| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 缩略语表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-46页 |
| 1 云斑天牛的研究现状 | 第17-20页 |
| ·云斑天牛生活史 | 第17-18页 |
| ·天牛成虫与植物之间的化学联系 | 第18-20页 |
| ·天牛的寄主信息化学物质 | 第18-19页 |
| ·天牛对寄主的识别定位机制 | 第19页 |
| ·植物挥发性物质对天牛行为的影响 | 第19-20页 |
| 2 昆虫的嗅觉 | 第20-27页 |
| ·昆虫对气味分子的识别 | 第21-23页 |
| ·昆虫的嗅觉感器 | 第21-23页 |
| ·昆虫气味结合蛋白对气味分子的探测与结合 | 第23页 |
| ·气味结合蛋白和气味分子复合物在体内的运输 | 第23-26页 |
| ·气味分子在体内的运输 | 第23-24页 |
| ·气味分子与气味受体的结合 | 第24-25页 |
| ·气味分子的失活 | 第25-26页 |
| ·嗅觉编码的电化学信号传导 | 第26-27页 |
| 3 昆虫嗅觉相关蛋白 | 第27-38页 |
| ·气味结合蛋白(Odorant Bindingproteins,OBPs) | 第27-33页 |
| ·气味结合蛋白的种类和特征 | 第27-30页 |
| ·气味结合蛋白与信息素分子的结合释放机制 | 第30-32页 |
| ·气味结合蛋白的功能 | 第32-33页 |
| ·气味结合蛋白研究意义 | 第33页 |
| ·化学感受蛋白(Chemosensory Proteins,CSPs) | 第33-36页 |
| ·化学感受蛋白的基本特征 | 第34页 |
| ·化学感受蛋白的表达分布 | 第34页 |
| ·化学感受蛋白的分子结构 | 第34-35页 |
| ·化学感受蛋白的生理功能 | 第35-36页 |
| ·气味受体(Olfactory Receptors,Ors) | 第36-37页 |
| ·气味降解酶(Odorant Degrading Enzymes,ODEs) | 第37-38页 |
| 4 嗅觉相关蛋白的结构研究 | 第38-40页 |
| 5 cDNA文库及表达序列标签技术(Expressed sequence tag,ESTs) | 第40-44页 |
| ·构建cDNA文库的用途及意义 | 第40-41页 |
| ·cDNA文库构建方法 | 第41-42页 |
| ·表达序列标签(ESTs)技术 | 第42-43页 |
| ·ESTs原始数据的预处理 | 第42页 |
| ·ESTs序列的聚类、拼接及非冗余EST序列的获得 | 第42-43页 |
| ·序列同源性比较分析 | 第43页 |
| ·生物信息学在EST分析中的应用 | 第43-44页 |
| 6 课题研究内容及目的意义 | 第44页 |
| 7 课题的创新之处 | 第44-45页 |
| 技术路线 | 第45-46页 |
| 第二章 云斑天牛触角cDNA文库的构建 | 第46-65页 |
| 1 材料和方法 | 第46-55页 |
| ·实验材料 | 第46-48页 |
| ·供试昆虫 | 第46-47页 |
| ·实验试剂 | 第47页 |
| ·实验仪器 | 第47页 |
| ·所用引物序列及载体 | 第47-48页 |
| ·试验方法 | 第48-55页 |
| ·供试昆虫云斑天牛触角总RNA的提取 | 第48-49页 |
| ·云斑天牛触角cDNA文库的构建 | 第49-54页 |
| ·云斑天牛触角cDNA文库EST的生物信息学分析 | 第54-55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-63页 |
| ·云斑天牛触角总RNA质量检测 | 第55页 |
| ·云斑天牛触角总RNA完整性检测 | 第55页 |
| ·云斑天牛触角总RNA浓度测定 | 第55页 |
| ·云斑天牛触角cDNA文库构建的结果与分析 | 第55-58页 |
| ·云斑天牛cDNA第二链的合成(LD-PCR) | 第55-56页 |
| ·ds cDNA Sfi Ⅰ酶切及分级分离纯化 | 第56页 |
| ·云斑天牛cDNA文库滴度测定 | 第56-57页 |
| ·云斑天牛cDNA文库克隆重组率和插入片段长度检测 | 第57-58页 |
| ·云斑天牛触角cDNA文库EST的生物信息学分析 | 第58-63页 |
| ·测序拼接结果分析 | 第58-59页 |
| ·EST序列同源性比较及基因功能分析 | 第59-61页 |
| ·与云斑天牛嗅觉及化学感受相关的基因 | 第61-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| ·云斑天牛总RNA的提取 | 第63页 |
| ·云斑天牛触角全长cDNA文库质量评价 | 第63-64页 |
| ·云斑天牛文库EST序列的生物信息学分析 | 第64-65页 |
| 第三章 云斑天牛气味结合蛋白基因的克隆和序列分析 | 第65-78页 |
| 1 材料和方法 | 第66-71页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·触角总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第66-67页 |
| ·引物设计 | 第67-68页 |
| ·PCR扩增及其产物的克隆 | 第68-70页 |
| ·PCR反应体系及程序 | 第68页 |
| ·PCR产物回收 | 第68-69页 |
