| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 引言 | 第9-14页 |
| 1.1 蔗糖磷酸化酶概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 蔗糖磷酸化酶的简介及来源 | 第9页 |
| 1.1.2 蔗糖磷酸化酶的结构与性质 | 第9-10页 |
| 1.1.3 蔗糖磷酸化酶的催化机制 | 第10页 |
| 1.2 蔗糖磷酸化酶的应用 | 第10-11页 |
| 1.2.1 低聚糖的合成 | 第10-11页 |
| 1.2.2 含醇羟基、酚羟基及羧基化合物的修饰和改性 | 第11页 |
| 1.2.3 合成某些不稳定物质的衍生物 | 第11页 |
| 1.2.4 其他 | 第11页 |
| 1.3 蔗糖磷酸化酶的异源表达 | 第11-13页 |
| 1.3.1 蔗糖磷酸化酶的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.3.2 大肠杆菌表达系统 | 第12-13页 |
| 1.4 本论文主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 Bifidobacterium longum ZJ0521蔗糖磷酸化酶在大肠杆菌中的重组表达 | 第14-25页 |
| 2.1 引言 | 第14页 |
| 2.2 材料与方法 | 第14-19页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第14页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第14-15页 |
| 2.2.3 培养基与培养条件 | 第15页 |
| 2.2.4 DNA操作 | 第15-17页 |
| 2.2.5 蔗糖磷酸化酶的克隆 | 第17页 |
| 2.2.6 B.longum ZJ0521 spase的生物信息学分析 | 第17页 |
| 2.2.7 重组质粒pET-22b(+)/spase的构建及SPase在大肠杆菌中的表达 | 第17页 |
| 2.2.8 含不同信号肽表达载体的构建与转化 | 第17-18页 |
| 2.2.9 蔗糖磷酸化酶粗酶液制备 | 第18页 |
| 2.2.10 分析方法 | 第18-19页 |
| 2.3 结果与分析 | 第19-24页 |
| 2.3.1 B.longum spase基因的克隆 | 第19页 |
| 2.3.2 spase基因的生物信息学分析 | 第19-21页 |
| 2.3.3 重组质粒pET-22b(+)/spase的构建 | 第21-22页 |
| 2.3.4 蔗糖磷酸化酶在E coli Rosetta(DE3)中的表达 | 第22页 |
| 2.3.5 含不同信号肽表达载体的构建与表达 | 第22-24页 |
| 2.4 本章小结 | 第24-25页 |
| 第三章 蔗糖磷酸化酶的纯化及其酶学性质研究 | 第25-34页 |
| 3.1 前言 | 第25页 |
| 3.2 材料与方法 | 第25-28页 |
| 3.2.1 菌株 | 第25页 |
| 3.2.2 试剂和仪器 | 第25页 |
| 3.2.3 培养基 | 第25页 |
| 3.2.4 重组SPase的表达 | 第25-26页 |
| 3.2.5 重组SPase的分离纯化 | 第26页 |
| 3.2.6 SPase的酶学性质分析 | 第26-27页 |
| 3.2.7 α-熊果苷的合成 | 第27页 |
| 3.2.8 成分分析 | 第27-28页 |
| 3.3 结果与分析 | 第28-33页 |
| 3.3.1 重组SPase的纯化 | 第28-29页 |
| 3.3.2 SPase最适反应温度和热稳定性的测定 | 第29页 |
| 3.3.3 SPase最适pH和pH稳定性测定 | 第29-30页 |
| 3.3.4 SPase动力学参数分析 | 第30页 |
| 3.3.5 以蔗糖和氢醌为底物合成α-熊果苷的反应条件优化 | 第30-33页 |
| 3.4 本章小结 | 第33-34页 |
| 第四章 重组大肠杆菌产SPase的发酵条件优化 | 第34-41页 |
| 4.1 前言 | 第34页 |
| 4.2 材料和方法 | 第34-35页 |
| 4.2.1 菌株 | 第34页 |
| 4.2.2 试剂和仪器 | 第34页 |
| 4.2.3 培养基与培养条件 | 第34页 |
| 4.2.4 分析方法 | 第34-35页 |
| 4.3 结果与分析 | 第35-40页 |
| 4.3.1 不同培养基对重组菌胞内SPase酶活的影响 | 第35页 |
| 4.3.2 不同诱导温度对重组菌胞内SPase酶活的影响 | 第35-36页 |
| 4.3.3 不同诱导剂浓度对重组菌胞内SPase酶活的影响 | 第36-37页 |
| 4.3.4 培养基初始pH对重组菌胞内SPase酶活的影响 | 第37页 |
| 4.3.5 优化后重组菌E. coli Rosetta(DE3)(pET-22b/spase)胞内SPase酶活变化 | 第37-38页 |
| 4.3.6 3L发酵罐高密度发酵产SPase的发酵优化 | 第38-40页 |
| 4.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第五章 结论与展望 | 第41-42页 |
| 5.1 主要结论 | 第41页 |
| 5.2 存在的问题及展望 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 作者简介 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48页 |
