| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩写表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1 胆盐水解酶简介 | 第13-16页 |
| 1.1 胆盐水解酶的概念 | 第13页 |
| 1.2 胆盐水解酶的来源 | 第13-14页 |
| 1.3 胆盐水解酶的特性 | 第14页 |
| 1.4 胆盐水解酶的功能 | 第14-16页 |
| 1.4.1 降胆固醇 | 第14页 |
| 1.4.2 体重减轻 | 第14-15页 |
| 1.4.3 形成胆结石 | 第15页 |
| 1.4.4 提高胆盐抗性 | 第15页 |
| 1.4.5 延长细菌肠道停留时间 | 第15-16页 |
| 1.4.6 提供营养 | 第16页 |
| 1.4.7 改变细胞膜特性 | 第16页 |
| 2 益生菌的黏附功能 | 第16-18页 |
| 2.1 益生菌的黏附性质简介 | 第16页 |
| 2.2 体外黏附细胞模型 | 第16页 |
| 2.3 微生物黏附试验方法 | 第16-17页 |
| 2.3.1 革兰氏染色法 | 第17页 |
| 2.3.2 平板计数法 | 第17页 |
| 2.3.3 荧光标记法 | 第17页 |
| 2.3.4 放射性同位素法 | 第17页 |
| 2.3.5 特异性抗体法 | 第17页 |
| 2.3.6 其他方法 | 第17页 |
| 2.4 胆盐水解酶与微生物黏附功能相关性研究进展 | 第17-18页 |
| 3 植物乳杆菌及其胆盐应激组学研究 | 第18-19页 |
| 3.1 植物乳杆菌简介 | 第18-19页 |
| 3.2 植物乳杆菌胆盐应激组学研究进展 | 第19页 |
| 4 Cre-lox系统 | 第19-21页 |
| 4.1 传统敲除方法 | 第19页 |
| 4.2 植物乳杆菌WCFS1中基因敲除研究进展 | 第19页 |
| 4.3 Cre-lox系统 | 第19-21页 |
| 5 本课题的研究内容及意义 | 第21-23页 |
| 5.1 本课题的研究内容 | 第21页 |
| 5.2 本课题的研究意义 | 第21-23页 |
| 第二章 蛋白质组学分析外源bsh的高效表达对植物乳杆菌WCFS1 (△bsh)的影响 | 第23-36页 |
| 1 材料与方法 | 第23-27页 |
| 1.1 菌株 | 第23页 |
| 1.2 培养基 | 第23-24页 |
| 1.3 试剂 | 第24页 |
| 1.4 仪器与设备 | 第24页 |
| 1.5 菌株的活化与培养 | 第24-25页 |
| 1.6 样品的处理与收集 | 第25页 |
| 1.7 iTRAQ定量蛋白质组分析 | 第25-27页 |
| 1.7.1 蛋白质提取 | 第25-26页 |
| 1.7.2 iTRAQ定量蛋白质组分析基本流程 | 第26页 |
| 1.7.3 蛋白质鉴定 | 第26-27页 |
| 2 结果 | 第27-33页 |
| 2.1 蛋白质定量结果 | 第27-28页 |
| 2.2 蛋白质SDS-PAGE结果 | 第28页 |
| 2.3 蛋白质组鉴定结果 | 第28-30页 |
| 2.3.1 肽段长度分布 | 第28-29页 |
| 2.3.2 蛋白覆盖度分布 | 第29-30页 |
| 2.3.3 Unique肽段分布 | 第30页 |
| 2.4 蛋白质GO注释和COG注释 | 第30-32页 |
| 2.4.1 蛋白质GO功能注释 | 第31-32页 |
| 2.4.2 蛋白质的COG功能注释 | 第32页 |
| 2.5 差异蛋白统计 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| 4 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 植物乳杆菌WCFS1 lp_1643基因突变菌株的构建 | 第36-50页 |
| 1 材料与方法 | 第36-44页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第36-37页 |
| 1.2 引物 | 第37页 |
| 1.3 培养基配制 | 第37页 |
| 1.4 试剂 | 第37-39页 |
