| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 乳酸菌与其胞外多糖 | 第9-16页 |
| 1.1.1 乳酸菌胞外多糖的生物活性 | 第9-11页 |
| 1.1.2 胞外多糖在食品工业中的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.3 乳酸菌胞外多糖的生物合成 | 第12-14页 |
| 1.1.4 乳酸菌胞外多糖生物合成的基因调控研究 | 第14-16页 |
| 1.2 马奶酒样乳杆菌与其胞外多糖研究概况 | 第16-18页 |
| 1.2.1 马奶酒样乳杆菌的起源及生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.2.2 马奶酒样乳杆菌胞外多糖 | 第17页 |
| 1.2.3 马奶酒样乳杆菌ZW3 | 第17-18页 |
| 1.3 第二代高通量测序 | 第18页 |
| 1.4 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(STPK)与UDP-N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸:D-谷氨酸连接酶(MurD) | 第18页 |
| 1.5 本论文研究的意义及主要内容 | 第18-21页 |
| 1.5.1 本论文研究的意义 | 第19页 |
| 1.5.2 本论文主要研究内容 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 实验用菌种及质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 工具酶及DNA、蛋白质Marker | 第21-22页 |
| 2.1.3 抗生素 | 第22页 |
| 2.1.4 实验用引物 | 第22-23页 |
| 2.1.5 试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.6 主要仪器及设备 | 第24-25页 |
| 2.1.7 培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.8 标准溶液的配制 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 实验技术路线 | 第27-28页 |
| 2.2.2 利用转座技术获得2~ | 第28-30页 |
| 2.2.3 苯酚-硫酸法胞外多糖(EPS)产量的测定 | 第30页 |
| 2.2.4 2~ | 第30-31页 |
| 2.2.5 与产胞外多糖相关基因的荧光定量PCR分析 | 第31-33页 |
| 2.2.6 WANG-1108与WANG-0840生物信息学分析 | 第33页 |
| 2.2.7 重组质粒 pET28a-ZW3/2~ | 第33-34页 |
| 2.2.8 基因片段与质粒pET28a的双酶切与连接 | 第34-35页 |
| 2.2.9 大肠杆菌DH5α (pET28a-1108/pET28a-0840)转化子的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.10 重组菌株蛋白的诱导表达及酶活测定 | 第36-37页 |
| 2.2.11 WANG_1108丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶酶活的测定 | 第37-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-65页 |
| 3.1 利用Mp转座技术获得2~ | 第38页 |
| 3.1.1 Mμ转座DNA的制备 | 第38页 |
| 3.1.2 验证突变株 | 第38页 |
| 3.2 马奶酒样乳杆菌ZW3及其2~ | 第38-40页 |
| 3.3 2~ | 第40-43页 |
| 3.3.1 二羟丙酮激酶(WANG_0175)与EPS产量的相关分析 | 第41-42页 |
| 3.3.2 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(WANG_1108)与EPS产量的相关分析 | 第42页 |
| 3.3.3 UDP-N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸:D-谷氨酸连接酶(MurD)与EPS产量的相关分析 | 第42-43页 |
| 3.4 与产胞外多糖相关的突变基因的荧光定量PCR分析 | 第43-48页 |
| 3.4.1 ZW3与2~ | 第43-44页 |
| 3.4.2 RT-qPCR引物特异性及扩增效率 | 第44-46页 |
| 3.4.3 突变基因荧光定量PCR分析 | 第46-48页 |
| 3.5 WANG_1108与WANG_0840生物信息学分析 | 第48-57页 |
| 3.5.1 核酸序列的组成及特征 | 第48-49页 |
| 3.5.2 稀有密码子分析 | 第49-50页 |
| 3.5.3 酶切位点分析 | 第50-51页 |
| 3.5.4 氨基酸序列基本理化特性分析 | 第51-52页 |
| 3.5.5 蛋白信号肽分析 | 第52-54页 |
| 3.5.6 跨膜结构域分析 | 第54-55页 |
| 3.5.7 蛋白二级结构预测 | 第55-56页 |
| 3.5.8 蛋白三级结构预测 | 第56页 |
| 3.5.9 保守结构域和活性位点分析 | 第56-57页 |
| 3.6 重组质粒 pET28a-ZW3/2~( | 第57-60页 |
| 3.6.1 扩增基因片段 | 第57-58页 |
| 3.6.2 重组质粒 pET28a-ZW3/2~( | 第58页 |
| 3.6.3 重组质粒验证 | 第58-59页 |
| 3.6.4 重组质粒测序结果 | 第59-60页 |
| 3.7 重组蛋白的诱导表达及酶活测定 | 第60-63页 |
| 3.7.1 重组质粒转至大肠杆菌表达菌株E.coli BL21(DE3) | 第60-61页 |
| 3.7.2 重组子蛋白的诱导表达及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶酶活测定 | 第61-63页 |
| 3.8 讨论 | 第63-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 5 展望 | 第66-67页 |
| 6 参考文献 | 第67-76页 |
| 7 攻读硕士期间发表论文情况 | 第76-77页 |
| 8 致谢 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-81页 |
