| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 概述 | 第8-9页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第9-12页 |
| 1.2.1 葡糖二酸的化学生产 | 第9页 |
| 1.2.2 葡糖二酸的生物合成 | 第9-10页 |
| 1.2.3 提高葡糖二酸产量的策略 | 第10-11页 |
| 1.2.4 酿酒酵母质粒表达的缺陷 | 第11-12页 |
| 1.3 立题依据与研究意义 | 第12-13页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-21页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 培养基与常见溶液配制 | 第14-15页 |
| 2.1.3 试剂和仪器 | 第15-16页 |
| 2.2 质粒的构建和DNA片段的扩增 | 第16-17页 |
| 2.2.1 DNA片段的扩增与组装 | 第16-17页 |
| 2.2.2 基因合成 | 第17页 |
| 2.2.3 质粒的构建 | 第17页 |
| 2.2.4 整合基因组片段构建 | 第17页 |
| 2.3 基因改造 | 第17-19页 |
| 2.3.1 大肠杆菌化学转化法 | 第17-18页 |
| 2.3.2 酿酒酵母醋酸锂高效转化法 | 第18页 |
| 2.3.3 敲除OPI1基因 | 第18页 |
| 2.3.4 整合酵母基因组 | 第18-19页 |
| 2.4 培养方法 | 第19页 |
| 2.4.1 大肠杆菌培养条件 | 第19页 |
| 2.4.2 酿酒酵母摇瓶发酵培养条件 | 第19页 |
| 2.4.3 发酵罐培养 | 第19页 |
| 2.5 分析方法 | 第19-21页 |
| 2.5.1 Westernblot和蛋白纯化 | 第19-20页 |
| 2.5.2 MIOX4酶活测定 | 第20页 |
| 2.5.3 实时荧光定量PCR方法检测miox4和udh基因的转录水平 | 第20页 |
| 2.5.4 有机酸等代谢产物的检测 | 第20-21页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第21-36页 |
| 3.1 葡糖二酸合成途径游离质粒表达菌株的构建 | 第21-26页 |
| 3.1.1 敲除OPI1基因 | 第21-22页 |
| 3.1.2 葡糖二酸生产途径关键基因表达验证 | 第22-24页 |
| 3.1.3 葡糖二酸游离表达菌株的构建和发酵验证 | 第24-26页 |
| 3.2 整合酵母基因组的delta位点提高葡糖二酸产量 | 第26-29页 |
| 3.2.1 葡糖二酸合成途径delta位点整合型酵母菌株的构建 | 第26-28页 |
| 3.2.2 过表达模块转录水平分析 | 第28页 |
| 3.2.3 肌醇加氧酶的酶活分析 | 第28-29页 |
| 3.3 发酵优化 | 第29-36页 |
| 3.3.1 培养基种类及培养基中糖浓度优化 | 第29-32页 |
| 3.3.2 肌醇浓度优化和补料条件优化 | 第32-34页 |
| 3.3.3 5L发酵罐培养 | 第34-36页 |
| 主要结论与展望 | 第36-38页 |
| 主要结论 | 第36-37页 |
| 展望 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-43页 |
| 附录1：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第43-44页 |
| 附录2：本研究所用引物 | 第44页 |
