| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-13页 |
| 1.1 醛类简介 | 第8-9页 |
| 1.1.1 醛类的来源及作用 | 第8页 |
| 1.1.2 乙醛及其毒性 | 第8-9页 |
| 1.2 乙醛脱氢酶概述 | 第9-10页 |
| 1.2.1 酒精及其代谢 | 第9页 |
| 1.2.2 乙醛脱氢酶的来源及分类 | 第9-10页 |
| 1.2.3 乙醛脱氢酶的应用 | 第10页 |
| 1.3 乙醛脱氢酶的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.3.1 微生物细胞提取 | 第10-11页 |
| 1.3.2 利用原核表达系统克隆表达ALDH | 第11页 |
| 1.3.3 利用真核表达系统克隆表达ALDH | 第11-12页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第12页 |
| 1.5 主要研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-24页 |
| 2.1 材料 | 第13-15页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第13页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第13-14页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第14-15页 |
| 2.2 实验仪器 | 第15-16页 |
| 2.3 实验方法 | 第16-24页 |
| 2.3.1 人源ALDH2基因及引物合成 | 第16页 |
| 2.3.2 重组质粒pYX212-ALDH2的构建 | 第16-18页 |
| 2.3.3 人源ALDH2基因表达组件的构建 | 第18-20页 |
| 2.3.4 人源ALDH2基因在酿酒酵母系统中的游离表达 | 第20页 |
| 2.3.5 人源ALDH2基因在酿酒酵母系统中的整合表达 | 第20-21页 |
| 2.3.6 乙醛脱氢酶的酶活测定 | 第21页 |
| 2.3.7 工程菌的发酵优化 | 第21-22页 |
| 2.3.8 重组ALDH2的分离纯化 | 第22-23页 |
| 2.3.9 重组ALDH2酶学性质的初步研究 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-43页 |
| 3.1 人源ALDH2基因的重组表达 | 第24-32页 |
| 3.1.1 重组质粒pYX212-ALDH2的构建 | 第24-25页 |
| 3.1.2 人源ALDH2基因表达组件的构建 | 第25-26页 |
| 3.1.3 人源ALDH2基因在酿酒酵母系统中的游离表达 | 第26-29页 |
| 3.1.4 人源ALDH2基因在酿酒酵母系统中的整合表达 | 第29-32页 |
| 3.2 工程菌的发酵条件优化 | 第32-37页 |
| 3.2.1 最佳培养时间的确定 | 第32页 |
| 3.2.2 最佳破壁时间的确定 | 第32-33页 |
| 3.2.3 最佳接种量的确定 | 第33-34页 |
| 3.2.4 培养基起始pH的确定 | 第34-35页 |
| 3.2.5 发酵温度的确定 | 第35-36页 |
| 3.2.6 正交实验优化 | 第36-37页 |
| 3.3 重组乙醛脱氢酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第37-43页 |
| 3.3.1 重组ALDH2的镍柱亲和层析 | 第37-38页 |
| 3.3.2 重组ALDH2的最适反应pH及pH稳定性 | 第38-39页 |
| 3.3.3 重组ALDH2的最适反应温度及热稳定性 | 第39-41页 |
| 3.3.4 金属离子对重组ALDH2活性的影响 | 第41页 |
| 3.3.5 酶动力学常数的测定 | 第41-43页 |
| 结论与展望 | 第43-44页 |
| 主要结论 | 第43页 |
| 展望 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录1：本文用到的基因序列及其对应的氨基酸序列 | 第49-55页 |
| 附录2:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第55页 |
