| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 专业术语注释表 | 第5-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 酵母细胞壁的概述 | 第8-11页 |
| 1.1.1 酵母细胞壁的结构 | 第8页 |
| 1.1.2 酵母细胞壁蛋白 | 第8-9页 |
| 1.1.3 酵母GPI-细胞壁蛋白（GPI-CWPs）的功能 | 第9页 |
| 1.1.4 酵母GPI锚定蛋白（GPI-APs）的结构 | 第9-10页 |
| 1.1.5 酵母GPI-APs的生物合成过程 | 第10-11页 |
| 1.2 Dfg5p和Dcw1p的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2.1 Dfg5p和Dcw1p在酵母中的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2.2 Dfg5p和Dcw1p在其他真菌中的研究现状 | 第12页 |
| 1.3 本论文的研究意义和主要内容 | 第12-14页 |
| 1.3.1 本论文的研究意义 | 第12-13页 |
| 1.3.2 本论文主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-19页 |
| 2.1.1 引物 | 第14-15页 |
| 2.1.2 质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.3 菌株 | 第16页 |
| 2.1.4 培养基 | 第16-17页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.7 溶液配制 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-30页 |
| 2.2.1 基因检索和蛋白序列比对 | 第19页 |
| 2.2.2 目的基因敲除 | 第19-22页 |
| 2.2.3 大肠杆菌XL-10 Gold感受态细胞制备 | 第22页 |
| 2.2.4 质粒构建 | 第22-24页 |
| 2.2.5 质粒定点突变 | 第24-26页 |
| 2.2.6 相关质粒构建方法 | 第26页 |
| 2.2.7 菌株HCl敏感性和耐热性实验分析 | 第26-27页 |
| 2.2.8 细胞壁的荧光增白剂（CFW）染色法 | 第27页 |
| 2.2.9 胞内蛋白的提取 | 第27页 |
| 2.2.10 细胞壁蛋白的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.11 胞外蛋白的提取 | 第28页 |
| 2.2.12 蛋白质免疫印迹 | 第28-29页 |
| 2.2.13 细胞膜蛋白的糖链分析 | 第29页 |
| 2.2.14 生长曲线测定 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-42页 |
| 3.1 菌株构建和表型分析 | 第30-35页 |
| 3.1.1 dcw1?和dfg5?菌株的构建 | 第30页 |
| 3.1.2 dcw1?和dfg5?表型特征的分析 | 第30-31页 |
| 3.1.3 MET3启动子型条件突变菌株的构建和验证 | 第31-33页 |
| 3.1.4 KT2（dfg5ΔP_(MET3)DCW1）条件突变菌株的形态特征 | 第33-34页 |
| 3.1.5 Dcw1p和Dfg5p对细胞壁蛋白合成的影响 | 第34-35页 |
| 3.2 Dfg5p中关键氨基酸的分析和检测 | 第35-37页 |
| 3.2.1 糖苷水解酶76家族（GH76）中保守氨基酸序列的分析 | 第35-36页 |
| 3.2.2 突变Dfg5p的活性分析 | 第36页 |
| 3.2.3 突变Dfg5p的表达和定位 | 第36-37页 |
| 3.3 可溶性Dfg5p的构建和体内活性分析 | 第37-42页 |
| 3.3.1 Dfg5p的定位和糖基化类型分析 | 第37-38页 |
| 3.3.2 可溶性Dfg5p（sDfg5p）的表达和定位 | 第38-39页 |
| 3.3.3 过表达sDfg5p对KT2条件突变菌株生长的回补 | 第39-40页 |
| 3.3.4 过表达sDfg5p对KT2条件突变菌株细胞壁蛋白合成的影响 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第47页 |
