| 摘要 | 第3-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第17-28页 |
| 1.1 群体感应 | 第17-19页 |
| 1.1.1 群体感应的定义 | 第17-18页 |
| 1.1.2 群体感应与食品腐败 | 第18-19页 |
| 1.1.3 群体感应与抗胁迫性 | 第19页 |
| 1.2 气单胞菌 | 第19-26页 |
| 1.2.1 气单胞菌中的群体感应 | 第20-24页 |
| 1.2.1.1 AI-1系统 | 第20-22页 |
| 1.2.1.2 AHL信号分子类型 | 第22-23页 |
| 1.2.1.3 AI-2系统 | 第23页 |
| 1.2.1.4 AI-3系统 | 第23-24页 |
| 1.2.2 气单胞菌中群体感应和生物被膜间的关系 | 第24-26页 |
| 1.2.2.1 生物被膜 | 第24-25页 |
| 1.2.2.2 AI-1信号正调控生物被膜成熟 | 第25页 |
| 1.2.2.3 AI-2和AI-3信号负调控生物被膜的形成 | 第25-26页 |
| 1.2.3 气单胞菌群体感应与致腐性的关系 | 第26页 |
| 1.3 本课题的研究目的、意义和内容 | 第26-28页 |
| 第二章 鱼源杀鲑气单胞菌AHLs信号分子活性分析 | 第28-38页 |
| 2.1 前言 | 第28页 |
| 2.2 材料与设备 | 第28-29页 |
| 2.2.1 菌株及培养条件 | 第28-29页 |
| 2.2.2 试剂和培养基 | 第29页 |
| 2.2.3 主要设备 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-31页 |
| 2.3.1 杀鲑气单胞菌的生长曲线 | 第29页 |
| 2.3.2 生物报告菌检测杀鲑气单胞菌AHLs信号分子 | 第29-30页 |
| 2.3.3 杀鲑气单胞菌AHLs信号分子的提取 | 第30页 |
| 2.3.4 LC-MS/MS检测杀鲑气单胞菌AHLs信号分子 | 第30页 |
| 2.3.5 高温和pH对AHLs信号分子活性的影响 | 第30-31页 |
| 2.3.6 数据处理和分析 | 第31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-36页 |
| 2.4.1 菌株AE03在28℃和4℃下生长和AHLs活性 | 第31-32页 |
| 2.4.2 菌株AE03在不同氯化钠浓度下的生长和AHLs活性 | 第32-33页 |
| 2.4.3 LC-MS/MS检测AE03AHLs信号分子 | 第33-34页 |
| 2.4.4 环境因素对AE03菌株AHLs活性的影响 | 第34-36页 |
| 2.4.4.1 高温对信号分子稳定性的影响 | 第35页 |
| 2.4.4.2 pH对信号分子稳定性的影响 | 第35-36页 |
| 2.5 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 杀鲑气单胞菌AHLs合成基因asaI的分析及突变株构建 | 第38-48页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 材料与设备 | 第38-39页 |
| 3.2.1 细菌及培养条件 | 第38-39页 |
| 3.2.2 培养基和主要试剂 | 第39页 |
| 3.2.3 仪器设备 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.3.1 菌株AE03的asaI基因PCR扩增 | 第39-40页 |
| 3.3.1.1 asaI基因引物设计 | 第39-40页 |
| 3.3.1.2 DNA提取 | 第40页 |
| 3.3.1.3 PCR扩增 | 第40页 |
| 3.3.2 菌株AE03的asaI基因序列分析 | 第40-41页 |
| 3.3.3 菌株AE03 asaI基因突变株的构建 | 第41页 |
| 3.3.5 报告菌法和LC-MS/MS检测asaI突变株AHLs活性 | 第41-42页 |
| 3.4 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.4.1 菌株AE03中asaI基因扩增 | 第42页 |
| 3_4.2 菌株AE03中asal基因序列分析 | 第42-44页 |
| 3.4.3 菌株AE03 asaI基因突变株的构建 | 第44-45页 |
