| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-31页 |
| 1.1 研究背景 | 第14页 |
| 1.2 血栓疾病及溶栓剂 | 第14-22页 |
| 1.2.1 血栓的形成 | 第14-17页 |
| 1.2.1.1 血液凝固 | 第14-16页 |
| 1.2.1.2 抗凝血机制 | 第16页 |
| 1.2.1.3 纤维蛋白溶解系统 | 第16-17页 |
| 1.2.1.4 血栓的形成 | 第17页 |
| 1.2.2 临床纤溶药物 | 第17-18页 |
| 1.2.3 纤溶剂的来源 | 第18-22页 |
| 1.2.3.1 动物来源的纤溶剂 | 第18-19页 |
| 1.2.3.2 植物来源的纤溶剂 | 第19页 |
| 1.2.3.3 微生物来源的纤溶剂 | 第19-22页 |
| 1.3 纳豆激酶的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.3.1 产纳豆激酶菌株的诱变和转基因构建 | 第22-23页 |
| 1.3.1.1 紫外突变筛选菌株 | 第22-23页 |
| 1.3.1.2 产纳豆激酶基因工程菌株筛选 | 第23页 |
| 1.3.2 纳豆激酶的药物学效果 | 第23-25页 |
| 1.3.3 纳豆激酶的分离纯化 | 第25-26页 |
| 1.4 双水相萃取技术 | 第26-29页 |
| 1.4.1 双水相萃取分类 | 第26页 |
| 1.4.2 双水相系统及成相机理 | 第26-28页 |
| 1.4.3 双水相体系萃取的特点 | 第28页 |
| 1.4.4 双水相体系的应用 | 第28-29页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 1.5.1 研究的意义 | 第29-30页 |
| 1.5.2 研究的目的 | 第30-31页 |
| 第二章 高产纳豆激酶菌株的诱变、筛选 | 第31-44页 |
| 2.1 材料和方法 | 第31-37页 |
| 2.1.1 菌株来源 | 第31页 |
| 2.1.2 培养基 | 第31页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第32页 |
| 2.1.5 对数期纳豆芽胞杆菌原生质体的制备 | 第32-33页 |
| 2.1.5.1 纳豆芽胞细菌浓度曲线的制备 | 第32-33页 |
| 2.1.5.2 纳豆芽胞杆菌细菌生长曲线的制备 | 第33页 |
| 2.1.6 紫外诱变 | 第33-34页 |
| 2.1.6.1 纳豆芽胞杆菌对数期原生质体致死率曲线的制定 | 第33页 |
| 2.1.6.2 紫外诱变 | 第33-34页 |
| 2.1.7 菌株初筛 | 第34页 |
| 2.1.7.1 筛选平板的制备 | 第34页 |
| 2.1.7.2 脱脂牛奶平板初筛 | 第34页 |
| 2.1.8 菌株复筛 | 第34-35页 |
| 2.1.8.1 Folin-酚法酶活力测定 | 第34-35页 |
| 2.1.8.2 液体发酵复筛 | 第35页 |
| 2.1.9 纤维蛋白平板验证 | 第35-36页 |
| 2.1.9.1 纤维蛋白平板的制备 | 第35-36页 |
| 2.1.9.2 纤维蛋白平板测定酶活标准曲线的制作 | 第36页 |
| 2.1.9.3 纤维蛋白平板测定酶活 | 第36页 |
| 2.1.10 选育所得菌株产纳豆激酶能力遗传稳定性 | 第36-37页 |
| 2.1.11 发酵培养基测定酶活 | 第37页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第37-43页 |
| 2.2.1 对数期原生质体的制备 | 第37-39页 |
| 2.2.1.1 纳豆芽胞细菌浓度曲线的制备 | 第37页 |
| 2.2.1.2 细菌生长曲线的制备 | 第37-39页 |
| 2.2.2 紫外诱变结果 | 第39页 |
| 2.2.3 菌株初筛结果 | 第39-40页 |
| 2.2.4 菌株复筛 | 第40-41页 |
| 2.2.5 纤维蛋白平板验证 | 第41-42页 |
| 2.2.6 产纳豆激酶遗传稳定性研究 | 第42-43页 |
| 2.2.7 优化的发酵培养基测定酶活 | 第43页 |
| 2.3 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 双水相萃取纳豆激酶的研究 | 第44-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-50页 |
| 3.1.1 菌种来源 | 第44页 |
| 3.1.2 培养基 | 第44页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第45页 |
| 3.1.5 主要溶液配制 | 第45-46页 |
| 3.1.5.1 SDS-PAGE缓冲液的配制 | 第45-46页 |
| 3.1.6 PEG/无机盐双水相系统相图 | 第46-48页 |
| 3.1.7 纳豆激酶双水相的制备方法 | 第48页 |
| 3.1.8 成相无机盐对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第48页 |