| 1.5 仪器与设备 | 第39页 |
| 1.6 质粒和基因组的提取 | 第39-40页 |
| 1.6.1 质粒提取 | 第39-40页 |
| 1.6.2 乳酸菌基因组提取 | 第40页 |
| 1.7 感受态细胞的制作 | 第40-41页 |
| 1.7.1 制作大肠杆菌DH10B感受态细胞 | 第40页 |
| 1.7.2 制作植物乳杆菌WCFS1感受态细胞 | 第40-41页 |
| 1.8 转化感受态细胞 | 第41页 |
| 1.8.1 CaCl_2转化 | 第41页 |
| 1.8.2 电击转化 | 第41页 |
| 1.9 菌落PCR | 第41页 |
| 1.10 lp_1643基因突变的构建 | 第41-44页 |
| 1.10.1 lp_1643基因结构的分析 | 第41-42页 |
| 1.10.2 敲除质粒pNZ5319/lp_1643的构建 | 第42-43页 |
| 1.10.3 PCR体系和反应条件 | 第43页 |
| 1.10.4 植物乳杆菌WCFS1中lp_1643基因的敲除 | 第43-44页 |
| 1.11 分析工具 | 第44页 |
| 2 结果 | 第44-48页 |
| 2.1 lp_1643基因结构的分析 | 第44-46页 |
| 2.2 lp_1643中目标片段的敲除 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 植物乳杆菌WCFS1 △lp_1643细胞黏附性研究 | 第50-61页 |
| 1 材料与方法 | 第50-55页 |
| 1.1 菌株 | 第50页 |
| 1.2 细胞株 | 第50-51页 |
| 1.3 培养基 | 第51页 |
| 1.4 试剂 | 第51页 |
| 1.5 仪器与设备 | 第51-52页 |
| 1.6 黏附菌悬液的制备 | 第52页 |
| 1.7 结肠腺癌细胞体外黏附试验 | 第52-53页 |
| 1.7.1 细胞的传代 | 第52页 |
| 1.7.2 用于黏附试验的细胞的培养 | 第52页 |
| 1.7.3 黏附试验 | 第52-53页 |
| 1.8 菌株C、D与不同结肠腺癌细胞的黏附比较 | 第53页 |
| 1.8.1 菌株C、D与结肠腺癌细胞HT-29的黏附试验 | 第53页 |
| 1.8.2 菌株C、D与结肠腺癌细胞Caco-2的黏附试验 | 第53页 |
| 1.9 Real-time PCR细菌计数与平板计数法的比较 | 第53-54页 |
| 1.9.1 菌株培养 | 第53页 |
| 1.9.2 基因组DNA提取 | 第53页 |
| 1.9.3 Real-time PCR | 第53-54页 |
| 1.9.4 基于Real-time PCR方法和平板计数法对菌株C定量检测结果比较 | 第54页 |
| 1.10 数据分析 | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-59页 |
| 2.1 菌株C、D与不同结肠腺癌细胞的黏附比较 | 第55页 |
| 2.1.1 菌株C、D与结肠腺癌细胞HT-29的黏附试验 | 第55页 |
| 2.1.2 菌株C、D与结肠腺癌细胞Caco-2的黏附试验 | 第55页 |
| 2.2 Real-time PCR法的建立 | 第55-58页 |
| 2.2.1 特异性试验 | 第55-56页 |
| 2.2.2 灵敏度试验 | 第56页 |
| 2.2.3 标准曲线 | 第56-58页 |
| 2.3 基于Real-time PCR方法和平板计数法对菌株C定量检测结果比较 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 3.1 菌株C、D与不同结肠腺癌细胞的黏附比较 | 第59页 |
| 3.2 胆盐水解酶提高植物乳杆菌WCFS1肠道黏附的分子机理 | 第59-60页 |
| 3.3 基于Real-time PCR方法和平板计数法对菌株C定量检测结果比较 | 第60页 |
| 4 本章小结 | 第60-61页 |
| 全文总结 | 第61-62页 |
| 论文创新点 | 第62-63页 |
| 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
