| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| ·4-羟基异亮氨酸的概述 | 第8-11页 |
| ·4-羟基异亮氨酸的来源和性质 | 第8页 |
| ·4-羟基异亮氨酸的制备 | 第8-10页 |
| ·4-羟基异亮氨酸的功能 | 第10-11页 |
| ·4-羟基异亮氨酸的应用前景 | 第11页 |
| ·微生物发酵法生产Ile的研究进展 | 第11-13页 |
| ·本课题立题依据和研究意义 | 第13页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第13-16页 |
| ·代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产 4-HIL面临的科学问题 | 第13-14页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第16-24页 |
| ·实验材料 | 第16-17页 |
| ·菌株和质粒 | 第16-17页 |
| ·主要引物 | 第17页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第17-18页 |
| ·实验仪器 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·培养条件 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·培养方法 | 第18页 |
| ·缓冲液的配制 | 第18-19页 |
| ·蛋白纯化缓冲液 | 第18-19页 |
| ·western blot相关缓冲液 | 第19页 |
| ·分子实验操作 | 第19-20页 |
| ·DNA基本操作 | 第19页 |
| ·表达质粒和菌株的构建 | 第19-20页 |
| ·重组菌的蛋白表达分析 | 第20-21页 |
| ·SDS-PAGE分析大肠杆菌中Ido、IdoΔ6 的表达 | 第20页 |
| ·western blot[37]分析重组谷氨酸棒杆菌中Ido(6His)、IdoΔ6(6His)的表达量 | 第20-21页 |
| ·目标蛋白的Ni柱纯化和含量测定 | 第21-22页 |
| ·异亮氨酸双加氧酶的酶学性质分析 | 第22页 |
| ·异亮氨酸双加氧酶的最适pH及pH稳定性测定 | 第22页 |
| ·异亮氨酸双加氧酶的最适温度及热稳定性测定 | 第22页 |
| ·催化动力学常数的确定 | 第22页 |
| ·重组菌的发酵参数测定 | 第22-24页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第23页 |
| ·葡萄糖浓度的测定 | 第23页 |
| ·氨基酸含量的测定 | 第23页 |
| ·有机酸含量的测定 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-45页 |
| ·异亮氨酸双加氧酶的表达、纯化和酶学性质 | 第24-29页 |
| ·E.coli BL21(DE3)/pET28a-ido、E. coli BL21(DE3)/pET28a-idoΔ6 的构建 | 第24-25页 |
| ·E.coli BL21(DE3)/pET28a-ido、E. coli BL21(DE3)/pET28a-idoΔ6 的表达及蛋白纯化 | 第25-26页 |
| ·异亮氨酸双加氧酶的酶学性质 | 第26-29页 |
| ·异亮氨酸双加氧酶表达菌发酵合成 4-HIL | 第29-39页 |
| ·ido、idoΔ6 表达菌的构建 | 第29-31页 |
| ·ido表达菌株发酵生产4-HIL | 第31页 |
| ·玉米浆限制条件对4-HIL产量的影响 | 第31-37页 |
| ·生物素限制条件对4-HIL产量的影响 | 第37-39页 |
| ·ido、idoΔ6 表达菌株4-HIL产量的对比 | 第39-45页 |
| ·ido、idoΔ6 表达菌株 4-HIL产量的对比 | 第39-43页 |
| ·Ido和IdoΔ6 的表达水平及其在 30 oC的催化动力学 | 第43-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-47页 |
| 主要结论 | 第45页 |
| 展望 | 第45-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
