| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1 β-葡萄糖苷酶的研究概述 | 第15-20页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的来源 | 第15页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分类 | 第15-16页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的作用机理 | 第16页 |
| ·制备β-葡萄糖苷酶的研究方法 | 第16-17页 |
| ·分离纯化β-葡萄糖苷酶的方法 | 第17-18页 |
| ·β-葡萄糖苷酶在食品加工中的研究进展 | 第18-20页 |
| ·β-葡萄糖苷酶水解纤维素的研究进展 | 第18页 |
| ·β-葡萄糖苷酶生产低聚龙胆糖的研究进展 | 第18页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的脱苦作用 | 第18-19页 |
| ·β-葡萄糖苷酶作为风味酶的研究进展 | 第19页 |
| ·β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的研究进展 | 第19-20页 |
| 2 基因重组技术在酵母菌中的研究概述 | 第20-23页 |
| ·原生质体融合的研究进展 | 第20页 |
| ·在酵母菌研究中原生质体融合技术的优点 | 第20-21页 |
| ·在酵母菌研究中原生质体融合的方法 | 第21-23页 |
| 3 高密度培养技术的研究 | 第23-25页 |
| ·高密度技术的基本理论 | 第23-24页 |
| ·高密度技术的研究进展 | 第24-25页 |
| ·高密度培养技术在微生物发酵中的应用 | 第24页 |
| ·高密度技术的生物反应器 | 第24-25页 |
| ·补料分批发酵的应用研究 | 第25页 |
| 4 本课题研究的目的、意义及主要内容 | 第25-27页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第25页 |
| ·本课题研究的主要内容 | 第25-27页 |
| 第二章 基因重组选育高产β-葡萄糖苷酶的新菌株 | 第27-41页 |
| 1 引言 | 第27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-34页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·实验菌株 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·实验溶液 | 第28页 |
| ·实验试剂 | 第28-29页 |
| ·实验设备与仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·菌株活化 | 第29-30页 |
| ·制备菌悬液 | 第30页 |
| ·菌株诱变的流程 | 第30页 |
| ·紫外线诱变 | 第30-31页 |
| ·超声波诱变 | 第31页 |
| ·原生质体的制备和再生 | 第31-33页 |
| ·原生质体的制备 | 第31-32页 |
| ·亲株原生质体融合 | 第32-33页 |
| ·融合子的检验 | 第33页 |
| ·融合子的筛选 | 第33页 |
| ·新菌株的遗传稳定性 | 第33页 |
| ·制备粗酶液 | 第33-34页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活力测定(p-NPG法) | 第34页 |
| ·对硝基苯酚标准曲线的制作 | 第34页 |
| ·酶活测定 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-39页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的活力 | 第34-35页 |
| ·原生质体亲株的筛选 | 第35-36页 |
| ·诱变剂量的确定 | 第35-36页 |
| ·紫外诱变时间的确定 | 第35-36页 |
| ·超声波诱变时间的确定 | 第36页 |
| ·原生质体制备条件的选择 | 第36-38页 |
| ·酶解时间的选择 | 第36-37页 |
| ·原生质体灭活条件的选择 | 第37-38页 |
| ·三次基因重组 | 第38-39页 |
| ·三次基因重组菌株F3-25遗传稳定性 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 融合子F3-25产β-葡萄糖苷酶发酵条件的优化 | 第41-60页 |
| 1 引言 | 第41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-45页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·实验菌株 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·实验试剂 | 第41-42页 |
| ·实验设备与仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·菌株的活化 | 第42页 |
| ·粗酶液的制取 | 第42页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活力测定 | 第42-43页 |
| ·融合菌株发酵培养基优化 | 第43页 |
| ·碳源对产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第43页 |
| ·氮源对产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第43页 |
| ·无机盐对产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第43页 |
| ·响应面实验设计与分析 | 第43页 |
| ·融合菌株发酵培养条件优化 | 第43-45页 |
| ·温度对产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第43页 |
| ·溶氧量对产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第43-44页 |
| ·接种量对产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第44页 |
| ·初始pH值对产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第44页 |
| ·正交实验设计 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-58页 |
| ·培养基组分的优化 | 第45-54页 |
| ·碳源的选择 | 第45-46页 |
| ·碳源对融合菌株F3-25产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第45页 |
| ·麸皮浓度对融合菌株产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第45-46页 |
| ·氮源的确定 | 第46-47页 |
| ·氮源对融合菌株F3-25产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第46-47页 |
| ·酵母粉浓度对融合菌株产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第47页 |
| ·无机盐的确定 | 第47-49页 |
