| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 红曲菌概述 | 第13-22页 |
| ·红曲菌的分类 | 第13-14页 |
| ·红曲菌属在真菌中的地位 | 第13-14页 |
| ·红曲菌种的分类 | 第14页 |
| ·红曲菌的生物学特性 | 第14-15页 |
| ·红曲菌的代谢物 | 第15-17页 |
| ·红曲色素 | 第15-16页 |
| ·脂肪酸和有机酸 | 第16页 |
| ·药理、抑菌作用类物质 | 第16-17页 |
| ·酶类活性物质 | 第17页 |
| ·微生物酯酶研究现状 | 第17-22页 |
| ·微生物酯酶酶学性质 | 第18页 |
| ·微生物酯酶测定方法 | 第18-20页 |
| ·微生物酯酶的应用现状 | 第20-22页 |
| 2 同工酶标记技术的应用 | 第22-23页 |
| ·同工酶的分析方法 | 第22页 |
| ·同工酶在红曲菌分类鉴定中的应用 | 第22-23页 |
| 3 分子生物学方法的应用 | 第23-25页 |
| ·研究对象及方法 | 第23-24页 |
| ·分子生物学方法在红曲菌中的应用 | 第24-25页 |
| 4 立题依据及意义 | 第25-26页 |
| 5 研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 红曲菌的分离及形态学鉴定 | 第27-35页 |
| 1 引言 | 第27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-29页 |
| ·试验材料 | 第27-28页 |
| ·菌种来源 | 第27页 |
| ·分离培养基 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要设备 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-29页 |
| ·红曲菌的分离、培养 | 第28-29页 |
| ·菌种的形态学鉴定 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-33页 |
| ·红曲菌的分离 | 第29-30页 |
| ·红曲菌菌落形态观察 | 第30-31页 |
| ·红曲菌显微形态观察 | 第31-33页 |
| ·供试菌株的鉴定结果 | 第33页 |
| 4 小结与讨论 | 第33-35页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 红曲菌的酯酶同工酶分析 | 第35-41页 |
| 1 引言 | 第35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-37页 |
| ·试验材料 | 第35-36页 |
| ·供试菌株 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要设备 | 第35-36页 |
| ·主要缓冲液配制 | 第36页 |
| ·试验方法 | 第36-37页 |
| ·电泳样品的制备 | 第36页 |
| ·电泳条件 | 第36页 |
| ·酯酶同工酶检测 | 第36-37页 |
| ·迁移率计算 | 第37页 |
| ·聚类分析 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-39页 |
| ·酯酶同工酶电泳图谱分析 | 第37-38页 |
| ·聚类分析 | 第38-39页 |
| 4 小结与讨论 | 第39-41页 |
| ·小结 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 红曲菌核糖体rDNA 5.8S、ITS及18S区序列分析 | 第41-55页 |
| 1 引言 | 第41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-45页 |
| ·试验材料 | 第41-42页 |
| ·供试菌株 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要设备 | 第42页 |
| ·试验方法 | 第42-45页 |
| ·红曲菌基因组DNA提取与检测 | 第42-43页 |
| ·红曲菌5.8S、ITS区的PCR扩增及检测 | 第43页 |
| ·红曲菌18S rDNA的PCR扩增及DGGE分析 | 第43-45页 |
| ·红曲菌rDNA基因序列测定 | 第45页 |
| ·红曲菌5.8S、ITS、18S rDNA序列测定及分析 | 第45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-53页 |
| ·总DNA的检测 | 第45-46页 |
| ·红曲菌5.8S、ITS、18S rDNA的PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·红曲菌18S区PCR-DGGE图谱及相似性分析 | 第47-48页 |
| ·PCR-DGGE图谱分析 | 第47-48页 |
| ·红曲菌rDNA 5.8S、ITS、18S系统进化树 | 第48-52页 |
| ·红曲菌rDNA 5.8S系统进化树 | 第49-50页 |
| ·红曲菌rDNA ITS1系统进化树 | 第50-51页 |
| ·红曲菌rDNA ITS2系统进化树 | 第51-52页 |
| ·红曲菌rDNA 18S区系统进化树 | 第52页 |
| ·红曲菌rDNA ITS、18S序列登录号 | 第52-53页 |
| 4 小结与讨论 | 第53-55页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 红曲菌酯酶活力测定及产酶条件优化 | 第55-65页 |
| 1 引言 | 第55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-59页 |
| ·试验材料 | 第55-56页 |
| ·供试菌株 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要设备 | 第55-56页 |
| ·试验方法 | 第56-59页 |
| ·酯酶活力测定 | 第56-57页 |
| ·酯化酶含量的测定 | 第57-58页 |
| ·红曲菌产酯酶条件优化 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-63页 |
| ·红曲菌株酯酶含量 | 第59页 |
| ·红曲菌酯化酶含量 | 第59-60页 |
| ·红曲菌产酯酶条件优化结果 | 第60-63页 |
| ·培养温度对红曲菌产酯酶的影响 | 第60页 |
| ·培养基初始pH对红曲菌产酯酶的影响 | 第60-61页 |
| ·培养时间对红曲菌产酯酶的影响 | 第61页 |
| ·接种量对红曲菌产酯酶的影响 | 第61-62页 |
| ·正交试验结果分析 | 第62-63页 |
| 4 小结与讨论 | 第63-65页 |
| ·小结 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 酯酶初步纯化及部分酶学性质的研究 | 第65-80页 |
| 1 引言 | 第65页 |
| 2 材料与方法 | 第65-69页 |
| ·试验材料 | 第65-66页 |
| ·供试菌株 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65-66页 |
| ·主要设备 | 第66页 |
| ·试验方法 | 第66-69页 |
| ·酯酶活力测定 | 第66页 |
| ·Bradford考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 | 第66-67页 |
| ·透析除盐 | 第67页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第67-68页 |
| ·Sephadex G25层析 | 第68页 |
| ·聚乙二醇浓缩 | 第68页 |
| ·酯酶部分酶学性质研究 | 第68-69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-78页 |
| ·硫酸铵初级沉淀结果 | 第69-70页 |
| ·硫酸铵次级沉淀结果 | 第70-71页 |
| ·Sephadex G25层析 | 第71-72页 |
| ·酯酶胞内酶层析 | 第71-72页 |
| ·酯酶胞外酶层析 | 第72页 |
| ·纯化效果的评价 | 第72-74页 |
| ·胞内酯酶纯化效果评价 | 第72-73页 |
| ·胞外酯酶纯化效果评价 | 第73-74页 |
| ·酯酶部分酶学性质研究结果 | 第74-78页 |
| ·酯酶最适温度及热稳定性研究 | 第74-75页 |
| ·酯酶最适pH及pH稳定性研究 | 第75-76页 |
| ·不同化学物质对酯酶活性影响 | 第76-77页 |
| ·金属离子对酯酶酶活性的影响 | 第77-78页 |
| 4 小结与讨论 | 第78-80页 |
| ·小结 | 第78页 |
| ·硫酸铵分级沉淀结果 | 第78页 |
| ·Sephadex G25层析 | 第78页 |
| ·酯酶部分酶学性质结果 | 第78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| 第七章 总结 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 附录1.1 红曲菌属分类检索表(Ainsworth分类系统) | 第91-92页 |
| 附录1.2 红曲菌属分种检索表(李钟庆和郭芳,2003) | 第92-93页 |
| 附录1.3 供试菌株的典型菌落形态照片 | 第93-97页 |
