| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 稀少糖的概念 | 第13页 |
| 1.2 D-阿洛酮糖的简介 | 第13-15页 |
| 1.2.1 D-阿洛酮糖的结构和理化性质 | 第13-14页 |
| 1.2.2 自然界中的D-阿洛酮糖 | 第14页 |
| 1.2.3 D-阿洛酮糖在生物体中的吸收和代谢 | 第14页 |
| 1.2.4 D-阿洛酮糖的生理功能 | 第14-15页 |
| 1.2.5 D-阿洛酮糖的制备 | 第15页 |
| 1.3 D-阿洛酮糖 3-差向异构酶的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3.1 D-阿洛酮糖 3-差向异构酶的发现 | 第15-16页 |
| 1.3.2 D-阿洛酮糖 3-差向异构酶的性质 | 第16-17页 |
| 1.3.3 D-阿洛酮糖 3-差向异构酶的氨基酸序列 | 第17-19页 |
| 1.4 D-阿洛酮糖的应用和生产 | 第19页 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌简介 | 第19-23页 |
| 1.5.1 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第19-20页 |
| 1.5.2 枯草芽孢杆菌宿主和载体 | 第20-21页 |
| 1.5.3 枯草芽孢杆菌孢子的表面展示 | 第21-22页 |
| 1.5.4 无抗生素抗性基因遗传操作技术 | 第22-23页 |
| 1.6 立题依据和研究意义 | 第23-24页 |
| 1.7 研究思路与主要内容 | 第24-25页 |
| 第二章 基于丙氨酸消旋酶基因筛选标记的重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第25-47页 |
| 2.1 前言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.2.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第27页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第27页 |
| 2.2.5 主要试剂配方 | 第27-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-36页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.3.2 重组枯草芽孢杆菌 1A751(dal-)的构建 | 第30-32页 |
| 2.3.3 基于dal基因筛选标记的重组质粒构建 | 第32-33页 |
| 2.3.4 基于dal基因筛选标记的重组枯草芽孢杆菌构建 | 第33页 |
| 2.3.5 重组质粒稳定性分析 | 第33-34页 |
| 2.3.6 重组枯草芽孢杆菌的发酵 | 第34页 |
| 2.3.7 重组DPEase酶的纯化 | 第34页 |
| 2.3.8 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| 2.3.9 分子量测定 | 第35页 |
| 2.3.10 酶活的测定 | 第35页 |
| 2.3.11 核磁共振分析 | 第35页 |
| 2.3.12 最适生物转化条件 | 第35-36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-45页 |
| 2.4.1 营养缺陷型菌株B. subtilis 1A751(dal-)的构建 | 第36-38页 |
| 2.4.2 重组可复制质粒的构建 | 第38-40页 |
| 2.4.3 重组枯草芽孢杆菌的发酵 | 第40-41页 |
| 2.4.4 重组DPEase酶的纯化 | 第41-42页 |
| 2.4.5 产物的鉴定 | 第42-44页 |
| 2.4.6 重组质粒的稳定性 | 第44页 |
| 2.4.7 D-果糖到D-阿洛酮糖的生物转化 | 第44-45页 |
| 2.5 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 D-阿洛酮糖 3-差向异构酶在枯草芽孢杆菌中染色体整合表达 | 第47-61页 |
| 3.1 前言 | 第47-48页 |
| 3.2 实验材料 | 第48-49页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第48页 |
| 3.2.2 培养基 | 第48页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第48-49页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第49页 |
| 3.2.5 主要试剂配方 | 第49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-54页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第49页 |
| 3.3.2 P43-dpe表达单元的构建 | 第49-52页 |
| 3.3.3 重组整合质粒p DG-P43dpe的构建 | 第52-53页 |
| 3.3.4 重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第53页 |
| 3.3.5 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第53页 |
| 3.3.6 酶活的测定 | 第53页 |
| 3.3.7 重组菌的稳定性分析 | 第53-54页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第54-60页 |