| 3.1.9 成相无机盐浓度对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第48页 |
| 3.1.10 不同分子量的PEG对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第48-49页 |
| 3.1.11 PEG浓度对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第49页 |
| 3.1.12 粗酶液添加量对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第49页 |
| 3.1.13 温度对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第49页 |
| 3.1.14 pH值对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第49页 |
| 3.1.15 NaCl浓度对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第49-50页 |
| 3.1.16 双水相体系直线放大试验 | 第50页 |
| 3.1.17 超滤分离纯化 | 第50页 |
| 3.2 结果和讨论 | 第50-59页 |
| 3.2.1 PEG/无机盐双水相系统相图 | 第50-51页 |
| 3.2.2 成相无机盐对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.3 K_2HPO_4浓度对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第52-53页 |
| 3.2.4 不同分子量的PEG对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第53-54页 |
| 3.2.5 PEG400浓度对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第54-55页 |
| 3.2.6 发酵液添加量对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第55-56页 |
| 3.2.7 NaCl浓度对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第56页 |
| 3.2.8 温度对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第56-57页 |
| 3.2.9 pH值对纳豆激酶萃取结果的影响 | 第57-58页 |
| 3.2.10 双水相体系直线放大试验 | 第58-59页 |
| 3.2.11 超滤分离纯化 | 第59页 |
| 3.3 本章小结 | 第59-61页 |
| 第四章 纳豆激酶的药效学研究 | 第61-72页 |
| 4.1 材料和方法 | 第61-65页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第61页 |
| 4.1.2 菌株来源 | 第61页 |
| 4.1.3 培养基 | 第61页 |
| 4.1.4 试剂 | 第61-62页 |
| 4.1.5 仪器和设备 | 第62页 |
| 4.1.6 主要溶液配制 | 第62页 |
| 4.1.7 纳豆激酶溶液的制备 | 第62-63页 |
| 4.1.7.1 纳豆激酶粗酶液的制备 | 第62-63页 |
| 4.1.7.2 纳豆激酶盐析液的制备 | 第63页 |
| 4.1.8 纳豆激酶溶液对角叉菜胶致小鼠血栓模型的溶解实验 | 第63-64页 |
| 4.1.8.1 制模角叉菜胶溶液浓度的选择 | 第63页 |
| 4.1.8.2 动物分组和给药方法 | 第63-64页 |
| 4.1.8.3 角叉菜胶致血栓模型的建立 | 第64页 |
| 4.1.9 纳豆激酶溶液对凝血时间的影响 | 第64页 |
| 4.1.9.1 动物分组及给药方法 | 第64页 |
| 4.1.9.2 小鼠凝血时间的测定 | 第64页 |
| 4.1.10 纳豆激酶溶液对出血时间的影响 | 第64-65页 |
| 4.1.10.1 动物分组及给药方法 | 第64页 |
| 4.1.10.2 小鼠出血时间的测定 | 第64-65页 |
| 4.1.11 纳豆激酶溶液对体外血凝块的水解 | 第65页 |
| 4.1.11.1 动物分组及给药方法 | 第65页 |
| 4.1.11.2 纳豆激酶溶液对体外血凝块的水解实验 | 第65页 |
| 4.2 结果和讨论 | 第65-71页 |
| 4.2.1 制模角叉菜胶溶液浓度的选择 | 第65-66页 |
| 4.2.2 给药期间小鼠体重变化 | 第66-67页 |
| 4.2.3 纳豆激酶溶液对角叉菜胶致小鼠血栓模型的影响 | 第67-69页 |
| 4.2.4 纳豆激酶溶液对小鼠凝血时间和出血时间的影响 | 第69-70页 |
| 4.2.5 纳豆激酶溶液对体外血凝块的水解 | 第70-71页 |
| 4.3 本章小结 | 第71-72页 |
| 第五章 结论 | 第72-74页 |
| 5.1 研究总结 | 第72-73页 |
| 5.2 实验创新、不足及展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
