| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第15-34页 |
| 1.1 引言 | 第15页 |
| 1.2 杏仁蛋白组成及其结构与性质 | 第15-23页 |
| 1.2.1 杏仁蛋白的组成及其功能 | 第16-19页 |
| 1.2.1.1 贮藏蛋白 | 第17-18页 |
| 1.2.1.2 11S球蛋白 | 第18页 |
| 1.2.1.3 扁桃仁球蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.2 杏仁蛋白的结构 | 第19-22页 |
| 1.2.2.1 亚基 | 第20-21页 |
| 1.2.2.2 二硫键 | 第21-22页 |
| 1.2.3 杏仁球蛋白的致敏性 | 第22-23页 |
| 1.3 蛋白质加热过程自组装行为研究 | 第23-30页 |
| 1.3.1 热处理对蛋白质结构的影响 | 第23-24页 |
| 1.3.2 蛋白质的自组装现象 | 第24-25页 |
| 1.3.3 蛋白质自组装行为的机制 | 第25-27页 |
| 1.3.4 影响蛋白质自组装行为的因素 | 第27-30页 |
| 1.4 天然纳米微粒的应用 | 第30页 |
| 1.5 蛋白质纳米载体的构建 | 第30-31页 |
| 1.6 本课题的研究意义与目的 | 第31-32页 |
| 1.7 本课题主要研究内容 | 第32-34页 |
| 第二章 苦杏仁加热过程蛋白质组分的变化 | 第34-43页 |
| 2.1 引言 | 第34-35页 |
| 2.2 材料与方法 | 第35-37页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第35页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第35-36页 |
| 2.2.3 实验分析方法 | 第36-37页 |
| 2.2.3.1 苦杏仁粗提液制备 | 第36页 |
| 2.2.3.2 粗提液热处理 | 第36页 |
| 2.2.3.3 蛋白质性质分析——聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第36-37页 |
| 2.2.3.4 蛋白质分子量测定 | 第37页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第37-42页 |
| 2.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 苦杏仁11S球蛋白及其亚基的分离纯化 | 第43-59页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-48页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第44页 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 | 第44-45页 |
| 3.2.3 实验分析方法 | 第45-48页 |
| 3.2.3.1 苦杏仁蛋白分离——硫酸铵沉降 | 第45页 |
| 3.2.3.2 苦杏仁蛋白纯化——离子交换色谱 | 第45页 |
| 3.2.3.3 苦杏仁蛋白纯化——凝胶过滤色谱 | 第45-46页 |
| 3.2.3.4 苦杏仁蛋白制备——制备型电泳 | 第46页 |
| 3.2.3.5 蛋白质性质鉴定——BCA法蛋白定量测试(Lowry法) | 第46-47页 |
| 3.4.3.6 蛋白质性质鉴定——等电聚焦(IEF) | 第47页 |
| 3.4.3.7 蛋白质性质鉴定——N-末端氨基酸序列测定 | 第47-48页 |
| 3.2.3.8 蛋白质性质分析——非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE) | 第48页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第48-57页 |
| 3.3.1 杏仁蛋白分离纯化 | 第48-51页 |
| 3.3.2 苦杏仁亚基的分离纯化 | 第51-53页 |
| 3.3.3 苦杏仁亚基的表征 | 第53-57页 |
| 3.3.3.1 等电聚焦 | 第53-54页 |
| 3.3.3.2 N-末端测序 | 第54-57页 |
| 3.3.3.3 Native-PAGE | 第57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-59页 |
| 第四章 pH调控苦杏仁蛋白聚体形成纳米体系 | 第59-75页 |
| 4.1 引言 | 第59-60页 |
| 4.2 材料与方法 | 第60-63页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第60页 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 | 第60-61页 |
| 4.2.3 实验分析方法 | 第61-63页 |
| 4.2.3.1 苦杏仁蛋白纳米微粒的形成 | 第61页 |
| 4.2.3.2 苦杏仁蛋白微粒稳定性检测 | 第61-62页 |
| 4.2.3.3 纳米微粒胶体性质分析——马尔文激光粒度仪 | 第62页 |
| 4.2.3.4 纳米微粒浊度测定——紫外分光光度计 | 第62页 |
| 4.2.3.5 纳米微粒形态测定——透射电镜(EM) | 第62页 |
| 4.2.3.6 统计分析方法 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第63-73页 |
| 4.3.1 苦杏仁蛋白pH调控纳米分散系(API-NPs)的形成 | 第63-65页 |
| 4.3.2 蛋白浓度对API-NPs形成的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.3 离子强度对API-NPs形成的影响 | 第66-67页 |
| 4.3.4 API-NPs的热稳定性研究 | 第67-70页 |
