| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第1章 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 壳聚糖、壳聚糖衍生物 | 第12页 |
| 1.2 重组蛋白及其分离纯化的意义 | 第12-14页 |
| 1.3 蛋白质的分离纯化技术和方法 | 第14-21页 |
| 1.3.1 色谱分离技术 | 第14-18页 |
| 1.3.2 沉淀法 | 第18-19页 |
| 1.3.3 透析和过滤 | 第19页 |
| 1.3.4 电泳技术 | 第19-21页 |
| 1.4 壳聚糖衍生物在蛋白质分离纯化中的应用 | 第21页 |
| 1.5 本论文的选题背景及立题思想 | 第21-24页 |
| 第2章 分离纯化介质的制备及表征 | 第24-30页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 实验与方法 | 第25-27页 |
| 2.2.1 EDTA二酐的合成 | 第25页 |
| 2.2.2 EDTA-壳聚糖的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.3 热重分析(TGA) | 第26页 |
| 2.2.4 傅里叶变换红外光谱(FT-IR)测定 | 第26-27页 |
| 2.2.5 核磁共振光谱(NMR)测定 | 第27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-29页 |
| 2.3.1 EDTA-二酐的表征 | 第27页 |
| 2.3.2 壳聚糖以及EDTA-壳聚糖的红外光谱(FT-IR)分析 | 第27-28页 |
| 2.3.3 壳聚糖和EDTA-壳聚糖的热重曲线分析(TGA) | 第28-29页 |
| 2.4 本章小结 | 第29-30页 |
| 第3章 金属离子的螯合及对EGFP-(His)_6-NH_2的亲和性能研究 | 第30-42页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第30-31页 |
| 3.2 实验与方法 | 第31-32页 |
| 3.2.1 不同的金属离子初始浓度对EDTA-壳聚糖吸附的影响 | 第31页 |
| 3.2.2 不同孵育时间对EDTA-壳聚糖吸附的影响 | 第31-32页 |
| 3.2.3 不同pH的离子溶液对EDTA-chitosan吸附的影响 | 第32页 |
| 3.3 ICP-MS测定金属离子含量 | 第32-33页 |
| 3.3.1 SEM和TEM | 第32-33页 |
| 3.4 M~(2+)-EDTA-壳聚糖对EGFP-(His)_6-NH_2亲和及对荧光强度的影响 | 第33页 |
| 3.5 重复利用能力的探究 | 第33-34页 |
| 3.6 结果与分析 | 第34-41页 |
| 3.6.1 EDTA-壳聚糖和M~(2+)-EDTA-壳聚糖的电镜图(M=Ni) | 第34-35页 |
| 3.6.2 金属离子(Ni,Cu,Zn)测定标准曲线的制作 | 第35页 |
| 3.6.3 初始浓度对金属离子吸附的影响 | 第35-36页 |
| 3.6.4 孵育时间对金属离子吸附的影响 | 第36-37页 |
| 3.6.5 pH对金属离子吸附的影响 | 第37-38页 |
| 3.6.6 M~(2+)-EDTA-壳聚糖对EGFP-(His)_6-NH_2亲和及对荧光强度的影响 | 第38-40页 |
| 3.6.7 重复利用能力的探究 | 第40-41页 |
| 3.7 本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 EGFP-(His)_6-NH_2分离条件优化及其分离纯化 | 第42-60页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第42-43页 |
| 4.2 实验与方法 | 第43-47页 |
| 4.2.1 不同吸附剂(M~(2+)-EDTA-壳聚糖)的量对一定量蛋白吸附的影响 | 第43-44页 |
| 4.2.2 孵育时间对定量蛋白吸附的影响 | 第44页 |
| 4.2.3 M~(2+)-EDTA-壳聚糖在不同离子强度下对(His)_6-NH_2亲和纯化的探究 | 第44页 |
| 4.2.4 缓冲液pH对M~(2+)-EDTA-壳聚糖亲和分离(His)_6-NH_2的影响 | 第44-45页 |
| 4.2.5 咪唑浓度对目的蛋白洗脱的影响 | 第45页 |
| 4.2.6 M~(2+)-壳聚糖与M~(2+)-EDTA-壳聚糖对比试验(M=Ni,Cu,Zn) | 第45-46页 |
| 4.2.7 BCA法测定蛋白浓度 | 第46页 |
| 4.2.8 SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第47-58页 |
| 4.3.1 介质用量的影响 | 第47页 |
| 4.3.2 孵育时间的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.3 离子强度的影响 | 第48-51页 |
| 4.3.4 缓冲液pH的影响 | 第51-53页 |
| 4.3.5 咪唑浓度的影响 | 第53-55页 |
| 4.3.6 M~(2+)-壳聚糖与M~(2+)-EDTA-壳聚糖对比试验(M=Ni,Cu,Zn) | 第55-56页 |
| 4.3.7 E Coli表达的EGFP-(His)_6-NH_2分离纯化 | 第56-57页 |
| 4.3.8 E Coli表达的卡拉霉素抗性Kana-(His)_6-NH_2蛋白的分离纯化 | 第57-58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-60页 |
| 第5章 EDTA-壳聚糖膜的制备及应用 | 第60-68页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第60页 |
| 5.2 实验与方法 | 第60-63页 |
| 5.2.1 离子液体的合成 | 第60-61页 |
| 5.2.2 离子液体的表征 | 第61页 |
| 5.2.3 EDTA-壳聚糖膜和壳聚糖膜的制作 | 第61页 |
| 5.2.4 金属离子吸附及蛋白吸附分离 | 第61-62页 |
| 5.2.5 蛋白吸附时间曲线 | 第62页 |
| 5.2.6 EGFP-(His)_6-NH_2的分离纯化 | 第62页 |
| 5.2.7 E.coli表达的Kana-(His)_6-NH_2的分离纯化 | 第62-63页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第63-68页 |
| 5.3.1 离子液体表征(H~1-NMR) | 第63页 |
| 5.3.2 EDTA-壳聚糖和壳聚糖膜的制备 | 第63-64页 |
| 5.3.3 蛋白吸附动态曲线 | 第64-65页 |
| 5.3.4 EGFP-(His)_6-NH_2的分离纯化 | 第65-66页 |
| 5.3.5 E.coli表达的Kana-(His)_6-NH_2的分离纯化 | 第66-68页 |
| 第6章 总结与展望 | 第68-72页 |
| 6.1 总结 | 第68-69页 |
| 6.2 展望 | 第69-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 研究生阶段发表的论文 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
