| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-29页 |
| ·乳链菌肽（nisin） | 第14-19页 |
| ·Nisin 分子结构 | 第15页 |
| ·Nisin 的杀菌机制 | 第15-16页 |
| ·乳链菌肽合成有关的基因 | 第16-19页 |
| ·食品级载体在乳酸菌中的应用 | 第19-23页 |
| ·显性选择标记 | 第19-21页 |
| ·互补选择标记 | 第21-22页 |
| ·两组分食品级选择标记 | 第22-23页 |
| ·乳酸乳球菌其它类型表达载体 | 第23-24页 |
| ·分泌型表达载体 | 第23-24页 |
| ·表面展示表达载体 | 第24页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶 B(CALB)简介 | 第24-26页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶 B(CALB)的类型 | 第25页 |
| ·CALB 的分子结构 | 第25页 |
| ·CALB 的反应机制和催化反应过渡态推测 | 第25-26页 |
| ·本课题的研究意义 | 第26-27页 |
| ·本课题的技术路线 | 第27-29页 |
| 第二章 表达载体 PMG36N-CALB 的构建及其在细胞内表达的初步研究 | 第29-46页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·质粒与实验菌株 | 第29-30页 |
| ·主要生化试剂 | 第30页 |
| ·引物 | 第30-31页 |
| ·实验设备 | 第31页 |
| ·培养基，抗生素以及常用溶液的配制 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-41页 |
| ·菌株培养 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定 DNA | 第33页 |
| ·CALB 基因片段的 PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第34-35页 |
| ·限制性酶切 | 第35-36页 |
| ·琼脂糖电泳鉴定 DNA | 第36页 |
| ·回收酶切后的目的片段 | 第36页 |
| ·紫外分光光度法定量 DNA | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第37页 |
| ·CALB 基因与载体 pMG36e-NisI 酶切片段的连接 | 第37页 |
| ·化学转化构建 pMG36e-NisI-CALB | 第37-38页 |
| ·转化子的筛选 | 第38-39页 |
| ·对重组质粒测序 | 第39页 |
| ·重组质粒 pMG36N-CALB 的构建 | 第39页 |
| ·乳酸乳球菌 MG1363 感受态的制备 | 第39页 |
| ·连接产物的电转化 | 第39-40页 |
| ·重组子的筛选 | 第40页 |
| ·乳酸菌基因组提取 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-45页 |
| ·重组质粒 pMG36e-NisI-CALB 构建及鉴定 | 第41-43页 |
| ·重组质粒 pMG36N-CALB 的构建及鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒 pMG36e-NisI-CALB 与 pMG36N-CALB 在乳酸菌 MG1363 基因组中的整合 | 第43-44页 |
| ·乳酸菌表达产物的活性鉴定 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第三章 南极假丝酵母脂肪酶 B 在乳酸乳球菌MG1363 中表面展示 | 第46-59页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·质粒与实验菌株 | 第46页 |
| ·主要生化试剂 | 第46页 |
| ·引物 | 第46-47页 |
| ·实验设备 | 第47页 |
| ·培养基，抗生素以及常用溶液的配制 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-55页 |
| ·菌株培养 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第48页 |
| ·基因组提取 | 第48页 |
| ·紫外分光光度法定量 DNA | 第48页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定 DNA | 第48页 |
| ·克隆入 pMG36e-NisI 的目的基因（usp45-CALB-Spax）的 T/A 克隆及筛选 | 第48-52页 |
| ·重组质粒 pMG36e-NisI-UCS 的构建、筛选 | 第52-54页 |
| ·重组质粒 pMG36N-UCS 的构建 | 第54页 |
| ·重组质粒 pMG36N-UCS 连接产物的电转化 | 第54页 |
| ·转化子的筛选 | 第54-55页 |
| ·乳酸菌表达产物的活性鉴定 | 第55页 |
| ·乳酸菌表达产物的酶活测定 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-58页 |
| ·质粒 pMD19-UCS 构建及鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组质粒 pMG36e-NisI-UCS 的构建及筛选 | 第56-57页 |
| ·重组质粒 pMG36N-UCS 的构建及筛选 | 第57页 |
| ·乳酸菌表达产物的活性鉴定 | 第57页 |
| ·乳酸菌表达产物的酶活测定 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 乳酸菌表面展示南极假丝酵母脂肪酶 B 的酶学性质研究 | 第59-64页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·质粒与实验菌株 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·实验设备 | 第59页 |
| ·培养基，抗生素以及常用溶液的配制 | 第59-60页 |
| ·方法 | 第60页 |
| ·乳酸菌表面展示 CALB 的制备 | 第60页 |
| ·乳酸菌表面展示 CALB 酶活力测定 | 第60页 |
| ·乳酸菌表面展示 CALB 的最适 pH 和 pH 稳定性 | 第60页 |
| ·乳酸菌表面展示 CALB 的最适温度和温度稳定性 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-63页 |
| ·pH 对乳酸菌展示 CALB 水解活性的影响 | 第60-61页 |
| ·pH 对乳酸菌表面展示 CALB 稳定性的影响 | 第61-62页 |
| ·反应温度对乳酸菌表面展示 CALB 水解活性的影响 | 第62-63页 |
| ·乳酸菌表面展示 CALB 的热稳定性 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| 第五章 NICE 系统相关基因的克隆 | 第64-70页 |
| ·材料 | 第64-66页 |
| ·菌株与质粒 | 第64页 |
| ·主要生化试剂 | 第64-65页 |
| ·引物设计与合成 | 第65页 |
| ·实验设备 | 第65页 |
| ·培养基，抗生素以及常用溶液的配制 | 第65-66页 |
| ·主要方法 | 第66-68页 |
| ·菌株培养 | 第66页 |
| ·基因组提取 | 第66页 |
| ·琼脂糖电泳检测 | 第66页 |
| ·PCR 反应扩增目的基因 | 第66-67页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第67页 |
| ·化学转化构建 pMD-nisA 与 pMD-nisRK | 第67页 |
| ·双酶切验证重组质粒 pMD-nisA 与 pMD-nisRK | 第67-68页 |
| ·对重组质粒测序 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-69页 |
| ·乳酸乳球菌基因组提取 | 第68-69页 |
| ·PCR 扩增 nisin 前体基因 nisA | 第69页 |
| ·重组质粒 pMD19-NisA 和 pMD19-NisRK 的构建 | 第69页 |
| ·测序结果及分析 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 结论与展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录1 重组质粒 PMG36E-NISI-CALB 的 CALB 测序结果 | 第77-78页 |
| 附录2 重组质粒 PMD19-NISA 的 NISA 测序结果 | 第78-79页 |
| 附录3 重组质粒 PMD19-NISRK 的 NISRK 测序结果 | 第79-80页 |
| 附件 | 第80页 |
