| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 酿酒酵母中基因突变方法概述 | 第8页 |
| 1.2 PiggyBac转座子介绍 | 第8-10页 |
| 1.2.1 国内外piggyBac转座子应用进展 | 第8-9页 |
| 1.2.2 PiggyBac转座子结构及转座原理 | 第9-10页 |
| 1.3 高尔基体 α-1,6 甘露糖基转移酶（Och1p）简介 | 第10-12页 |
| 1.4 SCY1基因简介 | 第12页 |
| 1.5 本论文研究意义和主要内容 | 第12-14页 |
| 1.5.1 本论文研究意义 | 第12页 |
| 1.5.2 本论文主要内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料和方法 | 第14-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-20页 |
| 2.1.1 菌株 | 第14页 |
| 2.1.2 质粒 | 第14-15页 |
| 2.1.3 引物 | 第15-17页 |
| 2.1.4 本研究所用试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.5 培养基、试剂配制 | 第18-20页 |
| 2.1.6 主要设备 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-33页 |
| 2.2.1 感受态细胞制备 | 第20-21页 |
| 2.2.2 质粒构建 | 第21-24页 |
| 2.2.3 质粒定点突变 | 第24-25页 |
| 2.2.4 质粒一步转化 | 第25页 |
| 2.2.5 线性转化敲基因 | 第25-26页 |
| 2.2.6 点板实验 | 第26页 |
| 2.2.7 酿酒酵母膜蛋白提取 | 第26页 |
| 2.2.8 TCA沉淀蛋白 | 第26页 |
| 2.2.9 蛋白质免疫印迹（Western blot） | 第26-27页 |
| 2.2.10 荧光定位 | 第27页 |
| 2.2.11 生长曲线测定 | 第27页 |
| 2.2.12 PB转座子移除率和再插入率计算方法 | 第27-28页 |
| 2.2.13 PB转座子筛选方法 | 第28页 |
| 2.2.14 从突变株移除PB转座子 | 第28页 |
| 2.2.15 巢式聚合酶链式反应验证单个突变株中PB插入位点 | 第28-29页 |
| 2.2.16 下代测序法验证PB插入位点 | 第29-30页 |
| 2.2.17 Southern印迹杂交（Southern blot） | 第30-32页 |
| 2.2.18 荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第33-48页 |
| 3.1 酿酒酵母菌株中PB转座子筛选系统的构建 | 第33-39页 |
| 3.1.1 PB转座子系统结构及转座原理 | 第33-34页 |
| 3.1.2 转座系统中PB移除率和再插入率 | 第34-36页 |
| 3.1.3 转座过程中PB转座子拷贝数的检测 | 第36-38页 |
| 3.1.4 下代测序技术分析PB插入位点 | 第38-39页 |
| 3.2 截短型Och1-Suc2-Flag融合蛋白以及蔗糖酶分泌系统的构建 | 第39-42页 |
| 3.2.1 截短型Och1-Suc2-Flag融合蛋白结构 | 第39-40页 |
| 3.2.2 截短型Och1p仍定位于顺面高尔基体 | 第40-41页 |
| 3.2.3 应用蔗糖酶分泌系统对突变菌株进行筛选 | 第41-42页 |
| 3.3 SCY1基因影响Och1p定位 | 第42-48页 |
| 3.3.1 PB筛选得到SCY1基因 | 第42-44页 |
| 3.3.2 过量表达SCY1基因使高尔基体中截短型Och1p蛋白量下降 | 第44-45页 |
| 3.3.3 过量表达SCY1基因导致蔗糖酶糖基化缺陷及分泌量减少 | 第45-47页 |
| 3.3.4 过量表达SCY1基因使截短型Och1-Suc2-Flag融合蛋白进入液泡 | 第47-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-49页 |
| 主要结论 | 第48页 |
| 展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录：作者在硕士期间发表的论文 | 第54页 |
