| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略符号对照表 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 脂肪酸概述 | 第10页 |
| 1.2 多不饱和脂肪酸的功能 | 第10-12页 |
| 1.2.1 多不饱和脂肪酸对细胞膜功能的作用 | 第10-11页 |
| 1.2.2 多不饱和脂肪酸对免疫功能的调节作用 | 第11页 |
| 1.2.3 多不饱和脂肪酸的抗炎作用 | 第11页 |
| 1.2.4 多不饱和脂肪酸的其他作用 | 第11-12页 |
| 1.3 微生物脂质合成研究进展 | 第12-15页 |
| 1.4 高山被孢霉脂质合成研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 1.6 主要研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 高山被孢霉脂质合成过程中相关基因的转录调控 | 第19-30页 |
| 2.1 前言 | 第19-20页 |
| 2.2 转录组数据的比对分析 | 第20页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第20-29页 |
| 2.3.1 高山被孢霉氮代谢途径对氮饥饿的应激反应 | 第20-21页 |
| 2.3.2 高山被孢霉脂质合成过程中碳代谢通路转录调控 | 第21-27页 |
| 2.3.3 高山被孢霉脂质合成过程中 NADPH 代谢的转录调控 | 第27-29页 |
| 2.4 本章小结 | 第29-30页 |
| 第三章 高山被孢霉遗传操作系统构建 | 第30-54页 |
| 3.1 前言 | 第30-33页 |
| 3.2 材料与设备 | 第33-38页 |
| 3.2.1 供试菌株与质粒 | 第33-34页 |
| 3.2.2 培养基及相关溶液 | 第34-36页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第36页 |
| 3.2.4 主要仪器和设备 | 第36-37页 |
| 3.2.5 PCR 引物 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-46页 |
| 3.3.1 培养方法 | 第38页 |
| 3.3.2 高山被孢霉基因组 DNA 的提取 | 第38页 |
| 3.3.3 PCR 扩增及产物纯化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 大肠杆菌电转化感受态的制备与转化 | 第39-40页 |
| 3.3.5 根癌农杆菌电转化感受态的制备与转化 | 第40页 |
| 3.3.6 大肠杆菌质粒 DNA 的提取 | 第40-41页 |
| 3.3.7 DNA 琼脂糖凝胶电泳及切胶回收 | 第41页 |
| 3.3.8 DNA 的酶切与连接 | 第41-42页 |
| 3.3.9 质粒的构建 | 第42-44页 |
| 3.3.10 农杆菌介导转化高山被孢霉 | 第44-45页 |
| 3.3.11 高山被孢霉脂质提取与检测 | 第45-46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46-53页 |
| 3.4.1 基因敲除质粒的构建 | 第46-47页 |
| 3.4.2 高山被孢霉尿嘧啶营养缺陷型菌株的筛选和鉴定 | 第47-49页 |
| 3.4.3 农杆菌介导转化高山被孢霉尿嘧啶营养缺陷型菌株 | 第49-51页 |
| 3.4.4 质粒 pBIG2-ura5s-ITs 的构建 | 第51-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 苹果酸酶提供的还原力在高山被孢霉脂质合成过程中的作用 | 第54-79页 |
| 4.1 前言 | 第54-55页 |
| 4.2 材料与设备 | 第55-59页 |
| 4.2.1 供试菌株和质粒 | 第55-56页 |
| 4.2.2 培养基及相关溶液 | 第56-57页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第57页 |
| 4.2.4 主要仪器和设备 | 第57-58页 |
| 4.2.5 PCR 引物 | 第58-59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-64页 |
| 4.3.1 高山被孢霉总 RNA 提取 | 第59-60页 |
| 4.3.2 反转录合成 cDNA | 第60页 |
| 4.3.3 质粒的构建 | 第60-62页 |
| 4.3.4 Western blot | 第62-63页 |
| 4.3.5 苹果酸酶酶活测定 | 第63页 |
| 4.3.6 基因转录水平的 RT-qPCR 检测 | 第63-64页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第64-78页 |
| 4.4.1 苹果酸酶表达质粒与 RNAi 质粒的构建 | 第64页 |
| 4.4.2 苹果酸酶基因的过表达对高山被孢霉脂质合成的影响 | 第64-75页 |
| 4.4.3 苹果酸酶基因的 RNAi 对高山被孢霉脂质合成的影响 | 第75-78页 |
| 4.5 本章小结 | 第78-79页 |
| 第五章 磷酸戊糖途径提供的还原力在高山被孢霉脂质合成过程中的作用 | 第79-88页 |
| 5.1 前言 | 第79页 |
| 5.2 材料与设备 | 第79-82页 |
| 5.2.1 供试菌株和质粒 | 第79-80页 |
| 5.2.2 培养基及相关溶液 | 第80页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第80页 |
| 5.2.4 主要仪器和设备 | 第80-81页 |
| 5.2.5 PCR 引物 | 第81-82页 |
| 5.3 实验方法 | 第82页 |
| 5.3.1 质粒的构建 | 第82页 |
| 5.3.2 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶酶活测定 | 第82页 |
| 5.3.3 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶酶活测定 | 第82页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第82-87页 |
| 5.4.1 载体的构建 | 第82-83页 |
| 5.4.2 G6PD 和 6PGD 基因 RNAi 菌株的筛选和鉴定 | 第83-84页 |
| 5.4.3 G6PD 和 6PGD 基因的 RNAi 对高山被孢霉脂质合成的影响 | 第84-87页 |
| 5.5 本章小结 | 第87-88页 |
| 主要结论与展望 | 第88-89页 |
| 创新点 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 附录：攻读博士学位期间发表论文及专利申请情况 | 第102页 |
