食品中常见致病菌的可视芯片检测技术研究
| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-31页 |
| ·微生物污染对食品安全的影响 | 第14-17页 |
| ·常用食源性致病菌的检测技术 | 第17-25页 |
| ·传统生化鉴定方法 | 第17-18页 |
| ·免疫学方法 | 第18-19页 |
| ·PCR 法 | 第19-23页 |
| ·多重PCR 法 | 第21-22页 |
| ·定量PCR 法 | 第22-23页 |
| ·基因芯片方法 | 第23-25页 |
| ·可视芯片技术及其应用前景 | 第25-28页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第28页 |
| ·研究思路 | 第28-31页 |
| ·研究目标 | 第28-29页 |
| ·研究内容 | 第29页 |
| ·技术路线 | 第29-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-41页 |
| ·材料与仪器 | 第31-33页 |
| ·生物信息学资料 | 第31页 |
| ·实验菌株 | 第31-32页 |
| ·实验试剂 | 第32页 |
| ·实验仪器 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-41页 |
| ·食源性致病菌引物和探针的设计 | 第33-34页 |
| ·利用16s rDNA 序列设计通用引物 | 第34页 |
| ·利用23s rDNA 序列设计通用引物 | 第34页 |
| ·利用特异性基因片段设计特异性引物 | 第34页 |
| ·食源性致病菌引物的PCR 扩增 | 第34-37页 |
| ·引物与探针的合成 | 第35页 |
| ·细菌培养及DNA 的提取 | 第35页 |
| ·细菌DNA 提取结果检测 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增及结果观察 | 第36页 |
| ·PCR 产物的回收与测序 | 第36-37页 |
| ·可视芯片检测方法的建立 | 第37-41页 |
| ·芯片点样及后处理 | 第37-38页 |
| ·芯片杂交反应 | 第38页 |
| ·探针点样条件确定 | 第38-39页 |
| ·阳性对照点样浓度的确定 | 第38页 |
| ·最适探针点样浓度的确定 | 第38-39页 |
| ·可视芯片的制备 | 第39页 |
| ·探针特异性实验 | 第39-40页 |
| ·菌液检测灵敏度实验 | 第40页 |
| ·添加模拟污染实验 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-73页 |
| ·食源性致病菌引物和探针的设计 | 第41-58页 |
| ·16S rDNA 序列比对结果分析 | 第41页 |
| ·23S rDNA 序列分析及通用引物的设计 | 第41-42页 |
| ·利用特异性基因片段设计引物 | 第42-58页 |
| ·食源性致病菌引物的PCR 扩增 | 第58-68页 |
| ·细菌培养及DNA 的提取结果 | 第58-59页 |
| ·23S rDNA 通用引物扩增及测序结果分析 | 第59-65页 |
| ·特异性序列设计的引物扩增结果 | 第65-68页 |
| ·可视芯片检测方法的建立 | 第68-71页 |
| ·阳性对照点样浓度的确定 | 第68页 |
| ·探针点样浓度实验结果 | 第68-69页 |
| ·探针特异性实验结果 | 第69-70页 |
| ·菌液检测灵敏度实验结果 | 第70-71页 |
| ·添加模拟污染实验结果 | 第71-73页 |
| 4 讨论 | 第73-75页 |
| ·特异性引物和探针的设计与筛选 | 第73页 |
| ·可视芯片点制中的质量控制 | 第73-74页 |
| ·芯片杂交结果的判定标准及背景污染的去除 | 第74页 |
| ·进一步研究方向 | 第74-75页 |
| 5 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-85页 |
| 附录 | 第85-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 作者简介 | 第101页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第101页 |
