| 摘要 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-21页 |
| 1. 细胞融合技术 | 第11-12页 |
| 1.1 原生质体制备 | 第11-12页 |
| 1.2 原生质体融合 | 第12页 |
| 1.3 原生质体再生 | 第12页 |
| 2. 阳性融合子的筛选与鉴定技术 | 第12-18页 |
| 2.1 生化鉴定 | 第12-13页 |
| 2.2 灭活融合 | 第13页 |
| 2.3 酯酶同工酶谱分析 | 第13页 |
| 2.4 DNA杂交 | 第13-14页 |
| 2.5 DNA指纹分析—限制性内切酶谱 | 第14页 |
| 2.6 PCR技术 | 第14页 |
| 2.7 分子标记 | 第14-18页 |
| 2.7.1 RFLP技术 | 第15-16页 |
| 2.7.2 RAPD技术 | 第16-17页 |
| 2.7.3 ISSR标记 | 第17页 |
| 2.7.4 SRAP标记 | 第17页 |
| 2.7.5 血清学反应 | 第17-18页 |
| 3. 产芽孢乳酸菌育种的意义 | 第18页 |
| 4. 纳豆芽孢杆菌一嗜酸乳杆菌融合子的应用前景展望 | 第18-19页 |
| 4.1 改良微生物菌种特性 | 第18-19页 |
| 4.2 微生态制剂 | 第19页 |
| 4.3 调味品 | 第19页 |
| 4.4 用于发酵工业 | 第19页 |
| 5. 本研究内容及意义 | 第19-20页 |
| 6. 研究路线 | 第20-21页 |
| 第一章 纳豆芽孢杆菌-嗜酸乳杆菌融合子制备及表型筛选方法的建立 | 第21-36页 |
| 1. 材料与方法 | 第21-24页 |
| 1.1 菌株、试剂、培养基及仪器 | 第21-22页 |
| 1.1.1 菌株 | 第21页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 1.1.4 培养基及制备 | 第21-22页 |
| 1.2 原生质体制备及融合 | 第22-24页 |
| 1.2.1 亲本活化 | 第22-23页 |
| 1.2.2 制作亲本菌株的生长曲线 | 第23页 |
| 1.2.3 酶解前活菌计数 | 第23页 |
| 1.2.4 原生质体制备与再生率计算 | 第23-24页 |
| 1.2.5 原生质体融合与再生 | 第24页 |
| 1.3 融合子的表型鉴定 | 第24页 |
| 1.3.1 亲本、融合子菌落形态观察 | 第24页 |
| 1.3.2 个体形态观察 | 第24页 |
| 1.3.3 碳酸钙培养基点接观察 | 第24页 |
| 1.3.4 牛奶选择培养基筛选 | 第24页 |
| 1.3.5 β-半乳糖苷酶试验 | 第24页 |
| 2. 结果与分析 | 第24-34页 |
| 2.1 亲本菌株的生长曲线 | 第24-26页 |
| 2.2 原生质体制备 | 第26-27页 |
| 2.2.1 纳豆芽孢杆菌酶解前后菌体形态变化 | 第26页 |
| 2.2.2 嗜酸乳杆菌酶解前后菌体形态变化 | 第26-27页 |
| 2.3 原生质体融合与再生 | 第27页 |
| 2.4 融合子的表型鉴定 | 第27-34页 |
| 2.4.1 菌落形态观察 | 第27-30页 |
| 2.4.2 碳酸钙培养基点接观察 | 第30-31页 |
| 2.4.3 菌体形态观察 | 第31-32页 |
| 2.4.4 牛奶选择培养基筛选 | 第32-33页 |
| 2.4.5 β-半乳糖苷酶试验 | 第33-34页 |
| 2.5 融合子表型鉴定方法的建立 | 第34页 |
| 3. 讨论 | 第34-35页 |
| 4. 小结 | 第35-36页 |
| 第二章 产芽孢乳酸菌融合子PCR鉴定特异性引物的筛选 | 第36-51页 |
| 1. 材料与方法 | 第36-37页 |
| 1.1 菌株、试剂与仪器 | 第36页 |
| 1.1.1 菌株 | 第36页 |
| 1.1.2 试剂 | 第36页 |
| 1.1.3 仪器 | 第36页 |
| 1.2 方法 | 第36-37页 |
| 1.2.1 DNA提取 | 第36-37页 |
| 1.2.2 引物设计 | 第37页 |
