| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| ·能源问题和纤维素乙醇的现状 | 第10-11页 |
| ·开发高效代谢木糖酿酒酵母的必要性 | 第11-12页 |
| ·高效代谢木糖酿酒酵母的构建策略 | 第12-20页 |
| ·木糖还原酶/木糖醇脱氢酶途径 | 第13-16页 |
| ·木糖异构酶途径 | 第16页 |
| ·木糖代谢模块与酵母细胞底盘间适配性的调控 | 第16-20页 |
| ·进化工程 | 第20-22页 |
| ·本课题的研究意义和主要内容 | 第22-23页 |
| ·本课题的研究意义 | 第22页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-43页 |
| ·质粒 | 第23-24页 |
| ·菌株 | 第24-25页 |
| ·引物序列 | 第25-29页 |
| ·分子生物学常用酶及试剂 | 第29-30页 |
| ·常用仪器 | 第30-31页 |
| ·培养基配制 | 第31-32页 |
| ·生化试剂的配制 | 第32页 |
| ·分子生物学操作 | 第32-37页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第32页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第32-33页 |
| ·PCR 扩增 | 第33页 |
| ·DNA 片段和 PCR 产物的回收 | 第33页 |
| ·限制性内切酶酶切和 DNA 片段的连接 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第34页 |
| ·质粒构建 | 第34-36页 |
| ·酵母转化 | 第36-37页 |
| ·摇瓶传代培养 | 第37页 |
| ·恒浊培养 | 第37-38页 |
| ·细胞培养和取样 | 第38页 |
| ·基因表达分析 | 第38-40页 |
| ·总 RNA 提取 | 第38页 |
| ·mRNA 的反转录 | 第38-39页 |
| ·实时定量 PCR 测定 | 第39页 |
| ·数据分析 | 第39-40页 |
| ·酵母总蛋白提取 | 第40页 |
| ·酶活测定 | 第40-41页 |
| ·基因 XylA 的定位分析 | 第41页 |
| ·细胞干重的测定 | 第41页 |
| ·细胞生长测定 | 第41页 |
| ·细胞限氧发酵 | 第41页 |
| ·发酵产物分析 | 第41-43页 |
| 第三章 通过木糖还原酶途径构建代谢木糖的酿酒酵母的研究 | 第43-54页 |
| ·引言 | 第43-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-53页 |
| ·XYL1 表达强度不同的木糖代谢途径的构建 | 第45页 |
| ·木糖代谢途径在两种酵母菌株中的表达和比较 | 第45-49页 |
| ·XYL2 的表达强度对木糖代谢的影响 | 第49-52页 |
| ·强化非氧化磷酸戊糖途径的功能对木糖代谢的影响 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第四章 通过木糖异构酶途径构建代谢木糖的酿酒酵母的研究 | 第54-61页 |
| ·引言 | 第54-55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-59页 |
| ·组合表达 xylA 和 XKS1 构建重组酵母菌株 | 第55-56页 |
| ·重组菌株的生长比较 | 第56-57页 |
| ·非氧化磷酸戊糖途径的功能强化对木糖发酵的影响 | 第57-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第五章 通过进化工程提高酵母木糖利用效率的研究 | 第61-73页 |
| ·引言 | 第61-62页 |
| ·结果和讨论 | 第62-72页 |
| ·摇瓶培养进化重组酵母 | 第62-63页 |
| ·进化后菌株在木糖培养基上的生长比较 | 第63-64页 |
| ·进化后菌株的木糖发酵比较 | 第64-67页 |
| ·进化后菌株的混糖发酵比较 | 第67-68页 |
| ·恒浊器培养进化提高酵母的木糖利用效率 | 第68-69页 |
| ·恒浊培养进化后菌株的木糖发酵比较 | 第69-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第六章 进化菌株和出发菌株的基因表达差异研究 | 第73-85页 |
| ·引言 | 第73-74页 |
| ·结果和讨论 | 第74-84页 |
| ·菌株的木糖代谢比较 | 第74页 |
| ·木糖还原酶、木糖醇脱氢酶的活性比较 | 第74-75页 |
| ·含有木糖还原酶途径的进化菌株基因表达研究 | 第75-79页 |
| ·SyBE002 和 SyBE003 的木糖异构酶活性比较 | 第79页 |
| ·SyBE002 和 SyBE003 的基因表达差异 | 第79-83页 |
| ·差异基因 TKL2 的功能研究 | 第83-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 第七章 共发酵纤维二糖和木糖产乙醇和木糖醇的研究 | 第85-93页 |
| ·引言 | 第85-86页 |
| ·结果和讨论 | 第86-91页 |
| ·共代谢纤维二糖和木糖的重组酵母菌株 | 第86-87页 |
| ·纤维二糖和木糖共代谢的优化 | 第87-90页 |
| ·共发酵纤维二糖和木糖与共发酵葡萄糖和木糖的比较 | 第90-91页 |
| ·小结 | 第91-93页 |
| 第八章 结论和展望 | 第93-96页 |
| ·结论 | 第93-94页 |
| ·创新点 | 第94-95页 |
| ·展望 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-108页 |
| 发表论文和参加科研情况 | 第108-109页 |
| 附录 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
