| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 缩写词表 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-33页 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌产氨代谢 | 第18-21页 |
| 1.2.1 枯草芽孢杆菌产氨代谢关键酶 | 第18-19页 |
| 1.2.2 枯草芽孢杆菌 GDH 在产氨代谢中的作用 | 第19-20页 |
| 1.2.3 枯草芽孢杆菌产氨代谢研究的实际意义 | 第20-21页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌 GDH 简介 | 第21-22页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌 GDH 催化机制 | 第21页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌 GDH 编码基因 | 第21-22页 |
| 1.4 整合型质粒 | 第22-27页 |
| 1.4.1 枯草芽孢杆菌整合型质粒的整合机理 | 第22-23页 |
| 1.4.2 整合型质粒的用途 | 第23-26页 |
| 1.4.3 常见的枯草芽孢杆菌整合型质粒 | 第26-27页 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌转化方法研究 | 第27-30页 |
| 1.5.1 感受态及其形成及机制 | 第27-28页 |
| 1.5.2 转化过程 | 第28页 |
| 1.5.3 转化方法 | 第28-30页 |
| 1.6 研究依据和内容 | 第30-33页 |
| 1.6.1 研究依据 | 第30-31页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第31-33页 |
| 第二章 B. subtilis 168 rocG 插入失活载体的构建及转化 | 第33-56页 |
| 2.1 实验与材料 | 第34-38页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第34页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第34-35页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.4 培养基及溶液 | 第36-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-48页 |
| 2.2.1 枯草芽孢杆菌 DNA 提取 | 第38-39页 |
| 2.2.2 DNA 样品检验 | 第39-40页 |
| 2.2.3 B. subtilis 168 rocG 同源序列的克隆 | 第40页 |
| 2.2.4 DNA 片段的切胶回收纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 2.2.6 TA 克隆 | 第41-42页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的转化： | 第42-44页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒的提取 | 第44-45页 |
| 2.2.9 RocG 同源序列与 pMUTin4 质粒的酶切酶连 | 第45-46页 |
| 2.2.10 测序验证 | 第46页 |
| 2.2.11 枯草芽孢杆菌感受态制备 | 第46页 |
| 2.2.12 枯草芽孢杆菌感受态细胞转化和筛选 | 第46-48页 |
| 2.3 实验结果 | 第48-54页 |
| 2.3.1 枯草芽孢杆菌 DNA 的提取 | 第48页 |
| 2.3.2 B. subtilis 168 rocG 同源序列扩增 | 第48-49页 |
| 2.3.3 pMUTin4-rocG 的构建 | 第49-52页 |
| 2.3.4 B. subtilis 168 rocG 插入失活突变株 PCR 验证 | 第52-53页 |
| 2.3.5 B. subtilis 168 rocG 插入失活突变株测序验证 | 第53-54页 |
| 2.4 本章小结 | 第54-56页 |
| 第三章 BS-△rocG 生理特性分析 | 第56-65页 |
| 3.1 实验与材料 | 第56-58页 |
| 3.1.1 菌株 | 第56页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第56页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第56-57页 |
| 3.1.4 培养基及溶液 | 第57-58页 |
| 3.2 实验方法 | 第58-60页 |
| 3.2.1 生长曲线测定 | 第58页 |
| 3.2.2 酶粗提液制备 | 第58页 |
| 3.2.3 蛋白浓度测定 | 第58-59页 |
| 3.2.4 谷氨酸脱氢酶酶活测定 | 第59-60页 |
| 3.3 实验结果 | 第60-63页 |
| 3.3.1 突变株 BS-△rocG 生长曲线 | 第60页 |
| 3.3.2 粗酶液蛋白浓度测定 | 第60-61页 |
| 3.3.3 以 NADP~+为辅酶测定 GDH 氧化脱氨基酶活 | 第61-62页 |
| 3.3.4 以 NAD~+为辅酶测定 GDH 氧化脱氨基酶活 | 第62-63页 |
| 3.4 本章小结 | 第63页 |
| 3.5 本章讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 Bacillus natto rocG 插入失活载体的构建及转化 | 第65-71页 |
| 4.1 实验与材料 | 第65-66页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第65-66页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第66页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第66页 |
| 4.1.4 培养基及溶液 | 第66页 |
| 4.2 实验方法 | 第66-67页 |
| 4.2.1 Bacillus natto rocG 插入失活载体构建 | 第66页 |
| 4.2.2 Bacillus natto rocG 插入失活载体转化 | 第66-67页 |
| 4.3 实验结果 | 第67-69页 |
| 4.3.1 Bacillus natto rocG 同源序列扩增及测序 | 第67页 |
| 4.3.2 pMUTin4-rocG1 的构建 | 第67-68页 |
| 4.3.3 Bacillus natto rocG 插入失活突变株的构建 | 第68-69页 |
| 4.4 本章小结 | 第69页 |
| 4.5 本章讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 5.1 结论 | 第71-72页 |
| 5.2 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 附录 | 第79-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第85页 |
