| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略符号对照表 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 多不饱和脂肪酸概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 多不饱和脂肪酸的结构与分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2 多不饱和脂肪酸的功能 | 第12页 |
| 1.1.3 多不饱和脂肪酸的来源 | 第12-14页 |
| 1.2 高山被孢霉脂肪酸研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 高山被孢霉简介 | 第14页 |
| 1.2.2 高山被孢霉脂肪酸脱饱和途径 | 第14-15页 |
| 1.2.3 脂肪酸脱饱和酶（FADS9、FADS12和FADS15）在脂肪酸脱饱和途径中的重要性 | 第15-16页 |
| 1.3 脂肪酸脱饱和酶（FADS9、FADS12和FADS15）的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.1 脂肪酸脱饱和酶（FADS9、FADS12和FADS15）基因的克隆表达与体内功能鉴定 | 第16-17页 |
| 1.3.2 膜结合脂肪酸脱饱和酶纯化研究进展 | 第17页 |
| 1.3.3 膜结合脂肪酸脱饱和酶脱饱和电子传递链 | 第17-18页 |
| 1.3.4 膜结合脂肪酸脱饱和酶的结构研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 本论文中用到的蛋白质纯化技术 | 第19-22页 |
| 1.4.1 纯化技术简介 | 第19-20页 |
| 1.4.2 膜蛋白质的纯化流程 | 第20-22页 |
| 1.5 本论文的立题依据和意义 | 第22页 |
| 1.6 本论文的主要研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 脂肪酸脱饱和酶（FADS9、FADS12和FADS15）的表达和纯化 | 第24-49页 |
| 2.1 前言 | 第24-25页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第25-27页 |
| 2.2.1 供试菌株与质粒 | 第25页 |
| 2.2.2 培养基及相关溶液 | 第25-26页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.4 主要仪器和设备 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.3.1 脂肪酸脱饱和酶表达载体的构建 | 第27页 |
| 2.3.2 毕赤酵母的转化和目的基因的诱导表达 | 第27-28页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE和Western Blot分析 | 第28页 |
| 2.3.4 HRV 3C蛋白酶表达载体的构建和在大肠杆菌中的表达 | 第28页 |
| 2.3.5 HRV 3C蛋白酶的纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.6 细胞膜组分的分离及目的膜蛋白质的提取 | 第29页 |
| 2.3.7 脂肪酸脱饱和酶的纯化 | 第29页 |
| 2.3.8 蛋白质浓度和纯度的测定 | 第29页 |
| 2.3.9 脂肪酸脱饱和酶（FADS9）波长扫描和还原实验 | 第29-30页 |
| 2.3.10 脂肪酸脱饱和酶（FADS12和FADS15）的光谱吸收特征、消光系数及铁含量的测定 | 第30-31页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第31-47页 |
| 2.4.1 脂肪酸脱饱和酶表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.4.2 脂肪酸脱饱和酶的诱导表达及高表达量转化子筛选 | 第32-36页 |
| 2.4.3 脂肪酸脱饱和酶的诱导条件的优化 | 第36-37页 |
| 2.4.4“工具酶”HRV 3C蛋白酶的表达和纯化 | 第37-39页 |
| 2.4.5 脂肪酸脱饱和酶细胞膜组分的分离 | 第39页 |
| 2.4.6 提取脂肪酸脱饱和酶去垢剂的筛选 | 第39-41页 |
| 2.4.7 脂肪酸脱饱和酶的纯化 | 第41-45页 |
| 2.4.8 脂肪酸脱饱和酶（FADS9）融合细胞色素b_5功能域的研究 | 第45-46页 |
| 2.4.9 脂肪酸脱饱和酶（FADS12和FADS15）的光谱吸收特征及铁含量分析 | 第46-47页 |
| 2.5 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 脂肪酸脱饱和酶体外反应体系的构建 | 第49-65页 |
| 3.1 前言 | 第49-51页 |
| 3.2 材料与设备 | 第51-52页 |
