| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第14-23页 |
| 1.1 蔗糖磷酸化酶 | 第14-17页 |
| 1.1.1 蔗糖磷酸化酶概述 | 第14-15页 |
| 1.1.2 蔗糖磷酸化酶的应用 | 第15-16页 |
| 1.1.3 蔗糖磷酸化酶的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 蛋白表达系统 | 第17-21页 |
| 1.2.1 原核表达系统 | 第17-19页 |
| 1.2.2 真核表达系统 | 第19-21页 |
| 1.3 本论文研究的主要内容及意义 | 第21-23页 |
| 1.3.1 研究目的及意义 | 第21页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第21-23页 |
| 第二章 重组蔗糖磷酸化酶在大肠杆菌中的表达 | 第23-31页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第23-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基及培养条件 | 第23页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂的配制 | 第23-26页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第26-27页 |
| 2.2.2 重组菌E.coliBL21/pET30-SPase的验证 | 第27-28页 |
| 2.2.3 重组菌E.coliBL21/pET30-SPase的表达 | 第28页 |
| 2.2.4 粗酶液的制备 | 第28页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE电泳检测 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.3.1 重组菌E.coliBL21/pET30-SPase的构建 | 第28-30页 |
| 2.3.2 重组SPase在大肠杆菌BL21中的表达 | 第30页 |
| 2.4 本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 重组蔗糖磷酸化酶的表达条件优化 | 第31-45页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第31页 |
| 3.1.1 菌株 | 第31页 |
| 3.1.2 培养基及培养条件 | 第31页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第31页 |
| 3.1.4 主要仪器与设备 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 诱导条件的优化 | 第31-32页 |
| 3.2.2 培养基的优化 | 第32页 |
| 3.2.3 SPase酶活性的测定 | 第32-33页 |
| 3.2.4 蛋白含量的测定及SDS-PAGE分析 | 第33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-44页 |
| 3.3.1 Glc1P浓度的标准曲线 | 第33-34页 |
| 3.3.2 初始菌密度对重组SPase表达的影响 | 第34-35页 |
| 3.3.3 IPTG浓度对重组SPase表达的影响 | 第35-36页 |
| 3.3.4 诱导温度对重组SPase表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.5 诱导时间对重组SPase表达的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.6 振荡培养的转速对重组SPase表达的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.7 培养基与三角瓶的体积比对重组SPase表达的影响 | 第39页 |
| 3.3.8 碳源和氮源对重组SPase表达的影响 | 第39-41页 |
| 3.3.9 保护剂对重组SPase表达的影响 | 第41页 |
| 3.3.10 金属离子对重组SPase表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.11 培养基最优组成的正交试验结果 | 第42-44页 |
| 3.4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 重组蔗糖磷酸化酶的纯化及酶学性质分析 | 第45-55页 |
| 4.1 实验材料与设备 | 第45-46页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.1.2 主要试剂及试剂的配制 | 第45-46页 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 重组SPase的纯化 | 第46-47页 |
| 4.2.2 重组SPase的酶学性质分析 | 第47页 |
| 4.2.3 乳二糖Lacto-N-bioseⅠ的合成 | 第47-48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-54页 |
| 4.3.1 重组SPase的纯化 | 第48-50页 |
| 4.3.2 重组SPase的最适反应温度及温度稳定性 | 第50页 |
| 4.3.3 重组SPase的最适pH及pH稳定性 | 第50-51页 |
| 4.3.4 化学试剂对重组SPase稳定性的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.5 利用重组SPase合成LNB的应用试验 | 第52-54页 |
| 4.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第五章 结论与展望 | 第55-57页 |
| 5.1 结论 | 第55页 |
| 5.2 展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读硕士期间发表文章 | 第66-67页 |