| 4.3.5 API-NPs的低温稳定性研究 | 第70-71页 |
| 4.3.6 API-NPs的形态学研究 | 第71页 |
| 4.3.7 化学降解剂对API-NPs的影响 | 第71-73页 |
| 4.4 本章小结 | 第73-75页 |
| 第五章 苦杏仁球蛋白基于二硫键的自组装现象 | 第75-93页 |
| 5.1 引言 | 第75-76页 |
| 5.2 材料与方法 | 第76-79页 |
| 5.2.1 材料与试剂 | 第76页 |
| 5.2.2 主要仪器与设备 | 第76-77页 |
| 5.2.3 实验分析方法 | 第77-79页 |
| 5.2.3.1 苦杏仁蛋白热处理 | 第77页 |
| 5.2.3.2 蛋白质结构测定——圆二色光谱(CD) | 第77页 |
| 5.2.3.3 蛋白质热力学分析——差示扫描量热仪(DSC) | 第77页 |
| 5.2.3.4 纳米胶体特性检测——尺寸排阻色谱-多角度光散射(SEC-MALLS) | 第77-78页 |
| 5.2.3.5 巯基含量测定——DTNB法 | 第78页 |
| 5.2.3.6 半胱氨酸含量测定——氨基酸检测仪 | 第78-79页 |
| 5.2.3.7 化学降解剂对自组装行为的影响 | 第79页 |
| 5.2.3.8 统计分析方法 | 第79页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第79-92页 |
| 5.3.1 热处理对苦杏仁蛋白结构的影响 | 第79-81页 |
| 5.3.2 热处理苦杏仁蛋白二硫键连接物的形成 | 第81-85页 |
| 5.3.3 苦杏仁蛋白自组装现象研究 | 第85-88页 |
| 5.3.4 化学降解剂对蛋白自组装行为的影响 | 第88-89页 |
| 5.3.5 化学降解剂对纳米微粒结构的影响 | 第89-92页 |
| 5.4 本章小结 | 第92-93页 |
| 第六章 苦杏仁蛋白热诱导纳米微粒的构建与调控 | 第93-111页 |
| 6.1 引言 | 第93-94页 |
| 6.2 材料与方法 | 第94-96页 |
| 6.2.1 材料与试剂 | 第94页 |
| 6.2.2 主要仪器与设备 | 第94页 |
| 6.2.3 实验分析方法 | 第94-96页 |
| 6.2.3.1 苦杏仁纯化蛋白纳米微粒的形成 | 第94-95页 |
| 6.2.3.2 苦杏仁蛋白纳米微粒稳定性检测 | 第95-96页 |
| 6.2.3.3 纳米微粒形态测定——透射电镜(TEM) | 第96页 |
| 6.2.3.4 统计分析方法 | 第96页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第96-110页 |
| 6.3.1 热诱导苦杏仁纯化蛋白纳米微粒(Apro-NPs)的形成 | 第96-98页 |
| 6.3.2 蛋白浓度对Apro-NPs形成的影响 | 第98-101页 |
| 6.3.3 加热温度与时间对Apro-NPs形成的影响 | 第101页 |
| 6.3.4 离子强度对Apro-NPs形成的影响 | 第101-103页 |
| 6.3.5 Apro-NPs的pH响应 | 第103-104页 |
| 6.3.6 Apro-NPs的温度响应 | 第104-106页 |
| 6.3.7 Apro-NPs的低温及冻融稳定性 | 第106-108页 |
| 6.3.8 Apro-NPs的化学稳定性 | 第108-109页 |
| 6.3.9 Apro-NPs的形态学研究 | 第109-110页 |
| 6.4 本章小结 | 第110-111页 |
| 第七章 苦杏仁蛋白热诱导纳米微粒的活性表征 | 第111-134页 |
| 7.1 引言 | 第111-112页 |
| 7.2 材料与方法 | 第112-118页 |
| 7.2.1 材料与试剂 | 第112-113页 |
| 7.2.1.1 细胞株 | 第112页 |
| 7.2.1.2 材料与试剂 | 第112-113页 |
| 7.2.2 主要仪器与设备 | 第113-114页 |
| 7.2.3 实验分析方法 | 第114-118页 |
| 7.2.3.1 抗氧化活性研究 | 第114-115页 |
| 7.2.3.2 纳米微粒装载能力测定——高压液相色谱(UPLC) | 第115-116页 |
| 7.2.3.3 药物装载机制分析——红外光谱(IR) | 第116页 |
| 7.2.3.4 体外释放能力测定 | 第116-117页 |
| 7.2.3.5 细胞试验——噻唑蓝比色(MTT)法 | 第117-118页 |
| 7.2.3.6 统计分析方法 | 第118页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第118-132页 |
| 7.3.1 苦杏仁蛋白纳米微粒(Apro-NPs)抗氧化活性研究 | 第118-119页 |
| 7.3.2 Apro-NPs装载活性成分(药物)能力试验 | 第119-123页 |
| 7.3.2.1 苦杏仁甙(AML)装载能力测定 | 第120-122页 |
| 7.3.2.2 紫杉醇(PTX)装载能力测定 | 第122-123页 |
| 7.3.3 Apro-NPs对药物装载方式研究 | 第123-126页 |
| 7.3.4 Apro-NPs对药物体外释放能力研究 | 第126-129页 |
| 7.3.5 细胞毒性试验 | 第129-132页 |
| 7.3.5.1 Apro-NPs的体外安全性评价 | 第129页 |
| 7.3.5.2 Apro-NPs对癌细胞敏感性评价 | 第129-131页 |
| 7.3.5.3 Apro-NPs提高药物对癌细胞增殖的抑制效果 | 第131-132页 |
| 7.4 本章小结 | 第132-134页 |
| 第八章 总结与展望 | 第134-138页 |
| 8.1 主要研究结论 | 第134-136页 |
| 8.2 主要创新点 | 第136页 |
| 8.3 工作展望 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-153页 |
| 致谢 | 第153-154页 |
| 附表一 | 第154-156页 |
