| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第1章 绪论 | 第18-37页 |
| 1.1 研究背景及意义 | 第18-19页 |
| 1.2 研究现状 | 第19-29页 |
| 1.2.1 蛋白聚糖 | 第19-23页 |
| 1.2.2 糖胺聚糖 | 第23-26页 |
| 1.2.3 核心蛋白聚糖 | 第26-29页 |
| 1.3 研究路线 | 第29-37页 |
| 1.3.1 糖组学分析工具 | 第29-31页 |
| 1.3.2 基于凝胶电泳的糖链鉴定方法 | 第31页 |
| 1.3.3 核磁共振方法鉴定糖序列 | 第31-32页 |
| 1.3.4 X-射线晶体学鉴定糖序列 | 第32页 |
| 1.3.5 质谱方法鉴定糖结构 | 第32-35页 |
| 1.3.6 计算机模拟鉴定糖序列 | 第35页 |
| 1.3.7 核心蛋白聚糖糖胺聚糖研究路线 | 第35-37页 |
| 第2章 核心蛋白聚糖糖胺聚糖结构初级鉴定及抗凝血活性研究 | 第37-54页 |
| 2.1 概述 | 第37页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第37-43页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 2.2.2 核心蛋白聚糖提取 | 第38-39页 |
| 2.2.3 糖胺聚糖制备纯化 | 第39页 |
| 2.2.4 Micro-Carbazole assay测定糖含量 | 第39页 |
| 2.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第39-40页 |
| 2.2.6 凝胶渗透色谱分析 | 第40-41页 |
| 2.2.7 核磁共振鉴定 | 第41页 |
| 2.2.8 二糖样品制备及衍生化 | 第41页 |
| 2.2.9 液质联用测定二糖组成 | 第41-42页 |
| 2.2.10 体外抗凝血活性分析 | 第42-43页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第43-53页 |
| 2.3.1 核心蛋白聚糖提取 | 第43页 |
| 2.3.2 糖胺聚糖链制备 | 第43-44页 |
| 2.3.3 Micro-carbazole assay分析 | 第44页 |
| 2.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析糖胺聚糖 | 第44-46页 |
| 2.3.5 HPLC-GPC分析糖胺聚糖分子量 | 第46-48页 |
| 2.3.6 核磁共振(NMR)鉴定 | 第48页 |
| 2.3.7 二糖分析结果 | 第48-52页 |
| 2.3.8 抗凝血活性分析 | 第52-53页 |
| 2.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第3章 结合Top-down和Bottom-up的方法鉴定糖胺聚糖结构域和链接区域 | 第54-68页 |
| 3.1 概述 | 第54-55页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第55-57页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第55页 |
| 3.2.2 硫酸软骨素/硫酸皮肤素结构域制备 | 第55页 |
| 3.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第55页 |
| 3.2.4 体积排阻色谱分析 | 第55页 |
| 3.2.5 核磁共振分析 | 第55页 |
| 3.2.6 Top-down方法分析CS/DS结构域 | 第55-56页 |
| 3.2.7 生物信息学解谱 | 第56页 |
| 3.2.8 核心蛋白聚糖链接区域制备 | 第56-57页 |
| 3.2.9 Bottom-up分析链接区域 | 第57页 |
| 3.2.10 LC-MS/MS确定链接区域硫酸化位点 | 第57页 |
| 3.2.11 二糖样品制备及衍生化 | 第57页 |
| 3.2.12 液质联用分析二糖组成 | 第57页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第57-66页 |
| 3.3.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第57-58页 |
| 3.3.2 体积排阻色谱分析 | 第58-59页 |
| 3.3.3 核磁共振分析 | 第59-60页 |
| 3.3.4 Top-down结果分析 | 第60-62页 |
| 3.3.5 Bottom-up分析链接区域 | 第62-63页 |
| 3.3.6 Orbitrap-FT-MS/MS分析链接区域 | 第63-65页 |
| 3.3.7 结构域二糖组成结果分析 | 第65-66页 |
| 3.4 本章小结 | 第66-68页 |
| 第4章 糖胺聚糖链长及硫酸化程度鉴定 | 第68-88页 |
| 4.1 概述 | 第68-69页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第69-71页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第69页 |
| 4.2.2 体积排阻色谱(SEC)分离糖胺聚糖 | 第69页 |
| 4.2.3 高效液相色谱-凝胶渗透色谱(HPLC-GPC)鉴定分离效果 | 第69页 |
| 4.2.4 强阴离子交换色谱(SAX)分离糖胺聚糖 | 第69页 |
| 4.2.5 体积排阻-液相色谱(SEC-HPLC)分离糖胺聚糖 | 第69-70页 |
| 4.2.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析 | 第70页 |
| 4.2.7 制备型电泳分离 | 第70页 |
| 4.2.8 糖胺聚糖含量测定 | 第70页 |
| 4.2.9 强阴离子交换色谱除去缓冲盐 | 第70-71页 |
| 4.2.10 液质联用测定二糖单元组成 | 第71页 |
| 4.2.11 傅里叶变换质谱(FTMS)分析 | 第71页 |
| 4.2.12 数据处理 | 第71页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第71-87页 |
| 4.3.1 凝胶排阻色谱结果分析 | 第71-72页 |
| 4.3.2 GPC鉴定分离结果 | 第72-73页 |
| 4.3.3 强阴离子交换色谱分离分析 | 第73-74页 |
| 4.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第74-75页 |
| 4.3.5 半制备SEC-HPLC分离 | 第75-76页 |
| 4.3.6 制备型电泳分离结果分析 | 第76-79页 |
| 4.3.7 不同链长糖胺聚糖二糖组成分析 | 第79页 |
| 4.3.8 糖胺聚糖理论数据库建立 | 第79-82页 |
| 4.3.9 Orbitrap FTMS鉴定糖胺聚糖链长和硫酸化程度 | 第82-87页 |
| 4.4 本章小结 | 第87-88页 |
| 第5章 傅里叶变换离子回旋共振质谱鉴定糖胺聚糖全序列 | 第88-112页 |
| 5.1 概述 | 第88页 |
| 5.2 实验材料和方法 | 第88-90页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第88-89页 |
| 5.2.2 纳升级电喷雾-傅里叶变换离子回旋质谱分析 | 第89页 |
| 5.2.3 FT-ICR MS/MS分析 | 第89-90页 |
| 5.2.4 MS/MS数据分析 | 第90页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第90-111页 |
| 5.3.1 FT-ICR MS分析 | 第90-97页 |
| 5.3.2 FT-ICR MS/MS分析 | 第97-108页 |
| 5.3.3 糖链存在数目分析 | 第108-110页 |
| 5.3.4 Decorin GAG结构修饰分析 | 第110-111页 |
| 5.4 本章小结 | 第111-112页 |
| 第6章 结论创新与展望 | 第112-116页 |
| 6.1 全文总结 | 第112-113页 |
| 6.2 创新点 | 第113-114页 |
| 6.3 展望 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-125页 |
| 附图 | 第125-160页 |
| 附录一 英文缩略语表 | 第160-163页 |
| 附录二 攻读博士学位期间发表论文 | 第163-165页 |
| 致谢 | 第165-166页 |