| 3.4.1 P43-dpe表达片段的构建 | 第54页 |
| 3.4.2 PCR产物的克隆 | 第54-55页 |
| 3.4.3 重组整合质粒p DG-P43dpe的构建 | 第55-56页 |
| 3.4.4 重组枯草芽孢杆菌 1A751/P43-dpe的构建 | 第56-57页 |
| 3.4.5 淀粉酶活性检测和PCR验证 | 第57-58页 |
| 3.4.6 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第58-59页 |
| 3.4.7 重组枯草芽孢杆菌的发酵表达 | 第59页 |
| 3.4.8 重组菌的稳定性 | 第59-60页 |
| 3.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 第四章 D-阿洛酮糖 3-差向异构酶基因的多拷贝染色体整合 | 第61-77页 |
| 4.1 前言 | 第61-62页 |
| 4.2 实验材料 | 第62-63页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第62页 |
| 4.2.2 培养基 | 第62-63页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第63页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第63页 |
| 4.2.5 主要试剂配方 | 第63页 |
| 4.3 实验方法 | 第63-66页 |
| 4.3.1 引物设计 | 第63页 |
| 4.3.2 多拷贝串联基因体外构建 | 第63-64页 |
| 4.3.3 整合载体p DG1730H的构建 | 第64页 |
| 4.3.4 重组整合质粒的构建 | 第64-65页 |
| 4.3.5 重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第65页 |
| 4.3.6 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第65-66页 |
| 4.3.7 重组枯草芽孢杆菌的发酵和酶活测定 | 第66页 |
| 4.3.8 重组菌稳定性分析 | 第66页 |
| 4.3.9 最适生物转化条件 | 第66页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第66-76页 |
| 4.4.1 多拷贝P43-dpe表达单元的构建 | 第66-67页 |
| 4.4.2 整合载体p DG1730H的构建 | 第67-69页 |
| 4.4.3 重组整合质粒的构建 | 第69-70页 |
| 4.4.4 重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第70-71页 |
| 4.4.5 重组枯草芽孢杆菌的发酵 | 第71-72页 |
| 4.4.6 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第72-73页 |
| 4.4.7 重组菌的遗传稳定性 | 第73页 |
| 4.4.8 不同培养基对重组菌酶活的影响 | 第73-74页 |
| 4.4.9 最佳生物转化条件 | 第74-76页 |
| 4.5 本章小结 | 第76-77页 |
| 第五章 D-阿洛酮糖 3-差向异构酶在枯草芽孢杆菌孢子表面的展示 | 第77-92页 |
| 5.1 前言 | 第77-78页 |
| 5.2 实验材料 | 第78-79页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第78页 |
| 5.2.2 培养基 | 第78-79页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第79页 |
| 5.2.4 主要仪器 | 第79页 |
| 5.2.5 主要试剂配方 | 第79页 |
| 5.3 实验方法 | 第79-81页 |
| 5.3.1 引物设计 | 第79页 |
| 5.3.2 重组整合质粒的构建 | 第79页 |
| 5.3.3 重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第79-80页 |
| 5.3.4 重组孢子的制备 | 第80页 |
| 5.3.5 芽孢衣壳蛋白的提取 | 第80页 |
| 5.3.6 表面展示DPEase酶活的测定 | 第80页 |
| 5.3.7 蛋白酶处理实验 | 第80-81页 |
| 5.3.8 孢子表面展示DPEase的酶学性质 | 第81页 |
| 5.3.9 重组孢子生物转化D-果糖生产D-阿洛酮糖 | 第81页 |
| 5.3.10 孢子的可重复利用性 | 第81页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第81-91页 |
| 5.4.1 重组整合质粒p Cot Z-CL-dpe的构建 | 第81-83页 |
| 5.4.2 重组枯草芽孢杆菌WB800/Cot Z-CL-dpe的构建 | 第83-84页 |
| 5.4.3 重组枯草芽孢杆菌孢子的制备 | 第84-85页 |
| 5.4.4 芽孢衣壳蛋白的SDS-PAGE分析 | 第85页 |
| 5.4.5 不同蛋白酶对重组孢子处理 | 第85-86页 |
| 5.4.6 孢子表面展示DPEase的酶学性质 | 第86-88页 |
| 5.4.7 孢子表面展示DPEase酶催化D-果糖异构化反应 | 第88-90页 |
| 5.4.8 重组孢子的可重复利用性 | 第90-91页 |
| 5.5 本章小结 | 第91-92页 |
| 主要结论与展望 | 第92-94页 |
| 论文创新点 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第105页 |
