| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 海参 | 第10-12页 |
| 1.1.1 国内外海参的自然分布 | 第10页 |
| 1.1.2 海参的化学组成 | 第10-11页 |
| 1.1.3 海参的营养与功效 | 第11-12页 |
| 1.2 碱性磷酸酶的研究进展 | 第12-19页 |
| 1.2.1 概述 | 第12页 |
| 1.2.2 碱性磷酸酶的检测方法 | 第12-13页 |
| 1.2.2.1 分光光度法 | 第12-13页 |
| 1.2.2.2 荧光法 | 第13页 |
| 1.2.2.3 双酶级联法 | 第13页 |
| 1.2.3 碱性磷酸酶的功能 | 第13-14页 |
| 1.2.4 碱性磷酸酶的分离纯化 | 第14-15页 |
| 1.2.5 碱性磷酸酶的理化特性 | 第15-18页 |
| 1.2.6 碱性磷酸酶的功能基团 | 第18-19页 |
| 1.2.7 碱性磷酸酶在水产动物应激过程中的变化及作用 | 第19页 |
| 1.3 立题背景和意义 | 第19页 |
| 1.4 本论文研究的主要内容 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 主要试剂配制 | 第23-24页 |
| 2.2.1.1 Tris-Hcl缓冲溶液的配制 | 第23页 |
| 2.2.1.2 甘氨酸缓冲溶液的配制 | 第23-24页 |
| 2.2.1.3 p-NPP底物溶液的配制 | 第24页 |
| 2.2.2 对硝基苯酚标准曲线的绘制 | 第24页 |
| 2.2.3 考马斯亮蓝染色法(Bradford法)绘制蛋白质标准曲线 | 第24页 |
| 2.2.4 原料预处理 | 第24页 |
| 2.2.5 粗酶液的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.6 碱性磷酸酶活力测定 | 第25页 |
| 2.2.7 蛋白质含量的测定 | 第25-26页 |
| 2.2.7.1 考马斯亮蓝染色法(Bradford法) | 第25-26页 |
| 2.2.7.2 紫外分光光度法测定蛋白质含量 | 第26页 |
| 2.2.8 碱性磷酸酶的分离纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.8.1 DEAE-52离子柱层析 | 第26页 |
| 2.2.8.2 Sephacryl S-200柱层析 | 第26页 |
| 2.2.8.3 TSK-GEL 3000分子排阻色谱柱 | 第26-27页 |
| 2.2.8.4 Native-PAGE分离 | 第27页 |
| 2.2.9 电泳方法 | 第27-29页 |
| 2.2.9.1 蛋白质凝胶电泳试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.2.9.2 Native-PAGE电泳 | 第28-29页 |
| 2.2.9.3 SDS-PAGE电泳 | 第29页 |
| 2.2.10 碱性磷酸酶特性分析 | 第29-30页 |
| 2.2.10.1 最适pH的测定 | 第29页 |
| 2.2.10.2 最适温度及稳定性的测定 | 第29页 |
| 2.2.10.3 金属离子对碱性磷酸酶活力的影响 | 第29-30页 |
| 2.2.10.4 抑制剂对碱性磷酸酶活力的影响 | 第30页 |
| 2.2.10.5 米氏常数K_m及V_m | 第30页 |
| 2.2.11 碱性磷酸酶功能基团分析 | 第30-31页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第31-48页 |
| 3.1 海参肠碱性磷酸酶粗酶的特性 | 第31-35页 |
| 3.1.1 海参肠ALP的最适pH及其pH稳定性 | 第31-32页 |
| 3.1.2 海参肠ALP的最适温度及其温度稳定性 | 第32-33页 |
| 3.1.3 金属离子对海参肠ALP的影响 | 第33-34页 |
| 3.1.4 抑制剂对海参肠ALP的影响 | 第34-35页 |
| 3.2 海参肠碱性磷酸酶的分离纯化 | 第35-38页 |
| 3.2.1 DEAE-52阴离子交换层析 | 第35页 |
| 3.2.2 Sephacryl S-200凝胶层析 | 第35-36页 |
| 3.2.3 TSK GEL-3000凝胶层析 | 第36-37页 |
| 3.2.4 Native-PAGE分离 | 第37页 |
| 3.2.5 纯化结果分析 | 第37-38页 |
| 3.3 纯化后海参肠碱性磷酸酶的特性 | 第38-44页 |
| 3.3.1 碱性磷酸酶的最适pH | 第38-39页 |
| 3.3.2 酶的最适温度和热稳定性 | 第39-40页 |
| 3.3.3 金属离子对酶活性的影响 | 第40-42页 |
| 3.3.4 抑制剂对海参肠ALP活力的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.5 米氏常数K_m及V_m | 第44页 |
| 3.4 海参肠碱性磷酸酶的功能基团 | 第44-48页 |
| 3.4.1 氯胺-T对碱性磷酸酶活力的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.2 PMSF对碱性磷酸酶活力的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.3 IAc对碱性磷酸酶活力的影响 | 第46页 |
| 3.4.4 DTT对碱性磷酸酶活力的影响 | 第46-48页 |
| 第四章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55页 |
