| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第1章 综述 | 第12-18页 |
| 1.1 米曲霉简介 | 第12页 |
| 1.2 淀粉酶简介 | 第12-15页 |
| 1.2.1 淀粉酶概述 | 第12-13页 |
| 1.2.2 淀粉酶的种类及作用机理 | 第13页 |
| 1.2.3 淀粉酶活力测定 | 第13页 |
| 1.2.4 淀粉酶的分子生物学 | 第13-14页 |
| 1.2.5 淀粉酶的用途 | 第14-15页 |
| 1.3 酱油生产及主要酶的作用 | 第15-16页 |
| 1.3.1 酱油的生产工艺 | 第15页 |
| 1.3.2 酱油生产中米曲霉酶系的作用 | 第15-16页 |
| 1.3.3 淀粉酶与酱油品质 | 第16页 |
| 1.4 本论文的主要研究内容及意义 | 第16-18页 |
| 第2章 酿造酱油种曲与成曲浸提液比较 | 第18-24页 |
| 2.1 材料 | 第18页 |
| 2.1.1 菌种 | 第18页 |
| 2.1.2 培养基 | 第18页 |
| 2.2 试剂 | 第18页 |
| 2.3 仪器 | 第18页 |
| 2.4 方法 | 第18-20页 |
| 2.4.1 种曲制备 | 第18-19页 |
| 2.4.2 成曲制备 | 第19页 |
| 2.4.3 种曲和成曲粗酶液浸提 | 第19页 |
| 2.4.4 浸提液蛋白质浓度测定 | 第19页 |
| 2.4.5 浸提液淀粉酶活力的测定 | 第19-20页 |
| 2.4.6 浸提液聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第20页 |
| 2.4.7 浸提液淀粉酶活性组分的鉴定 | 第20页 |
| 2.5 实验结果与分析 | 第20-23页 |
| 2.5.1 蛋白质标准曲线 | 第20-21页 |
| 2.5.2 麦芽糖标准曲线 | 第21-22页 |
| 2.5.3 浸提液性质 | 第22页 |
| 2.5.4 浸提液的PAGE 图谱 | 第22-23页 |
| 2.5.5 浸提液的Starch-PAGE 图谱 | 第23页 |
| 2.6 小结 | 第23-24页 |
| 第3章 活性电泳条件的优化 | 第24-28页 |
| 3.1 材料 | 第24页 |
| 3.2 试剂 | 第24页 |
| 3.3 仪器 | 第24页 |
| 3.4 方法 | 第24-25页 |
| 3.4.1 Starch-PAGE 电泳显示淀粉酶活性组分 | 第24页 |
| 3.4.2 淀粉平板法检测淀粉酶组分 | 第24-25页 |
| 3.5 实验结果及分析 | 第25-27页 |
| 3.5.1 底物浓度对检测灵敏度的影响 | 第25页 |
| 3.5.2 上样量对检测灵敏度的影响 | 第25-26页 |
| 3.5.3 孵育时间对检测灵敏度的影响 | 第26-27页 |
| 3.5.4 两种检测淀粉酶活性组分方法比较 | 第27页 |
| 3.6 小结 | 第27-28页 |
| 第4章 制备电泳回收酱油成曲淀粉酶单组分 | 第28-35页 |
| 4.1 材料 | 第28页 |
| 4.2 试剂 | 第28页 |
| 4.3 仪器 | 第28页 |
| 4.4 方法 | 第28-29页 |
| 4.4.1 成曲浸提液蛋白质浓度的测定 | 第28页 |
| 4.4.2 成曲浸提液淀粉酶活力的测定 | 第28页 |
| 4.4.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测成曲浸提液天然蛋白 | 第28页 |
| 4.4.4 Starch-PAGE 电泳检测浸提液淀粉酶活性组分 | 第28页 |
| 4.4.5 SDS-Starch-PAGE 电泳检测成曲淀粉酶各组分分子量 | 第28-29页 |
| 4.4.6 淀粉平板法检测淀粉酶组分 | 第29页 |
| 4.4.7 制备电泳回收目的组分 | 第29页 |
| 4.5 实验结果与分析 | 第29-33页 |
| 4.5.1 底物淀粉溶液对蛋白质条带迁移率的影响 | 第29-30页 |
| 4.5.2 SDS-Starch-PAGE 检测各组分分子量 | 第30-31页 |
| 4.5.3 淀粉平板显示目的组分 | 第31-32页 |
| 4.5.4 PAGE 检测纯化的目的组分 | 第32页 |
| 4.5.5 Starch-PAGE 检测纯化的目的组分 | 第32-33页 |
| 4.5.6 Amylase-2 纯度及分子量 | 第33页 |
| 4.6 讨论 | 第33-34页 |
| 4.7 小结 | 第34-35页 |
| 第5章 酱油成曲淀粉酶单组分的分离纯化 | 第35-43页 |
| 5.1 材料 | 第35页 |
| 5.2 试剂 | 第35页 |
| 5.3 仪器 | 第35页 |
| 5.4 方法 | 第35-37页 |
| 5.4.1 种曲制备 | 第35页 |
| 5.4.2 成曲制备 | 第35页 |
| 5.4.3 成曲粗酶液的浸提 | 第35-36页 |
| 5.4.4 硫酸铵分级沉淀 | 第36页 |
| 5.4.5 DEAE-Cellulose-52 分离酱油成曲淀粉酶单组分 | 第36页 |
| 5.4.6 Sephadex-G-100 凝胶过滤分子筛层析 | 第36页 |
| 5.4.7 SDS-PAGE 法检测纯化淀粉酶的纯度 | 第36-37页 |
| 5.5 实验结果 | 第37-41页 |
| 5.5.1 硫酸铵饱和度确定 | 第37-38页 |
| 5.5.2 DEAE-Cellulose-52 离子交换柱层析 | 第38-40页 |
| 5.5.3 Sephadex-G-100 凝胶过滤分子筛层析 | 第40页 |
| 5.5.4 检测纯化组分的纯度及分子量 | 第40-41页 |
| 5.5.5 淀粉酶单组分的分离纯化结果 | 第41页 |
| 5.6 小结 | 第41-43页 |
| 第6章 酶学性质研究 | 第43-53页 |
| 6.1 材料 | 第43页 |
| 6.2 试剂 | 第43页 |
| 6.3 仪器 | 第43-44页 |
| 6.4 方法 | 第44-45页 |
| 6.4.1 Amylase-2 酶解最适温度与热稳定性 | 第44页 |
| 6.4.2 Amylase-2 酶解最适pH 和pH 稳定性 | 第44页 |
| 6.4.3 金属离子依赖性 | 第44页 |
| 6.4.4 米氏常数测定 | 第44-45页 |
| 6.4.5 酶的最适底物研究 | 第45页 |
| 6.4.6 薄层层析法分析酶解产物 | 第45页 |
| 6.5 结果与分析 | 第45-51页 |
| 6.5.1 Amylase-2 最适温度与温度稳定性 | 第45-47页 |
| 6.5.2 Amylase-2 最适pH 值和pH 稳定性 | 第47-48页 |
| 6.5.3 金属离子对Amylase-2 活力的影响 | 第48页 |
| 6.5.4 米氏常数的测定 | 第48-49页 |
| 6.5.5 酶的最适底物 | 第49-51页 |
| 6.5.6 酶解产物的薄层层析分析 | 第51页 |
| 6.6 小结 | 第51-53页 |
| 第7章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
