| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 乳酸菌 | 第11-15页 |
| 1.1.1 乳酸菌及分类 | 第11-13页 |
| 1.1.2 乳酸菌的益生作用 | 第13-15页 |
| 1.2 细菌素 | 第15-19页 |
| 1.2.1 细菌素简介 | 第15页 |
| 1.2.2 细菌素的分类 | 第15-16页 |
| 1.2.3 细菌素的抑菌机制 | 第16-19页 |
| 1.3 细菌素PlnJ和PlnK | 第19-25页 |
| 1.3.1 植物乳杆菌素基因簇介绍 | 第19-21页 |
| 1.3.2 细菌素PlnJ和PlnK的研究现状 | 第21-22页 |
| 1.3.3 植物乳杆菌ZJ316的PlnJ和PlnK氨基酸序列分析 | 第22-25页 |
| 1.4 本课题的研究和意义 | 第25-27页 |
| 1.4.1 本课题的研究意义与目的 | 第25-26页 |
| 1.4.2 研究主要内容及技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 plnJ和plnK原核表达菌株的构建和表达 | 第27-42页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.1 菌种 | 第27页 |
| 2.1.2 质粒 | 第27页 |
| 2.1.3 培养基 | 第27页 |
| 2.1.4 主要药品和试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.5 仪器 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1目的片段和引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| 2.2.2 plnJ和plnK的原核表达载体构建 | 第29-31页 |
| 2.2.3 目的片段和质粒载体的双酶切 | 第31-32页 |
| 2.2.4 目的片段和质粒载体的双酶切产物回收 | 第32-33页 |
| 2.2.5 目的片段和质粒载体连接 | 第33-34页 |
| 2.2.6 连接产物的转化 | 第34页 |
| 2.2.7 阳性转化子的筛选 | 第34-35页 |
| 2.2.8 plnJ和plnK的原核表达菌的构建 | 第35页 |
| 2.2.9 诱导表达 | 第35-36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-40页 |
| 2.3.1 目的片段plnJ和plnK的PCR扩增 | 第36-37页 |
| 2.3.2 双酶切载体和目的片段 | 第37-38页 |
| 2.3.3 双酶切产物回收 | 第38-39页 |
| 2.3.4 重组质粒中目的基因测序结果 | 第39-40页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE检验 | 第40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-42页 |
| 第三章 细菌素PlnJ和PlnK的分离纯化 | 第42-53页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第42-43页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第42页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第42-43页 |
| 3.1.3 实验仪器和设备 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 重组表达菌的扩大培养 | 第43页 |
| 3.2.2 重组蛋白粗提液的制备 | 第43-44页 |
| 3.2.3 Tricine-SDS-PAGE检验目的蛋白 | 第44页 |
| 3.2.4 Ni-NTA亲和层析纯化重组蛋白 | 第44-45页 |
| 3.2.5 重组蛋白脱盐处理 | 第45-46页 |
| 3.2.6 重组蛋白含量测定 | 第46页 |
| 3.2.7 酶切重组蛋白 | 第46-47页 |
| 3.2.8 超滤离心管收集目标蛋白 | 第47页 |
| 3.3 实验结果和分析 | 第47-51页 |
| 3.3.1 重组蛋白的大量诱导表达和分离 | 第47-48页 |
| 3.3.2 蛋白摩尔量的计算 | 第48-49页 |
| 3.3.3 酶切及目标蛋白回收 | 第49页 |
| 3.3.4 Tricine-SDS-PAGE检验 | 第49-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-53页 |
| 第四章 plnJ和plnK的抑菌效果初探 | 第53-64页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第53-54页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第53页 |
| 4.1.2 培养基 | 第53页 |
| 4.1.3 主要材料 | 第53页 |
| 4.1.4 主要仪器和设备 | 第53-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 样品的处理 | 第54页 |
| 4.2.2 抑菌圈实验 | 第54页 |
| 4.2.3 96孔板板抑菌实验 | 第54-55页 |
| 4.3 实验结果和讨论 | 第55-63页 |
| 4.3.1 样品浓度 | 第55页 |
| 4.3.2 抑菌圈实验结果 | 第55-57页 |
| 4.3.3 96孔板实验结果和分析 | 第57-63页 |
| 4.4 本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 总结和展望 | 第64-66页 |
| 5.1 总结 | 第64-65页 |
| 5.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录一 相关溶液配方 | 第71-73页 |
| 附录二 BCA蛋白溶度测定方法 | 第73-75页 |
| 附录三 质粒图谱 | 第75-76页 |
| 附录四 FPLC色谱图 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