| 1.2.3 引物特异性分析 | 第37页 |
| 2. 结果与分析 | 第37-49页 |
| 2.1 引物设计 | 第37-39页 |
| 2.2 纳豆芽孢杆菌特异性引物的筛选 | 第39-43页 |
| 2.2.1 针对aprN设计的引物扩增结果 | 第39-40页 |
| 2.2.2 针对NK设计的引物扩增结果 | 第40-41页 |
| 2.2.3 针对rocG设计的引物扩增结果 | 第41-42页 |
| 2.2.4 针对spo0A设计的引物扩增结果 | 第42-43页 |
| 2.3 嗜酸乳杆菌引物特异性筛选 | 第43-47页 |
| 2.3.1 针对LacZ、LacM设计的引物PCR扩增结果 | 第43页 |
| 2.3.2 针对AS1.1854(1)和ASl. 1854(2)的引物的PCR扩增结果 | 第43-44页 |
| 2.3.3 针β1、β2、β3、β4和β5的引物的PCR扩增结果 | 第44-46页 |
| 2.3.4 针对LacS、LacY的引物的PCR扩增结果 | 第46页 |
| 2.3.5 针对ldh、ldhD的引物的PCR扩增结果 | 第46-47页 |
| 2.4 乳酸菌特异性通用引物设计及特异性分析结果 | 第47-49页 |
| 3. 讨论 | 第49-50页 |
| 4. 小结 | 第50-51页 |
| 第三章 产芽孢乳酸菌融合子的单重PCR鉴定体系的建立 | 第51-58页 |
| 1. 材料与方法 | 第51-52页 |
| 1.1 菌株、试剂与仪器 | 第51页 |
| 1.1.1 菌株 | 第51页 |
| 1.1.2 试剂 | 第51页 |
| 1.1.3 仪器 | 第51页 |
| 1.2 方法 | 第51-52页 |
| 1.2.1 细胞融合 | 第51页 |
| 1.2.2 DNA提取 | 第51页 |
| 1.2.3 温度梯度PCR确定退火温度 | 第51-52页 |
| 1.2.4 单重PCR体系优化 | 第52页 |
| 1.2.5 融合子的单重PCR鉴定 | 第52页 |
| 2. 结果分析 | 第52-57页 |
| 2.1 引物对P1/P2 PCR反应体系的优化 | 第52-54页 |
| 2.1.1 退火温度的确定 | 第52-53页 |
| 2.1.2 引物对P1/P2单重PCR体系优化 | 第53-54页 |
| 2.2 引物对P3/P4 PCR反应体系的优化 | 第54-56页 |
| 2.2.1 退火温度的确定 | 第54页 |
| 2.2.2 引物对P3/P4单重PCR体系优化 | 第54-56页 |
| 2.3 融合子的单重PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57页 |
| 4. 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 产芽孢乳酸菌融合子的多重PCR鉴定方法的建立 | 第58-63页 |
| 1. 材料与方法 | 第58-59页 |
| 1.1 菌株、试剂与仪器 | 第58页 |
| 1.1.1 菌株 | 第58页 |
| 1.1.2 试剂 | 第58页 |
| 1.1.3 仪器 | 第58页 |
| 1.2 方法 | 第58-59页 |
| 1.2.1 融合子多重PCR鉴定 | 第58页 |
| 1.2.2 融合子的表型筛选 | 第58-59页 |
| 2. 结果分析 | 第59-61页 |
| 2.1 多重PCR方法的建立 | 第59-60页 |
| 2.1.1 在P1/P2的优化体系下的多重PCR扩增结课 | 第59页 |
| 2.1.2 在P3/P4的优化体系下的多重PCR扩增结课 | 第59-60页 |
| 2.2 多重PCR方法鉴定结果汇总 | 第60页 |
| 2.3 表型鉴定 | 第60-61页 |
| 2.3.1 芽孢观察结果 | 第60-61页 |
| 2.3.2 β-半乳糖苷酶显色反应 | 第61页 |
| 3. 讨论 | 第61-62页 |
| 4. 小结 | 第62-63页 |
| 全文总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| Abstract | 第67-68页 |
| 致谢 | 第69页 |
