| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第16-30页 |
| 1.1 引言 | 第16页 |
| 1.2 小麦胚芽的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.1 小麦胚芽油 | 第17页 |
| 1.2.2 麦胚蛋白及多肽 | 第17-19页 |
| 1.2.3 麦胚提取物的生理活性 | 第19-20页 |
| 1.2.3.1 抗氧化性 | 第19页 |
| 1.2.3.2 抗肿瘤和提高免疫力 | 第19-20页 |
| 1.3 免疫调节蛋白的研究进展 | 第20-25页 |
| 1.3.1 免疫调节蛋白的种类 | 第20-22页 |
| 1.3.1.1 免疫球蛋白 | 第20页 |
| 1.3.1.2 糖蛋白 | 第20-21页 |
| 1.3.1.3 真菌免疫调节蛋白 | 第21页 |
| 1.3.1.4 免疫活性肽 | 第21-22页 |
| 1.3.2 免疫评价体系及调节机制 | 第22-25页 |
| 1.3.2.1 免疫评价体系 | 第22-25页 |
| 1.3.2.2 免疫调节机制 | 第25页 |
| 1.4 生物活性肽的分离纯化及结构鉴定研究进展 | 第25-27页 |
| 1.4.1 分离纯化研究进展 | 第25-27页 |
| 1.4.1.1 膜分离 | 第26页 |
| 1.4.1.2 色谱分离 | 第26页 |
| 1.4.1.3 毛细管电泳分离 | 第26-27页 |
| 1.4.2 结构鉴定研究进展 | 第27页 |
| 1.5 本课题研究的立题依据和主要研究内容 | 第27-30页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第27-28页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第28-30页 |
| 第二章 脱脂麦胚蛋白的分级提取、理化性质、功能特性和免疫活性研究 | 第30-53页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第30-33页 |
| 2.2.1 原料 | 第30页 |
| 2.2.2 实验材料与试剂 | 第30-32页 |
| 2.2.3 主要仪器与设备 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-38页 |
| 2.3.1 原料基本成分的测定 | 第33页 |
| 2.3.2 脱脂麦胚蛋白的分级提取和蛋白提取率的测定 | 第33-34页 |
| 2.3.3 脱脂麦胚中各蛋白的体外模拟消化 | 第34页 |
| 2.3.4 脱脂麦胚中各蛋白的氨基酸组成、营养评价和疏水性评价 | 第34页 |
| 2.3.5 脱脂麦胚中各蛋白的SDS-PAGE | 第34-35页 |
| 2.3.6 脱脂麦胚中各蛋白的巯基SH和二硫键S-S的测定 | 第35-36页 |
| 2.3.7 傅立叶红外光谱(FT-IR)分析不同麦胚球蛋白酶解物的二级结构 | 第36页 |
| 2.3.8 脱脂麦胚中各蛋白的功能特性 | 第36-37页 |
| 2.3.8.1 溶解性 | 第36页 |
| 2.3.8.2 起泡性和泡沫稳定性 | 第36页 |
| 2.3.8.3 乳化性和乳化稳定性 | 第36-37页 |
| 2.3.8.4 持水性与吸油性 | 第37页 |
| 2.3.9 脱脂麦胚中各蛋白的免疫活性 | 第37-38页 |
| 2.3.9.1 内毒素的测定 | 第37页 |
| 2.3.9.2 RAW 264.7 细胞的培养 | 第37页 |
| 2.3.9.3 细胞存活率 | 第37-38页 |
| 2.3.9.4 吞噬中性红 | 第38页 |
| 2.3.9.5 NO和细胞因子的测定 | 第38页 |
| 2.3.10 数据分析 | 第38页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第38-52页 |
| 2.4.1 脱脂麦胚的主要成分 | 第38-39页 |
