| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| ·酿酒酵母 | 第7-9页 |
| ·酵母及酿酒酵母 | 第7页 |
| ·酿酒酵母作为模式生物 | 第7-8页 |
| ·酿酒酵母的表达载体与筛选标记 | 第8页 |
| ·酿酒酵母的基因敲除 | 第8-9页 |
| ·铜离子与微生物的关系 | 第9页 |
| ·铜离子参与微生物的生理代谢反应 | 第9页 |
| ·铜离子对微生物氧化胁迫作用 | 第9页 |
| ·酿酒酵母中铜抗性研究状况 | 第9-11页 |
| ·酿酒酵母中铜离子的代谢 | 第10-11页 |
| ·酿酒酵母中铜抗性机制 | 第11页 |
| ·研究意义及主要研究内容 | 第11-13页 |
| ·研究意义 | 第11-12页 |
| ·主要研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-20页 |
| ·材料 | 第13-14页 |
| ·实验菌株与载体 | 第13页 |
| ·工具酶 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13-14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·方法 | 第14-20页 |
| ·质粒的提取、PCR 产物胶回收及柱回收 | 第14页 |
| ·DNA 酶切、去磷酸化 | 第14页 |
| ·PCR 反应体系与基因扩增 | 第14页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第14-15页 |
| ·酵母染色体 DNA 的提取 | 第15页 |
| ·线性片段转化酿酒酵母 | 第15-16页 |
| ·质粒转化酿酒酵母 | 第16页 |
| ·酿酒酵母质粒的提取 | 第16页 |
| ·PCR 扩增 | 第16-17页 |
| ·半定量 PCR | 第17-18页 |
| ·酿酒酵母 cup1、ccc2 基因的敲除 | 第18页 |
| ·重组质粒的构建 | 第18页 |
| ·质粒 pYX212M 稳定性检测 | 第18-19页 |
| ·酿酒酵母发酵性能测定 | 第19页 |
| ·绿色荧光蛋白的观察 | 第19-20页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第20-37页 |
| ·不同铜离子浓度胁迫下酿酒酵母 cup1 和 ccc2 的转录水平 | 第20-25页 |
| ·铜离子胁迫浓度的选择 | 第20-21页 |
| ·酿酒酵母 RNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·酿酒酵母半定量 RT-PCR 的条件优化 | 第22-23页 |
| ·酿酒酵母 W303-1A cup1、ccc2 基因的转录水平 | 第23-25页 |
| ·高敏感度的铜抗性酿酒酵母构建 | 第25-29页 |
| ·酿酒酵母 cup1、ccc2 基因的敲除 | 第25-28页 |
| ·高敏感度的铜抗性酿酒酵母菌落形态比较 | 第28页 |
| ·高敏感度的铜抗性酿酒酵母生长表型比较 | 第28-29页 |
| ·高敏感度的铜抗性酿酒酵母表达系统的构建与应用 | 第29-37页 |
| ·以 cup1 基因为筛选标记的表达载体 pYX212M 构建 | 第30-31页 |
| ·质粒 pYX212M 的铜抗性测试 | 第31-33页 |
| ·质粒 pYX212M 稳定性的研究 | 第33-34页 |
| ·绿色荧光蛋白在铜离子敏感型酿酒酵母中的表达 | 第34-37页 |
| 主要结论与展望 | 第37-38页 |
| 主要结论 | 第37页 |
| 展望 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-43页 |
| 附录 | 第43页 |
