| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 啤酒的发展 | 第13页 |
| 2 啤酒的营养价值 | 第13-14页 |
| 3 啤酒有害菌研究概况 | 第14-20页 |
| ·必然啤酒有害菌 | 第14-17页 |
| ·乳酸杆菌(Lactobacillus) | 第14-16页 |
| ·四联球菌(Pediococcus) | 第16页 |
| ·果胶杆菌(Pectinatus) | 第16页 |
| ·巨球菌(Megasphaera Cerevisiae) | 第16页 |
| ·糖化酵母(Saccharomyces diastaticus) | 第16-17页 |
| ·潜在啤酒有害菌 | 第17-19页 |
| ·麦汁细菌 | 第17页 |
| ·明串球菌(Leuconostoc mesenteroides) | 第17页 |
| ·克氏小球菌(Micrococcus kristinae) | 第17-18页 |
| ·乳链球菌(Lactococcus lactis) | 第18页 |
| ·发酵单胞菌(Zymomonas) | 第18页 |
| ·巴氏酵母(S.erevisiae) | 第18页 |
| ·哈弗尼菌(Hafnia) | 第18-19页 |
| ·间接啤酒有害菌 | 第19页 |
| ·变形杆菌(Obesumbacerium proteus) | 第19页 |
| ·芽孢杆菌(Bacillus) | 第19页 |
| ·假单胞菌(Pseudomonasdaceae) | 第19页 |
| ·啤酒有害菌指示菌 | 第19-20页 |
| ·醋酸杆菌(Acetobacter) | 第19-20页 |
| ·克雷白氏杆菌(Klebsiella) | 第20页 |
| 4 啤酒有害菌检测方法 | 第20-24页 |
| ·小菌落检测法 | 第20-21页 |
| ·PCR法 | 第21-22页 |
| ·ATP生物发光法 | 第22-23页 |
| ·免疫学方法 | 第23页 |
| ·核酸杂交法 | 第23-24页 |
| 5 原位杂交(IN SITU HYBRIDIZATION)法 | 第24-33页 |
| ·荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)法 | 第24-25页 |
| ·荧光原位杂交法简介 | 第25-33页 |
| ·核酸探针 | 第25-26页 |
| ·探针标记物 | 第26页 |
| ·荧光原位杂交法常用荧光素 | 第26-27页 |
| ·荧光原位杂交法常用探针 | 第27-28页 |
| ·荧光原位杂交法步骤和原理 | 第28-33页 |
| 第二章 优化用FISH检测啤酒中有害菌研究 | 第33-56页 |
| 1 引言 | 第33页 |
| 2 实验材料 | 第33-35页 |
| ·实验菌种 | 第33-34页 |
| ·核酸探针及所标记荧光素 | 第34页 |
| ·仪器及设备 | 第34页 |
| ·实验用探针杂交液和清洗液的配制 | 第34-35页 |
| 3 试验方法 | 第35-36页 |
| ·玻片处理 | 第35页 |
| ·样品预处理 | 第35-36页 |
| ·杂交 | 第36页 |
| ·杂交后洗涤与观察 | 第36页 |
| 4 乳酸杆菌优化分析方法 | 第36页 |
| 5 乳酸杆菌杂交条件优化 | 第36-41页 |
| ·杂交时间 | 第37-38页 |
| ·甲酰胺的浓度 | 第38-39页 |
| ·清洗液中NaCl浓度 | 第39-41页 |
| 6 结果与讨论 | 第41-54页 |
| ·探针可行性分析 | 第41-54页 |
| ·杂交时间的影响 | 第43-47页 |
| ·杂交时甲酰胺浓度的影响 | 第47-51页 |
| ·清洗液中NaCl浓度的影响 | 第51-54页 |
| 7 结论 | 第54-56页 |
| 第三章 应用荧光原位杂交法检测纯生啤酒中有害菌 | 第56-61页 |
| 1 引言 | 第56页 |
| 2 材料与方法 | 第56-57页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57页 |
| ·纯生啤酒取样 | 第57页 |
| ·微生物培养技术 | 第57页 |
| ·FISH技术 | 第57页 |
| 3 结果与讨论 | 第57-60页 |
| ·污染菌种的鉴定 | 第57-60页 |
| ·生理生化试验结果 | 第57-59页 |
| ·FISH实验结果 | 第59-60页 |
| 4 结论 | 第60-61页 |
| 第四章 荧光微菌落法和荧光原位杂交技术的联用 | 第61-73页 |
| 1 引言 | 第61页 |
| 2 实验材料 | 第61-62页 |
| ·实验菌种 | 第61页 |
| ·核酸探针及所标记荧光素 | 第61-62页 |
| ·主要试剂及配制 | 第62页 |
| 3 实验方法 | 第62-65页 |
| ·PCR鉴定方法 | 第62-63页 |
| ·菌种16SrDNA序列及比对 | 第63页 |
| ·荧光微菌落法的研究 | 第63-64页 |
| ·啤酒有害菌的分离纯化及啤酒危害实验 | 第63页 |
| ·荧光染色时间的确定 | 第63-64页 |
| ·荧光检测时间的确定 | 第64页 |
| ·微菌落法的可重复性 | 第64页 |
| ·荧光原位与微菌落联用的杂交实验 | 第64-65页 |
| ·荧光微菌落法与荧光原位杂交技术结合的可重复性实验 | 第65页 |
| ·荧光微菌落法与荧光原位杂交技术联合应用试验 | 第65页 |
| 4 结果与讨论 | 第65-73页 |
| ·污染菌种的鉴定 | 第65-67页 |
| ·乳酸杆菌生理生化试验结果 | 第65-66页 |
| ·啤酒中常见污染乳酸菌的种群进化关系 | 第66-67页 |
| ·PCR电泳和16SrDNA序列测序结果与分析 | 第67页 |
| ·荧光染色时间的确定 | 第67-68页 |
| ·检测时间的确定 | 第68-69页 |
| ·对染色方法的优化 | 第69-70页 |
| ·微菌落法的可重复性 | 第70页 |
| ·荧光微菌落法与荧光原位杂交技术结合的可重复性实验结果 | 第70-71页 |
| ·荧光微菌落法与荧光原位杂交技术联用的应用试验 | 第71-73页 |
| 第五章 荧光原位杂交技术对啤酒有害菌检测和溯源性的研究和应用 | 第73-84页 |
| 1 引言 | 第73-74页 |
| 2 材料与方法 | 第74-76页 |
| ·实验材料 | 第74-75页 |
| ·实验菌种 | 第74页 |
| ·主要试剂及配制 | 第74页 |
| ·核酸探针及所标记荧光素 | 第74-75页 |
| ·试验方法 | 第75-76页 |
| ·建立FISH技术快速检测程序 | 第75页 |
| ·荧光原位与微菌落联用的杂交实验 | 第75页 |
| ·短乳杆菌探针特异性验证方法 | 第75页 |
| ·应用荧光原位杂交技术进行溯源实验 | 第75-76页 |
| 3 结果与讨论 | 第76-82页 |
| ·短乳杆菌探针特异性验证实验结果 | 第76-77页 |
| ·FISH技术对啤酒生产中的主要污染菌-短乳杆菌的溯源结果 | 第77-82页 |
| 4 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 附录 攻读硕士期间成果目录 | 第91页 |