| 2.4.2 四种蛋白的蛋白含量、体外消化率、氨基酸组成和营养成分分析 | 第39-41页 |
| 2.4.3 四种蛋白的SDS-PAGE | 第41-42页 |
| 2.4.4 四种蛋白的巯基SH和二硫键S-S的测定 | 第42-43页 |
| 2.4.5 FT-IR分析四种蛋白的二级结构 | 第43-44页 |
| 2.4.6 四种蛋白的功能特性 | 第44-48页 |
| 2.4.6.1 溶解性 | 第44-45页 |
| 2.4.6.2 起泡性和泡沫稳定性 | 第45页 |
| 2.4.6.3 乳化性和乳化稳定性 | 第45-47页 |
| 2.4.6.4 持水性与吸油性 | 第47-48页 |
| 2.4.7 四种蛋白的免疫活性 | 第48-52页 |
| 2.4.7.1 内毒素的测定 | 第48页 |
| 2.4.7.2 四种蛋白对RAW 264.7 细胞存活率的影响 | 第48页 |
| 2.4.7.3 四种蛋白对RAW 264.7 细胞吞噬中性红的影响 | 第48-49页 |
| 2.4.7.4 四种蛋白对RAW 264.7 细胞产NO能力的影响 | 第49页 |
| 2.4.7.5 四种蛋白对RAW 264.7 细胞产细胞因子能力的影响 | 第49-52页 |
| 2.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 麦胚球蛋白的酶解工艺及免疫活性研究 | 第53-72页 |
| 3.1 引言 | 第53页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第53-56页 |
| 3.2.1 原料 | 第53页 |
| 3.2.2 实验材料与试剂 | 第53-55页 |
| 3.2.3 主要仪器与设备 | 第55-56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-58页 |
| 3.3.1 麦胚球蛋白酶解物的制备 | 第56页 |
| 3.3.2 麦胚球蛋白酶解物水解度(DH)的测定 | 第56-57页 |
| 3.3.3 麦胚球蛋白酶解物可溶性肽含量的测定 | 第57页 |
| 3.3.4 DA201-C大孔吸附树脂纯化麦胚球蛋白酶解物 | 第57-58页 |
| 3.3.5 不同麦胚球蛋白酶解物的分子量分布 | 第58页 |
| 3.3.6 不同麦胚球蛋白酶解物的氨基酸组成和疏水性评价 | 第58页 |
| 3.3.7 FT-IR分析不同麦胚球蛋白酶解物的二级结构 | 第58页 |
| 3.3.8 不同麦胚球蛋白酶解物的免疫活性 | 第58页 |
| 3.3.9 不同时间段对碱性蛋白酶解物的理化性质及免疫活性的影响 | 第58页 |
| 3.3.9.1 不同时间段碱性蛋白酶解物的制备和水解度的测定 | 第58页 |
| 3.3.9.2 不同时间段碱性蛋白酶解物的分子量分布 | 第58页 |
| 3.3.9.3 不同时间段碱性蛋白酶解物的氨基酸组成和疏水性评价 | 第58页 |
| 3.3.9.4 不同时间段碱性蛋白酶解物的免疫活性 | 第58页 |
| 3.3.10 数据分析 | 第58页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第58-71页 |
| 3.4.1 麦胚球蛋白的水解 | 第58-59页 |
| 3.4.2 麦胚球蛋白酶解物的分子量分布 | 第59-61页 |
| 3.4.3 麦胚球蛋白及其酶解物的氨基酸组成和疏水性评价 | 第61页 |
| 3.4.4 麦胚球蛋白及其酶解物的二级结构分析 | 第61-64页 |
| 3.4.5 麦胚球蛋白及其酶解物的免疫活性 | 第64-68页 |
| 3.4.5.1 对RAW 264.7 细胞存活率的影响 | 第64页 |
| 3.4.5.2 麦胚球蛋白及其酶解物对RAW 264.7 细胞吞噬中性红的影响 | 第64-65页 |
| 3.4.5.3 麦胚球蛋白及其酶解物对RAW 264.7 细胞产NO能力的影响 | 第65页 |
| 3.4.5.4 麦胚球蛋白及其酶解物对RAW 264.7 细胞产细胞因子能力的影响 | 第65-68页 |
