| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-25页 |
| ·概述 | 第12-14页 |
| ·谷胱甘肽的分布、结构及性质 | 第12-14页 |
| ·谷胱甘肽的功能和应用前景 | 第14页 |
| ·谷胱甘肽的生产方法 | 第14-15页 |
| ·溶剂萃取法 | 第14-15页 |
| ·化学合成法 | 第15页 |
| ·酶转化法 | 第15页 |
| ·发酵法 | 第15页 |
| ·发酵法生产谷胱甘肽的研究进展 | 第15-21页 |
| ·菌种的选育 | 第15-18页 |
| ·发酵过程中的控制与优化 | 第18-21页 |
| ·谷胱甘肽的检测方法 | 第21-24页 |
| ·本课题研究的意义、目的及内容 | 第24-25页 |
| 第2章 高产谷胱甘肽酿酒酵母中 GSH1、GSH2 基因的扩增与表达菌株的构建 | 第25-41页 |
| ·前言 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·菌株及质粒 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·培养基和试剂配制 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-35页 |
| ·GSH1、GSH2 基因的获得 | 第28-30页 |
| ·T 载体连接产物转化与鉴定 | 第30-33页 |
| ·GSH1、GSH2 基因片段与表达载体连接及转化 | 第33页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第33-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·酿酒酵母基因组 DNA 的提取 | 第35页 |
| ·GSH1、GSH2 基因的 PCR 扩增、纯化及回收 | 第35页 |
| ·PCR 产物与 T 载体连接、转化及鉴定 | 第35-37页 |
| ·表达载体构建、转化及鉴定 | 第37-39页 |
| ·诱导表达及 SDS-PAGE 分析 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第3章 GSH1 重组蛋白纯化及酶学性质研究 | 第41-56页 |
| ·前言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-43页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·培养基和试剂配制 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·诱导表达条件优化 | 第43-44页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第44页 |
| ·GSH 重组蛋白纯化 | 第44-45页 |
| ·GSH1 重组蛋白性质研究 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-55页 |
| ·温度对 IPTG 诱导表达的影响 | 第46-47页 |
| ·诱导时间对 IPTG 诱导表达的影响 | 第47页 |
| ·IPTG 添加量对 IPTG 诱导表达的影响 | 第47-48页 |
| ·GSH1 重组蛋白纯化 | 第48-51页 |
| ·蛋白质测定的标准曲线 | 第51-52页 |
| ·无机磷测定的标准曲线 | 第52页 |
| ·pH 和温度对重组蛋白酶活的影响 | 第52-53页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第53-54页 |
| ·表面活性剂对酶活的影响 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 第4章 GSH2 重组蛋白纯化及酶学性质研究 | 第56-65页 |
| ·前言 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·菌株 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·培养基和试剂配制 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-58页 |
| ·诱导表达条件优化 | 第56-57页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第57页 |
| ·GSH2 重组蛋白纯化 | 第57页 |
| ·GSH2 重组蛋白性质研究 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-64页 |
| ·温度对 IPTG 诱导表达的影响 | 第58-59页 |
| ·GSH2 重组蛋白纯化 | 第59-62页 |
| ·pH 和温度对重组蛋白酶活的影响 | 第62页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第62-63页 |
| ·表面活性剂对酶活的影响 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 第5章 基于 GSH1、GSH2 的酶学性质调控谷胱甘肽发酵 | 第65-76页 |
| ·前言 | 第65页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·菌株 | 第65页 |
| ·培养基及试剂配制 | 第65-66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-68页 |
| ·菌种活化及种子液培养条件 | 第66页 |
| ·发酵罐流加发酵的控制 | 第66-67页 |
| ·细胞生物量测定 | 第67页 |
| ·发酵液中酒精含量的测定 | 第67页 |
| ·谷胱甘肽的抽提 | 第67页 |
| ·谷胱甘肽的高效液相色谱检测 | 第67-68页 |
| ·发酵 pH 优化 | 第68页 |
| ·发酵温度优化 | 第68页 |
| ·不同浓度 SDS 对发酵产 GSH 的影响 | 第68页 |
| ·pH、温度、SDS 综合调节对发酵产 GSH 的影响 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-75页 |
| ·谷胱甘肽的高效液相色谱检测 | 第68-69页 |
| ·初始发酵条件下实验结果 | 第69-70页 |
| ·发酵 pH 优化的实验结果 | 第70-71页 |
| ·发酵温度优化的实验结果 | 第71-72页 |
| ·SDS 添加对发酵的影响 | 第72-73页 |
| ·pH、温度、SDS 综合调节发酵结果 | 第73-75页 |
| ·本章小结 | 第75-76页 |
| 第6章 总结与展望 | 第76-78页 |
| ·总结 | 第76-77页 |
| ·创新点 | 第77页 |
| ·展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附录 | 第85页 |
