| 缩略语表 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-25页 |
| ·酿酒酵母概述 | 第13-15页 |
| ·酿酒酵母作为模式菌株的应用 | 第13-14页 |
| ·酿酒酵母在工业生产上的应用 | 第14-15页 |
| ·氧化胁迫对酵母细胞的影响 | 第15页 |
| ·酿酒酵母氧化胁迫防御系统 | 第15-16页 |
| ·微生物代谢工程技术研究进展 | 第16-17页 |
| ·经典代谢工程技术 | 第17页 |
| ·反向代谢工程技术 | 第17页 |
| ·全转录工程技术 | 第17-19页 |
| ·高通量差异基因表达分析技术 | 第19-22页 |
| ·新一代高通量测序技术的特点 | 第20-21页 |
| ·新一代高通量测序技术的应用 | 第21-22页 |
| ·研究目的和意义 | 第22-23页 |
| ·研究内容 | 第23-24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 通用转录因子Spt15和Taf25突变文库的构建 | 第25-40页 |
| ·前言 | 第25-26页 |
| ·试验材料与仪器 | 第26-29页 |
| ·试验菌株与质粒 | 第26页 |
| ·试验仪器 | 第26-27页 |
| ·酶与试剂盒 | 第27页 |
| ·培养基与试剂 | 第27-29页 |
| ·试验方法 | 第29-33页 |
| ·目的基因的扩增 | 第29-31页 |
| ·酿酒酵母基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·载体pYES2启动子的改造 | 第32页 |
| ·载体pZHW4-EGFP重组载体的构建 | 第32页 |
| ·重组载体的转化 | 第32-33页 |
| ·酵母突变文库的构建 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-39页 |
| ·SPT15基因和TAF25基因的克隆与验证 | 第33-34页 |
| ·载体pYES2启动子的替换 | 第34-37页 |
| ·酵母突变文库的构建 | 第37-39页 |
| ·讨论与小结 | 第39-40页 |
| 第三章 酿酒酵母BY4741抗氧化胁迫突变株的筛选 | 第40-56页 |
| ·前言 | 第40页 |
| ·试验材料与仪器 | 第40-42页 |
| ·试验菌株与载体 | 第40页 |
| ·培养基与试剂 | 第40-41页 |
| ·试验仪器 | 第41-42页 |
| ·试验方法 | 第42-47页 |
| ·酿酒酵母突变株的初筛 | 第42页 |
| ·酿酒酵母突变株的复筛 | 第42页 |
| ·菌株生长性能评估 | 第42-43页 |
| ·转录因子突变体的分析 | 第43页 |
| ·梯度点样分析 | 第43页 |
| ·胞内活性氧(ROS)水平的测定 | 第43页 |
| ·细胞内抗氧化酶活性测定 | 第43-47页 |
| ·发酵试验 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-54页 |
| ·抗氧化表型突变株的筛选 | 第47-49页 |
| ·不同氧化压力下各菌株的生长情况 | 第49页 |
| ·转录因子突变体的分析 | 第49-50页 |
| ·点样分析实验 | 第50-51页 |
| ·胞内活性氧(ROS)含量的测定 | 第51-52页 |
| ·过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活力的测定 | 第52-53页 |
| ·发酵能力对比 | 第53-54页 |
| ·讨论与小结 | 第54-56页 |
| 第四章 转录组测序技术识别酿酒酵母抗氧化胁迫关键基因 | 第56-81页 |
| ·前言 | 第56页 |
| ·试验材料与方法 | 第56-63页 |
| ·菌株 | 第56-57页 |
| ·试验仪器和材料 | 第57页 |
| ·转录组测序用RNA样品的制备 | 第57-58页 |
| ·基因测序文库的构建 | 第58页 |
| ·文库质检及测序 | 第58页 |
| ·基因差异表达分析 | 第58-59页 |
| ·反转录PCR合成cDNA第一条链 | 第59-60页 |
| ·Real-time PCR验证差异表达基因 | 第60-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-80页 |
| ·原始测序数据 | 第63-64页 |
| ·原始测序数据错误率检测 | 第64-67页 |
| ·测序数据过滤 | 第67-68页 |
| ·参考序列比对分析 | 第68-71页 |
| ·基因表达水平分析 | 第71-73页 |
| ·RNA-Seq相关性检查 | 第73-74页 |
| ·差异表达基因的筛选 | 第74-76页 |
| ·差异基因的聚类分析 | 第76-80页 |
| ·讨论与小结 | 第80-81页 |
| 第五章 酿酒酵母氧化胁迫应答机制的探究 | 第81-96页 |
| ·前言 | 第81页 |
| ·试验材料与方法 | 第81-82页 |
| ·试验菌株 | 第81页 |
| ·试验仪器和材料 | 第81页 |
| ·差异基因的GO富集分析 | 第81-82页 |
| ·差异基因的KEGG富集分析 | 第82页 |
| ·结果与分析 | 第82-94页 |
| ·氧化胁迫条件下关键基因的GO富集分析 | 第82-87页 |
| ·氧化胁迫条件下关键基因的KEGG富集分析 | 第87-92页 |
| ·无氧化胁迫条件下关键基因的GO和KEGG富集分析 | 第92-94页 |
| ·讨论与小结 | 第94-96页 |
| 第六章 全文总结与工作展望 | 第96-99页 |
| ·全文总结 | 第96-97页 |
| ·主要创新点 | 第97-98页 |
| ·工作展望 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-105页 |
| 附录1 通用转录因子spt15-5与原始序列比对 | 第105-106页 |
| 附录2 通用转录因子taf25-3与原始序列比对 | 第106-107页 |
| 附录3 载体pYES2结构示意图 | 第107-108页 |
| 附录4 载体pGADT7 AD结构示意图 | 第108-109页 |
| 附录5 载体pZHW4结构示意图 | 第109-110页 |
| 附录6 基因的熔解曲线和扩增曲线 | 第110-111页 |
| 附录6 基因的熔解曲线和扩增曲线(续) | 第111-112页 |
| 附录7 差异基因的GO富集分析(HP_M vs HP_C) | 第112-113页 |
| 附录8 差异基因的GO富集分析(nHP_M vs nHP_C) | 第113-114页 |
| 附录9 差异基因的GO富集分析(HP_M vs nHP_M) | 第114-115页 |
| 附录10 差异基因的GO富集分析(HP_C vs nHP_C) | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 个人简介 | 第117页 |