| ·T/A连接 | 第69页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第69页 |
| ·阳性克隆检测及质粒提取 | 第69-70页 |
| ·云斑天牛GOBP基因序列分析 | 第70-71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-77页 |
| ·云斑天牛GOBP基因的PCR扩增 | 第71页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第71页 |
| ·云斑天牛GOBP基因的序列分析 | 第71-77页 |
| 3 讨论 | 第77-78页 |
| 第四章 云斑天牛化学感受蛋白基因的克隆和序列分析 | 第78-89页 |
| 1 材料和方法 | 第79-81页 |
| ·实验材料 | 第79页 |
| ·触角总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第79页 |
| ·引物设计 | 第79页 |
| ·PCR扩增及其产物的克隆 | 第79-80页 |
| ·PCR反应体系及程序 | 第79页 |
| ·PCR产物回收 | 第79页 |
| ·T/A连接 | 第79页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第79页 |
| ·阳性克隆检测及质粒提取 | 第79-80页 |
| ·云斑天牛CSP基因序列分析 | 第80-81页 |
| 2 结果与分析 | 第81-87页 |
| ·云斑天牛CSP基因的PCR扩增 | 第81页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第81-82页 |
| ·云斑天牛CSPs基因的序列分析 | 第82-87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| 第五章 云斑天牛OBPs和CSPs基因的转录时空表达研究 | 第89-99页 |
| 1 材料和方法 | 第90-92页 |
| ·实验材料 | 第90页 |
| ·触角总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第90页 |
| ·引物设计 | 第90-91页 |
| ·RT-PCR检测云斑天牛OBPs和CSPs基因的组织分布检测 | 第91页 |
| ·实时定量PCR检测云斑天牛OBPs和CSPs基因的时空分布 | 第91-92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-97页 |
| ·云斑天牛OBPs和CSPs基因的组织分布 | 第92-93页 |
| ·云斑天牛OBPs和CSPs基因的时空表达谱 | 第93-97页 |
| 3 讨论 | 第97-99页 |
| 第六章 云斑天牛OBP2和CSP2原核表达载体的构建及蛋白纯化 | 第99-129页 |
| 1 材料和方法 | 第100-110页 |
| ·实验材料 | 第100-101页 |
| ·构建原核表达载体pET-32a(+)-BhorOBP2/BhorCSP2 | 第101-110页 |
| ·pET-32a(+)的改造 | 第102-105页 |
| ·构建原核表达载体pET-32a(+)-BhorOBP2/BhorCSP2 | 第105-107页 |
| ·目的蛋白的原核表达 | 第107页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第107页 |
| ·融合蛋白的大量表达 | 第107页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第107-110页 |
| ·目的蛋白的表征 | 第110页 |
| 2 结果与分析 | 第110-127页 |
| ·不含Thrombin酶切位点的pET-32a(+)载体的获得 | 第110-111页 |
| ·原核表达载体pET-32a(+)-BhorOBP2/BhorCSP2的构建 | 第111-112页 |
| ·融合蛋白pET-32a(+)-BhorOBP2/BhorCSP2的表达条件摸索及可溶性鉴定 | 第112-114页 |
| ·融合蛋白pET-32a(+)-BhorOBP2/BhorCSP2的大量表达及纯化 | 第114-125页 |
| ·pET-32a(+)-BhorOBP2融合蛋白的纯化 | 第114-121页 |
| ·pET-32a(+)-BhorCSP2融合蛋白的纯化 | 第121-125页 |
| ·BhorOBP2蛋白表征 | 第125-127页 |
| ·BhorOBP2融合蛋白的质谱分析 | 第125-127页 |
| ·BhorOBP2融合蛋白的圆二色谱分析 | 第127页 |
| 3 讨论 | 第127-129页 |
| 第七章 结论与展望 | 第129-132页 |
| 1 结论 | 第129-131页 |
| ·云斑天牛触角cDNA文库的构建 | 第129-130页 |
| ·云斑天牛嗅觉相关基因的克隆和序列分析 | 第130页 |
| ·云斑天牛嗅觉相关基因的时空表达谱分析 | 第130-131页 |
| ·云斑天牛嗅觉基因蛋白的表达和纯化 | 第131页 |
| 2 展望 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-144页 |
| 在读期间发表科研论文 | 第144-145页 |
| 致谢 | 第145页 |