| 3.2.1 供试菌株与质粒 | 第51页 |
| 3.2.2 培养基及相关溶液 | 第51-52页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第52页 |
| 3.2.4 主要仪器和设备 | 第52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.3.1 电子传递蛋白质表达载体的构建 | 第52页 |
| 3.3.2 大肠杆菌的转化和目的基因的诱导表达 | 第52-53页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE分析 | 第53页 |
| 3.3.4 细胞色素b_5和细胞色素b_5还原酶的纯化 | 第53页 |
| 3.3.5 细胞色素P450还原酶的纯化 | 第53-54页 |
| 3.3.6 细胞色素b_5还原酶的活性测定 | 第54页 |
| 3.3.7 细胞色素b_5还原酶与细胞色素b_5的相互作用 | 第54页 |
| 3.3.8 细胞色素P450还原酶与细胞色素b_5的相互作用 | 第54页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第54-63页 |
| 3.4.1 细胞色素b_5表达载体的构建和在大肠杆菌中的表达 | 第54-55页 |
| 3.4.2 细胞色素b_5的纯化 | 第55-57页 |
| 3.4.3 细胞色素b_5还原酶表达载体的构建和在大肠杆菌中的表达 | 第57-58页 |
| 3.4.4 细胞色素b_5还原酶的纯化 | 第58-60页 |
| 3.4.5 细胞色素b_5还原酶的活性分析 | 第60页 |
| 3.4.6 细胞色素b_5还原酶与细胞色素b_5的相互作用 | 第60-61页 |
| 3.4.7 细胞色素P450还原酶表达载体的构建和在大肠杆菌中的表达 | 第61-62页 |
| 3.4.8 细胞色素P450还原酶的纯化 | 第62-63页 |
| 3.4.9 细胞色素P450还原酶与细胞色素b_5的相互作用 | 第63页 |
| 3.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第四章 脂肪酸脱饱和酶（FADS9、FADS12和FADS15）的底物选择性及酶动力学性质研究 | 第65-80页 |
| 4.1 前言 | 第65页 |
| 4.2 材料与设备 | 第65-66页 |
| 4.2.1 供试的酶和菌株 | 第65页 |
| 4.2.2 培养基及相关溶液 | 第65-66页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第66页 |
| 4.2.4 主要仪器和设备 | 第66页 |
| 4.3 实验方法 | 第66-67页 |
| 4.3.1 脂肪酸脱饱和酶（FADS12和FADS15）的活性测定 | 第66页 |
| 4.3.2 脂肪酸脱饱和酶（FADS9）的活性测定 | 第66-67页 |
| 4.3.3 CytP450R依赖的脱饱和反应测定 | 第67页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第67-79页 |
| 4.4.1 分光光度法与脂肪酸分析法的比较 | 第67-69页 |
| 4.4.2 酶动力学常数和底物特异性的分析 | 第69-71页 |
| 4.4.3 NADPH为还原力的酶活性的分析 | 第71-72页 |
| 4.4.4 脂肪酸脱饱和酶（FADS12和FADS15）体外反应脂肪酸GC-MS分析 | 第72-78页 |
| 4.4.5 脂肪酸脱饱和酶（FADS9）的活性及底物选择性分析 | 第78-79页 |
| 4.5 本章小结 | 第79-80页 |
| 第五章 脂肪酸脱饱和酶（FADS12和FADS15）结构与功能关系的初步分析 | 第80-91页 |
| 5.1 前言 | 第80页 |
| 5.2 预测分析中使用的序列信息 | 第80-81页 |
| 5.3 预测与分析方法 | 第81页 |
| 5.3.1 脂肪酸脱饱和酶多序列比对和进化树的发生 | 第81页 |
| 5.3.2 脂肪酸脱饱和酶（FADS12和FADS15）拓扑结构的模拟 | 第81页 |
| 5.3.3 脂肪酸脱饱和酶（FADS12和FADS15）三维结构的模拟 | 第81页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第81-90页 |
| 5.4.1 脂肪酸脱饱和酶（FADS12和FADS15）初级结构及系统发生树 | 第81-84页 |
| 5.4.2 脂肪酸脱饱和酶（FADS12和FADS15）的拓扑结构模拟 | 第84-87页 |
| 5.4.3 脂肪酸脱饱和酶（FADS12和FADS15）的三维结构模拟 | 第87-90页 |
| 5.5 本章小结 | 第90-91页 |
| 主要结论与展望 | 第91-92页 |
| 创新点 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 附录：攻读博士学位期间发表论文及专利申请情况 | 第103页 |
