| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-30页 |
| 1.1 玉米赤霉烯酮 | 第13-14页 |
| 1.1.1 理化性质与生理毒性 | 第13-14页 |
| 1.1.2 限量标准及检测方法 | 第14页 |
| 1.2 ZEN的脱毒研究 | 第14-19页 |
| 1.2.1 ZEN的脱毒现状 | 第14-16页 |
| 1.2.2 ZEN的生物脱毒研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.3 ZEN的生物降解脱毒机制 | 第17-19页 |
| 1.3 过氧化物酶 | 第19-20页 |
| 1.3.1 亚铁血红素过氧化物酶 | 第19-20页 |
| 1.3.2 硫氧还蛋白依赖的过氧化物酶 | 第20页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第20-23页 |
| 1.4.1 外源蛋白表达系统 | 第21-22页 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达系统概述 | 第22-23页 |
| 1.4.3 毕赤酵母表达系统的优缺点 | 第23页 |
| 1.5 蛋白质的纯化技术概述 | 第23-27页 |
| 1.5.1 蛋白质的预处理 | 第24-25页 |
| 1.5.2 蛋白质的精制纯化过程 | 第25-26页 |
| 1.5.3 蛋白质纯化过程中的问题 | 第26-27页 |
| 1.6 本论文研究意义和内容 | 第27-30页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第27-28页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第28-30页 |
| 第二章 重组过氧化物酶A4-Prx的纯化 | 第30-44页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第30-33页 |
| 2.1.1 菌株 | 第30-31页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第31页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第31页 |
| 2.1.4 培养基和缓冲液 | 第31-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 2.2.1 重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115/pPIC9k-A4-Prx的活化 | 第33页 |
| 2.2.2 毕赤酵母Pichia pastoris GS115/pPIC9k-A4-Prx中的扩大培养 | 第33页 |
| 2.2.3 重组过氧化物酶A4-Prx在毕赤酵母中的诱导表达 | 第33页 |
| 2.2.4 两种蛋白沉淀方法的处理效果比较 | 第33-34页 |
| 2.2.5 凝胶过滤Sephadex G-100 凝胶柱纯化 | 第34页 |
| 2.2.6 离子交换Sephadex DEAE-52 柱纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.7 重组过氧化物酶A4-Prx的SDS-PAGE电泳分析 | 第35页 |
| 2.2.8 重组过氧化物酶A4-Prx的ZEN降解能力测定 | 第35-36页 |
| 2.2.9 蛋白含量和过氧化物酶酶活测定 | 第36-37页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第37-42页 |
| 2.3.1 两种沉淀方法的处理结果比较 | 第37-38页 |
| 2.3.2 透析酶液的凝胶过滤Sephadex G-100 柱纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.3 离子交换Sephadex DEAE-52 柱纯化 | 第39-40页 |
| 2.3.4 重组过氧化物酶A4-Prx的SDS-PAGE电泳分析 | 第40-41页 |
| 2.3.5 重组过氧化物酶A4-Prx的ZEN降解能力测定 | 第41-42页 |
| 2.3.6 纯化过程中的蛋白含量和过氧化物酶酶活的变化 | 第42页 |
| 2.4 本章小结 | 第42-44页 |
| 第三章 重组过氧化物酶A4-Prx的酶学特性研究 | 第44-55页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第44-45页 |
| 3.1.1 主要原料 | 第44-45页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 3.1.3 主要仪器和设备 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.2.1 pH对A4-Prx过氧化物酶酶活的影响 | 第45页 |
| 3.2.2 温度对A4-Prx过氧化物酶酶活的影响 | 第45页 |
| 3.2.3 过氧化氢对重组蛋白A4-Prx的过氧化物酶酶活影响 | 第45-46页 |
| 3.2.4 苯酚对重组蛋白A4-Prx的过氧化物酶活力影响 | 第46页 |
| 3.2.5 4-氨基安替吡啉对重组蛋白A4-Prx的过氧化物酶活力影响 | 第46页 |
| 3.2.6 EDTA对重组蛋白A4-Prx的过氧化物酶活力的影响 | 第46页 |
| 3.2.7 叠氮钠对重组蛋白A4-Prx的过氧化物酶活力的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.8 重组蛋白A4-Prx中血红素含量的测定 | 第47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-54页 |
| 3.3.1 pH对A4-Prx的过氧化物酶活力的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.2 温度对A4-Prx的过氧化物酶活力的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.3 过氧化氢对A4-Prx的过氧化物酶活力的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.4 苯酚对A4-Prx的过氧化物酶活力的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.5 4-氨基安替吡啉对A4-Prx的过氧化物酶活力的影响 | 第51页 |
| 3.3.6 EDTA对A4-Prx的过氧化物酶活力的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.7 叠氮钠对A4-Prx的过氧化物酶活力的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.8 重组过氧化物酶A4-Prx的血红素含量分析 | 第53-54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章A4-Prx降解ZEN的产物分析 | 第55-67页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第55-56页 |
| 4.1.1 材料 | 第55-56页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第56页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-58页 |
| 4.2.1 过氧化物酶A4-Prx进行ZEN降解反应 | 第56页 |
| 4.2.2 乙酸乙酯萃取反应液 | 第56-57页 |
| 4.2.3 薄层层析色谱的展开剂的确定 | 第57页 |
| 4.2.4 薄层层析法分析反应产物 | 第57-58页 |
| 4.2.5 红外色谱技术检测反应产物结构 | 第58页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第58-66页 |
| 4.3.1 HPLC法分析ZEN残留量 | 第58-59页 |
| 4.3.2 乙酸乙酯萃取反应 | 第59-60页 |
| 4.3.3 薄层层析色谱展开剂的确定 | 第60-61页 |
| 4.3.4 薄层层析色谱一次分离反应产物 | 第61-62页 |
| 4.3.5 薄层层析色谱二次分离反应产物 | 第62-63页 |
| 4.3.6 红外色谱技术检测反应产物结构 | 第63-66页 |
| 4.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 结论与展望 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 附件 | 第80页 |