| 3.4.6 不同时间对碱性蛋白酶解物的影响 | 第68-71页 |
| 3.4.6.1 不同时间对碱性蛋白酶解物DH、分子量分布和疏水性的影响 | 第68页 |
| 3.4.6.2 不同时间对碱性蛋白酶解物免疫活性的影响 | 第68-71页 |
| 3.5 本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 麦胚球蛋白碱性蛋白酶酶解物的功能特性和体外模拟胃肠道消化的研究 | 第72-85页 |
| 4.1 引言 | 第72页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第72-74页 |
| 4.2.1 原料 | 第72页 |
| 4.2.2 实验材料与试剂 | 第72-73页 |
| 4.2.3 主要仪器与设备 | 第73-74页 |
| 4.3 实验方法 | 第74-75页 |
| 4.3.1 AH的紫外扫描 | 第74页 |
| 4.3.2 AH的功能特性 | 第74页 |
| 4.3.3 模拟胃肠道消化AH | 第74页 |
| 4.3.4 DA201-C大孔树脂纯化AH及其消化产物 | 第74页 |
| 4.3.5 AH及其消化产物分子量分布、氨基酸组成和疏水值评价 | 第74页 |
| 4.3.6 FT-IR分析AH及其消化产物的二级结构 | 第74页 |
| 4.3.7 AH及其消化产物的免疫活性 | 第74-75页 |
| 4.3.8 数据分析 | 第75页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第75-84页 |
| 4.4.1 AH的紫外扫描 | 第75页 |
| 4.4.2 AH的功能特性 | 第75-78页 |
| 4.4.2.1 溶解性 | 第75-76页 |
| 4.4.2.2 起泡性和泡沫稳定性 | 第76页 |
| 4.4.2.3 乳化性和乳化稳定性 | 第76-78页 |
| 4.4.2.4 持水性和吸油性 | 第78页 |
| 4.4.3 体外模拟胃肠道消化产物的氨基酸组成 | 第78-80页 |
| 4.4.4 体外模拟胃肠道消化产物的分子量分布 | 第80-81页 |
| 4.4.5 体外模拟胃肠道消化产物的二级结构分析 | 第81页 |
| 4.4.6 体外模拟胃肠道消化产物的免疫活性 | 第81-84页 |
| 4.4.6.1 碱性蛋白酶解物及其消化产物对RAW264.7 细胞存活率的影响 | 第81-82页 |
| 4.4.6.2 碱性蛋白酶解物及其消化产物对RAW 264.7 细胞吞噬中性红能力的影响 | 第82页 |
| 4.4.6.3 碱性蛋白酶解物及其消化产物对RAW 264.7 细胞产NO能力的影响 | 第82页 |
| 4.4.6.4 碱性蛋白酶解物及其消化产物对RAW 264.7 细胞产细胞因子能力的影响 | 第82-84页 |
| 4.5 本章小结 | 第84-85页 |
| 第五章 麦胚球蛋白碱性蛋白酶解物的分离纯化、结构鉴定及免疫机理探究 | 第85-106页 |
| 5.1 前言 | 第85页 |
| 5.2 材料与仪器 | 第85-88页 |
| 5.2.1 原料 | 第85页 |
| 5.2.2 实验材料与试剂 | 第85-87页 |
| 5.2.3 主要仪器与设备 | 第87-88页 |
| 5.3 实验方法 | 第88-92页 |
| 5.3.1 麦胚球蛋白多肽(AH)的分离纯化 | 第88页 |
| 5.3.1.1 DEAE Sepharose FF阴离子交换柱分离纯化 | 第88页 |
| 5.3.1.2 Sephadex G-15 分离纯化 | 第88页 |
| 5.3.1.3 半制备型RP-HPLC柱分离纯化 | 第88页 |
| 5.3.2 基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定多肽序列 | 第88页 |
| 5.3.3 不同分离纯化所得组分的免疫活性 | 第88-89页 |
| 5.3.3.1 细胞存活率 | 第89页 |
