| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第10-17页 |
| 1.1 真菌免疫调节蛋白的研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1.1 真菌免疫调节蛋白的发现及成员 | 第10-11页 |
| 1.1.2 真菌免疫调节蛋白的基因和蛋白特性 | 第11-12页 |
| 1.1.3 真菌免疫调节蛋白生物活性 | 第12-13页 |
| 1.1.4 真菌免疫调节蛋白抗肿瘤活性 | 第13-14页 |
| 1.1.5 真菌免疫调节蛋白重组表达体系 | 第14-15页 |
| 1.1.6 真菌免疫调节蛋白生物医学中的应用前景 | 第15页 |
| 1.2 本课题的研究意义 | 第15-17页 |
| 第2章 新型真菌免疫调节蛋白基因发掘和生物信息学分析 | 第17-24页 |
| 2.1 实验方法 | 第17-18页 |
| 2.1.1 基本理化性质预测和分析 | 第17页 |
| 2.1.2 信号肽、亚细胞定位与跨膜结构预测 | 第17页 |
| 2.1.3 保守结构域分析与系统发育树构建 | 第17页 |
| 2.1.4 同源建模与评价 | 第17页 |
| 2.1.5 蛋白-蛋白对接 | 第17-18页 |
| 2.2 实验结果与分析 | 第18-24页 |
| 2.2.1 7种草菇免疫调节蛋白理化性质预测与分析： | 第18-20页 |
| 2.2.2 7种草菇免疫调节蛋白信号肽和亚细胞定位的预测分析 | 第20页 |
| 2.2.3 7种草菇免疫调节蛋白遗传进化分析 | 第20-21页 |
| 2.2.4 FIP-vvo82高活性的分子机理初探 | 第21-24页 |
| 第3章 新型免疫调节蛋白体外构建及表达纯化 | 第24-31页 |
| 3.1 实验仪器与试剂 | 第24-25页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第24页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第24-25页 |
| 3.2 实验方法 | 第25-28页 |
| 3.2.1 重组新型真菌免疫调节蛋白目的基因的合成 | 第25页 |
| 3.2.2 重组质粒的构建 | 第25页 |
| 3.2.3 转化至Top10感受态 | 第25-26页 |
| 3.2.4 重组质粒转化BL21感受态 | 第26页 |
| 3.2.5 IPTG诱导表达蛋白 | 第26页 |
| 3.2.6 原核表达产物的纯化 | 第26-27页 |
| 3.2.7 浓缩蛋白 | 第27页 |
| 3.2.8 重组蛋白浓度的测定 | 第27页 |
| 3.2.9 SDS凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第28-31页 |
| 3.3.1 重组6种FIP-vvo的基因及氨基酸序列 | 第28-29页 |
| 3.3.3 新型真菌免疫调节蛋白工程菌的诱导表达及纯化 | 第29-31页 |
| 第4章 新型真菌免疫调节蛋白生物活性研究 | 第31-59页 |
| 4.1 实验仪器及试剂 | 第31-32页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第31-32页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第32页 |
| 4.2 实验方法 | 第32-42页 |
| 4.2.1 肿瘤细胞的复苏 | 第32-33页 |
| 4.2.2 细胞传代 | 第33页 |
| 4.2.3 细胞冻存 | 第33-34页 |
| 4.2.4 白介素2(IL-2)活性测定 | 第34页 |
| 4.2.5 划痕实验检验不同真菌免疫调节蛋白刺激不同肿瘤细胞后对细胞体外迁移能力的影响 | 第34-35页 |
| 4.2.6 细胞活力检测 | 第35页 |
| 4.2.7 流式细胞学检测 | 第35-36页 |
| 4.2.8 细胞凋亡-Hoechst染色 | 第36-37页 |
| 4.2.9 荧光定量PCR(RT-qPCR) | 第37-39页 |
| 4.2.10 线粒体膜电位检测 | 第39-40页 |
| 4.2.11 细胞蛋白提取 | 第40页 |
| 4.2.12 胞质和线粒体蛋白质提取 | 第40-42页 |
| 4.3 实验结果及分析 | 第42-59页 |
| 4.3.1 白介素2(IL-2)检测 | 第42-43页 |
| 4.3.2 细胞划痕实验 | 第43-45页 |
| 4.3.3 细胞活力检测 | 第45-47页 |
| 4.3.4 流式细胞学细胞凋亡检测 | 第47-49页 |
| 4.3.5 Hoechst染色检测 | 第49-51页 |
| 4.3.6 草菇免疫调节蛋白对细胞线粒体膜电位(MMP)的影响 | 第51-53页 |
| 4.3.7 草菇免疫调节蛋白对Hela,A549和Spca-1细胞凋亡相关因子Bcl-2,Bcl-xl,Bcl-2,Cleavedcaspase-3和Cytoc蛋白表达的影响 | 第53-59页 |
| 第5章 讨论 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
