| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词注释表 | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 亚油酸异构酶(PAI)的研究进展 | 第10-13页 |
| 1.1.1 反10,顺12-共轭亚油酸简介 | 第10页 |
| 1.1.2 亚油酸异构酶(PAI)的结构及酶学性质 | 第10-11页 |
| 1.1.3 PAI的异源表达研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2 重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达 | 第13-17页 |
| 1.2.1 包涵体的形成 | 第13-14页 |
| 1.2.2 提高重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达水平的方法 | 第14-17页 |
| 1.3 重组蛋白在枯草芽孢杆菌中的分泌表达 | 第17-19页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌表达系统简介 | 第17页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌蛋白质的分泌途径 | 第17-19页 |
| 1.4 课题意义及内容 | 第19-21页 |
| 1.4.1 来源及研究意义 | 第19页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 培养基配置 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂及配置 | 第22-23页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 亚油酸异构酶基因表达载体的构建 | 第23-26页 |
| 2.2.2 大肠杆菌及枯草芽孢杆菌的化学转化 | 第26页 |
| 2.2.3 重组亚油酸异构酶的表达 | 第26-27页 |
| 2.2.4 重组融合蛋白MBP-PAI的分离纯化 | 第27-28页 |
| 2.3 分析方法 | 第28-30页 |
| 2.3.1 蛋白浓度的测定 | 第28页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE凝胶电泳和WesternBlot | 第28页 |
| 2.3.3 重组融合蛋白的粗酶活检测 | 第28-29页 |
| 2.3.4 纯酶活性测定方法 | 第29-30页 |
| 3 结果与讨论 | 第30-51页 |
| 3.1 大肠杆菌异源表达亚油酸异构酶重组菌株的构建 | 第30-32页 |
| 3.1.1 载体构建及鉴定 | 第30-32页 |
| 3.1.2 重组菌株构建及鉴定 | 第32页 |
| 3.2 大肠杆菌中重组亚油酸异构酶的表达及可溶性分析 | 第32-37页 |
| 3.2.1 融合标签及启动子对重组亚油酸异构酶表达的影响 | 第32-36页 |
| 3.2.2 融合标签及启动子对重组亚油酸异构酶酶活的影响 | 第36-37页 |
| 3.3 重组融合蛋白MBP-PAI的诱导表达及分离纯化 | 第37-41页 |
| 3.3.1 E.coliBL21(DE3)(pET24a-Mpai)诱导表达条件的优化 | 第37-38页 |
| 3.3.2 重组融合蛋白MBP-PAI的分离纯化结果 | 第38-40页 |
| 3.3.3 重组融合蛋白MBP标签的去除 | 第40-41页 |
| 3.4 重组融合蛋白MBP-PAI酶学性质研究 | 第41-47页 |
| 3.4.1 温度对MBP-PAI活性的影响 | 第41-42页 |
| 3.4.2 温度对MBP-PAI稳定性的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.3 pH对MBP-PAI活性的影响 | 第43页 |
| 3.4.4 金属离子对MBP-PAI活性的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.5 表面活性剂对MBP-PAI活性的影响 | 第44-46页 |
| 3.4.6 底物反应动力学研究 | 第46-47页 |
| 3.5 亚油酸异构酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达 | 第47-51页 |
| 3.5.1 枯草芽孢杆菌中亚油酸异构酶分泌表达载体的构建 | 第47-49页 |
| 3.5.2 菌株构建及鉴定 | 第49页 |
| 3.5.3 亚油酸异构酶的分泌表达 | 第49-51页 |
| 主要结论与展望 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第51-52页 |
| 展望 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第60页 |