| 5.3.3.2 吞噬中性红 | 第89页 |
| 5.3.3.3 NO和细胞因子的测定 | 第89页 |
| 5.3.3.4 活性氧物质 (ROS)的测定 | 第89页 |
| 5.3.4 麦胚球蛋白多肽纯化物的免疫机制探究 | 第89-91页 |
| 5.3.4.1 内毒素的测定 | 第89页 |
| 5.3.4.2 吞噬异硫氰酸荧光素(FITC)标记的大肠杆菌(E.coli) | 第89页 |
| 5.3.4.3 QPCR分析mRNA的表达 | 第89-91页 |
| 5.3.4.4 RAW 264.7 细胞表面受体识别和信号通路推测 | 第91页 |
| 5.3.5 数据分析 | 第91-92页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第92-105页 |
| 5.4.1 DEAE sepharose FF阴离子交换柱分离纯化及各组分免疫活性 | 第92-95页 |
| 5.4.2 Sephadex G-15 分离纯化及各组分免疫活性 | 第95-98页 |
| 5.4.3 半制备RP-HPLC分离纯化及结构鉴定 | 第98-100页 |
| 5.4.4 免疫机制探究 | 第100-105页 |
| 5.4.4.1 内毒素的测定 | 第100页 |
| 5.4.4.2 吞噬FITC标记的E.coli | 第100页 |
| 5.4.4.3 P311 对RAW 264.7 细胞内细胞因子的mRNA表达量的影响 | 第100-101页 |
| 5.4.4.4 P311 对RAW264.7 细胞表面膜受体的识别 | 第101-103页 |
| 5.4.4.5 P311 激活 264.7 细胞可能存在的信号转导通路 | 第103-105页 |
| 5.5 本章小结 | 第105-106页 |
| 第六章 麦胚球蛋白碱性蛋白酶解物的抗炎和细胞抗氧化研究 | 第106-118页 |
| 6.1 前言 | 第106页 |
| 6.2 材料与仪器 | 第106-108页 |
| 6.2.1 原料 | 第106-107页 |
| 6.2.2 实验材料与试剂 | 第107-108页 |
| 6.2.3 主要仪器与设备 | 第108页 |
| 6.3 实验方法 | 第108-110页 |
| 6.3.1 抗炎 | 第108-109页 |
| 6.3.1.1 抗炎模型的建立 | 第108页 |
| 6.3.1.2 NO和细胞因子的测定 | 第108-109页 |
| 6.3.2 红细胞氧化溶血 | 第109-110页 |
| 6.3.2.1 红细胞悬液的制备和P3-1 对红细胞的保护作用 | 第109页 |
| 6.3.2.2 溶血率的测定 | 第109页 |
| 6.3.2.3 扫描电镜(SEM) | 第109页 |
| 6.3.2.4 红细胞内ROS的测定 | 第109-110页 |
| 6.3.2.5 红细胞内蛋白含量的测定 | 第110页 |
| 6.3.2.6 红细胞内抗氧化物酶活性的测定 | 第110页 |
| 6.3.3 数据分析 | 第110页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第110-117页 |
| 6.4.1 P3-1 的抗炎功效 | 第110-113页 |
| 6.4.2 红细胞氧化溶血 | 第113-117页 |
| 6.4.2.1 P3-1 对红细胞的保护作用 | 第113页 |
| 6.4.2.2 P3-1 对红细胞形态的保护作用 | 第113-114页 |
| 6.4.2.3 P3-1 对红细胞产ROS的影响 | 第114页 |
| 6.4.2.4 P3-1 对红细胞内抗氧化物酶活性 | 第114-117页 |
| 6.5 本章小结 | 第117-118页 |
| 结论与展望 | 第118-120页 |
| 参考文献 | 第120-132页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第132-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 附件 | 第135页 |
