鉴定中的应用 | 第16-18页 |
| 1.4 重叠延伸PCR研究进展 | 第18-21页 |
| 1.4.1 重叠延伸PCR的原理 | 第18-20页 |
| 1.4.2 重叠延伸PCR的应用 | 第20-21页 |
| 1.5 植物乳杆菌基因敲除方法的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.5.1 基于RecA重组系统在植物乳杆菌中的应用 | 第21-23页 |
| 1.5.2 基于Cre/lox重组系统在基因改造植物乳杆菌中的应用 | 第23-24页 |
| 1.6 本论文的立题依据和研究内容 | 第24-26页 |
| 1.6.1 本论文的立题依据 | 第24-25页 |
| 1.6.2 本课题的研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 具有降亚硝酸盐能力乳酸菌的筛选及分子鉴定 | 第26-38页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第26-27页 |
| 2.2.2 仪器 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.3.1 亚硝酸盐的检测 | 第27-28页 |
| 2.3.2 降解亚硝酸盐的反应 | 第28页 |
| 2.3.3 菌株的分子生物学鉴定 | 第28-30页 |
| 2.3.4 数据分析 | 第30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-37页 |
| 2.4.1 乳杆菌DMDL9010 亚硝酸盐的降解效果 | 第30-31页 |
| 2.4.2 菌株DMDL 9010 的 16S rDNA分子鉴定 | 第31-32页 |
| 2.4.3 菌株DMDL 9010 的生理生化特征分析 | 第32-33页 |
| 2.4.4 DMDL 9010 菌株的L-乳酸脱氢酶1编码基因的分子生物学鉴定 | 第33-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 构建植物乳杆菌DMDL9010 nir和L-ldh1 基因敲除载体 | 第38-55页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第38-40页 |
| 3.2.1 实验材料及仪器 | 第38-39页 |
| 3.2.2 实验菌株及质粒 | 第39-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-45页 |
| 3.3.1 植物乳杆菌DM9010 基因组的制备以及质粒的提取 | 第40-41页 |
| 3.3.2 重叠延伸PCR连接上下游DNA片段的条件优化 | 第41-43页 |
| 3.3.3 用于构建重组载体大肠杆菌工程菌的筛选 | 第43-44页 |
| 3.3.4 大肠杆菌菌落PCR鉴定方法 | 第44页 |
| 3.3.5 植物乳杆菌DMDL9010 L-ldh1 基因双交换重组载体的构建方法 | 第44-45页 |
| 3.3.6 植物乳杆菌DMDL9010 nir基因单交换重组载体的构建方法 | 第45页 |
| 3.4 结果与分析 | 第45-54页 |
| 3.4.1 植物乳杆菌基因组DNA提取以及L-乳酸脱氢酶1上下游扩增结果 | 第45-46页 |
| 3.4.2 重叠延伸PCR条件优化 | 第46-49页 |
| 3.4.3 构建重组载体大肠杆菌宿主菌的选择 | 第49-51页 |
| 3.4.4 植物乳杆菌DMDL9010L-ldh1 基因双交换重组载体的构建 | 第51-53页 |
| 3.4.5 植物乳杆菌DMDL9010 nir基因单交换重组载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 植物乳杆菌DMDL9010基因敲除条件的初探 | 第55-65页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第55-56页 |
| 4.2.1 实验菌株及质粒 | 第55-56页 |
| 4.2.2 原料与试剂 | 第56页 |
| 4.2.3 仪器 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-59页 |
| 4.3.1 植物乳杆菌DMDL9010 电转化感受态细胞的制备及电转化方法 | 第56-57页 |
| 4.3.2 乳酸菌菌落PCR方法 | 第57-58页 |
| 4.3.3 植物乳杆菌DMDL9010 中pG+host9 的热敏感性以及分离稳定性 | 第58页 |
| 4.3.4 植物乳杆菌DMDL9010 中重组质粒发生基因重组的诱导方法 | 第58-59页 |
| 4.4 结果与分析 | 第59-64页 |
| 4.4.1 电转化pG+host9 到植物乳杆菌DMDL9010 | 第59-61页 |
| 4.4.2 pG+host9 在植物乳杆菌DMDL9010 中的热敏感性 | 第61-62页 |
| 4.4.3 单交换重组子的筛选 | 第62-63页 |
| 4.4.4 植物乳杆菌DMDL9010 亚硝酸降解机理 | 第63-64页 |
| 4.5 本章小结 | 第64-65页 |
| 结论与展望 | 第65-67页 |
| 一 结论 | 第65-66页 |
| 二 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 附件 | 第80页 |