| 3.4.4 菌株AE03 asaI突变株的AHLs活性分析 | 第45-46页 |
| 3.5 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 杀鲑气单胞菌asaI突变株对致腐和抗胁迫性的影响 | 第48-73页 |
| 4.1 引言 | 第48-49页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第49-50页 |
| 4.2.1 原料 | 第49页 |
| 4.2.2 细菌及培养条件 | 第49页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第49-50页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50-56页 |
| 4.3.1 野生株和asaI突变株和C4-HSL回补株生长曲线测定 | 第50页 |
| 4.3.2 野生株、asaI突变株和C4-HSL回补株的接种 | 第50页 |
| 4.3.3 TMA的测定 | 第50-51页 |
| 4.3.4 生物胺含量测定 | 第51页 |
| 4.3.5 胞外蛋白酶含量的测定 | 第51-52页 |
| 4.3.6 结晶紫法测定生物被膜 | 第52页 |
| 4.3.7 共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察生物被膜 | 第52页 |
| 4.3.8 泳动能力的测定 | 第52页 |
| 4.3.9 高温、氯化钠和H202的抗胁迫性检测 | 第52-53页 |
| 4.3.10 灭菌鱼汁中腐败能力的验证 | 第53-54页 |
| 4.3.10.1 灭菌鱼汁制备 | 第53页 |
| 4.3.10.2 生长曲线 | 第53页 |
| 4.3.10.3 TMA的测定 | 第53页 |
| 4.3.10.4 胞外蛋白酶测定 | 第53页 |
| 4.3.10.5 TVB-N含量测定 | 第53-54页 |
| 4.3.11 荧光定量PCR检测 | 第54-56页 |
| 4.3.11.1 样品总RNA提取 | 第54页 |
| 4.3.11.2 总RNA反转录 | 第54-55页 |
| 4.3.11.3 荧光定量PCR | 第55-56页 |
| 4.3.12 数据处理和制图 | 第56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-70页 |
| 4.4.1 AE03野生株和asaI突变株的生长曲线 | 第56-57页 |
| 4.4.2 AE03野生株、asaI突变株和C4-HSL回补株的致腐表型 | 第57-60页 |
| 4.4.2.1 TMA含量 | 第57-59页 |
| 4.4.2.3 胞外蛋白酶活性 | 第59-60页 |
| 4.4.3 AE03野生株与asaI突变株的生物被膜形成 | 第60-61页 |
| 4.4.4 AE03野生株与asaI突变株的泳动性 | 第61-62页 |
| 4.4.5 AE03野生株与asaI突变株的抗胁迫性分析 | 第62-63页 |
| 4.4.6 AE03野生株、細/突变株和C4-HSL添加株在鱼汁中腐败 | 第63-67页 |
| 4.4.6.1 4℃下生长曲线 | 第63-64页 |
| 4.4.6.2 4℃下三甲胺含量 | 第64-65页 |
| 4.4.6.3 4℃下胞外蛋白酶活性 | 第65-66页 |
| 4.4.6.4 4°C下挥发性盐基氮含量 | 第66-67页 |
| 4.4.7 RT-PCR检测torA、cadA、fliR、katG和asaR基因的表达量 | 第67-70页 |
| 4.4.7.1 AE03菌株致腐、鞭毛和抗性相关基因的PCR扩增 | 第67页 |
| 4.4.7.2 RT-PCR产物扩增曲线及引物特异性分析 | 第67-68页 |
| 4.4.7.3 AE03野生株、asaI突变株和回补株不同生长阶段的基因表达差异 | 第68-70页 |
| 4.5 讨论 | 第70-73页 |
| 第五章 总结、展望与创新点 | 第73-75页 |
| 5.1 总结 | 第73页 |
| 5.2 创新点 | 第73-74页 |
| 5.3 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 硕士期间完成的论文 | 第84-86页 |
| 附录Ⅰ 英文缩略词对照表 | 第86-87页 |
| 附录Ⅱ 测序结果 | 第87-88页 |