| ·无机盐对融合菌株产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第47-48页 |
| ·KCl浓度对融合菌株产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第48页 |
| ·CaCl_2浓度对融合菌株产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第48-49页 |
| ·响应面分析法优化发酵培养基 | 第49-54页 |
| ·中心组合试验设计及方差分析 | 第49-51页 |
| ·试验结果分析 | 第51-54页 |
| ·二元回归方程的验证 | 第54页 |
| ·融合菌株F3-25发酵条件的优化 | 第54-58页 |
| ·发酵温度对融合菌株F3-25产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第54-55页 |
| ·溶氧量对融合菌株F3-25产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第55-56页 |
| ·接种量对融合菌株F3-25产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第56-57页 |
| ·初始pH值对融合菌株产β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第57页 |
| ·正交实验设计 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| ·关于融合菌株F3-25的发酵培养基组分 | 第58-59页 |
| ·关于融合菌株F3-25的发酵条件 | 第59-60页 |
| 第四章 融合菌株的高密度发酵模型的构建 | 第60-67页 |
| 1 引言 | 第60页 |
| 2 材料与方法 | 第60-62页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·实验菌株 | 第60页 |
| ·培养基 | 第60页 |
| ·实验试剂 | 第60-61页 |
| ·实验设备与仪器 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-62页 |
| ·融合菌株F3-25的培养条件 | 第61页 |
| ·补料分批发酵 | 第61-62页 |
| ·麸皮补料量对酶活的影响 | 第61页 |
| ·麸皮补料次数对酶活的影响 | 第61页 |
| ·麸皮汁补料方式对酶活的影响 | 第61-62页 |
| ·融合菌株F3-25菌体密度的测定 | 第62页 |
| ·融合菌株F3-25细胞干重的测定 | 第62页 |
| ·融合菌株F3-25生长动力学模型 | 第62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-66页 |
| ·麸皮补料量对β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第62-63页 |
| ·麸皮补料次数对β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第63-64页 |
| ·补料方式对β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第64页 |
| ·融合菌株F3-25生长曲线及动力学模型 | 第64-66页 |
| ·融合菌株F3-25生长曲线 | 第64-65页 |
| ·融合菌株F3-25生长动力学模型 | 第65页 |
| ·模型验证 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| 第五章 β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第67-79页 |
| 1 引言 | 第67页 |
| 2 材料与方法 | 第67-71页 |
| ·实验材料 | 第67页 |
| ·实验菌株 | 第67页 |
| ·培养基 | 第67页 |
| ·实验试剂 | 第67-68页 |
| ·实验设备与仪器 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-71页 |
| ·融合菌株F3-25的培养条件 | 第68页 |
| ·粗酶液的制取 | 第68页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活力测定 | 第68-69页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第69页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第69-70页 |
| ·透析浓缩 | 第70页 |
| ·AKTA purifier-900蛋白分离纯化工作站分离β-葡萄糖苷酶 | 第70页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的纯度鉴定 | 第70页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的最适反应温度 | 第70-71页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的热稳定性 | 第71页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的最适pH | 第71页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的pH稳定性 | 第71页 |
| ·金属离子对β-葡萄糖苷酶酶活力的影响 | 第71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-77页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分离纯化 | 第71-74页 |
| ·硫酸铵盐析条件确定 | 第71-72页 |
| ·AKTA purifier-900蛋白分离纯化工作站分离β-葡萄糖苷酶 | 第72-73页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第73-74页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的酶学性质 | 第74-77页 |
| ·温度对β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第74页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的热稳定性 | 第74-75页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的最适pH | 第75-76页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的pH稳定性 | 第76页 |
| ·金属离子对β-葡萄糖苷酶酶活的影响 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分离纯化 | 第77页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的性质 | 第77-79页 |
| 第六章 结论与展望 | 第79-81页 |
| 1 主要结论 | 第79-80页 |
| 2 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读博士期间发表的文章 | 第94页 |
