| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| 1.1 食品安全与真菌毒素污染 | 第13-14页 |
| 1.2 玉米赤霉烯酮 | 第14-18页 |
| 1.2.1 化学性质及毒性 | 第14-15页 |
| 1.2.2 食品和饲料中 ZEA 的限量标准 | 第15-16页 |
| 1.2.3 ZEA 的检测及控制 | 第16-18页 |
| 1.3 真菌毒素 ZEA 生物脱毒的研究 | 第18-21页 |
| 1.3.1 ZEA 生物脱毒的国内外研究现状 | 第18-20页 |
| 1.3.2 其他真菌毒素生物脱毒的研究概况 | 第20-21页 |
| 1.4 生物质谱法分析鉴定蛋白质技术 | 第21-23页 |
| 1.4.1 生物质谱技术的类型与原理 | 第21-22页 |
| 1.4.2 生物质谱技术在蛋白质与多肽序列分析中的应用 | 第22-23页 |
| 1.5 大肠杆菌表达系统 | 第23-25页 |
| 1.5.1 大肠杆菌表达系统概述 | 第23-24页 |
| 1.5.2 大肠杆菌表达系统的影响因素 | 第24-25页 |
| 1.6 本论文研究内容和意义 | 第25-28页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第25-26页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 Acinetobacter sp. SM04 培养上清液中 ZEA 降解组分的分离与纯化 | 第28-41页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第28-31页 |
| 2.1.1 菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 培养基 | 第29-30页 |
| 2.1.5 常用溶液 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.2.1 Acinetobacter sp. SM04 培养上清液的获得 | 第31页 |
| 2.2.2 Acinetobacter sp. SM04 培养上清液中 ZEA 降解组分的分离纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.3 ZEA 降解能力的测定 | 第32页 |
| 2.2.4 ZEA 降解组分中蛋白含量的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.5 ZEA 降解组分中蛋白质的 SDS-PAGE 电泳分析 | 第33页 |
| 2.2.6 ZEA 降解组分中蛋白质的 MALDI-TOF/TOF/MS 分析与鉴定 | 第33页 |
| 2.2.7 pH 对 ZEA 降解组分活性的影响 | 第33-34页 |
| 2.2.8 温度对 ZEA 降解组分活性的影响 | 第34页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第34-40页 |
| 2.3.1 Acinetobacter sp. SM04 培养上清液中 Peak 2 组分的分离与纯化 | 第34页 |
| 2.3.2 Peak 2 组分中蛋白质含量的测定 | 第34-36页 |
| 2.3.3 Peak 2 组分中蛋白的 SDS-PAGE 电泳分析 | 第36-37页 |
| 2.3.4 Peak 2 组分中蛋白的 MALDI-TOF/TOF/MS 分析和鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.5 pH 对 Peak 2 组分 ZEA 降解活性的影响 | 第38页 |
| 2.3.6 温度对 Peak 2 组分 ZEA 降解活性的影响 | 第38-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 重组蛋白 A4-Oxa 大肠杆菌表达载体的构建 | 第41-56页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第41-43页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第42页 |
| 3.1.4 培养基与常用溶液 | 第42-43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-48页 |
| 3.2.1 A4-Oxa 基因的克隆 | 第43-44页 |
| 3.2.2 A4-Oxa 基因测序与氨基酸序列的推导 | 第44页 |
| 3.2.3 Acinetobacter sp. SM04 中 A4-Oxa 基因的 PCR 扩增 | 第44-45页 |
| 3.2.4 目的基因 PCR 产物的回收 | 第45页 |
| 3.2.5 目的基因 PCR 产物及质粒的双酶切与回收 | 第45-46页 |
| 3.2.6 目的基因与载体的连接 | 第46-47页 |
| 3.2.7 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备与转化 | 第47页 |
| 3.2.8 重组子的筛选与鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-55页 |
| 3.3.1 Acinetobacter sp. SM04 中 A4-Oxa 基因的克隆与氨基酸序列的推导 | 第48-51页 |
| 3.3.2 目的基因的扩增 | 第51-52页 |
| 3.3.3 目的基因的 PCR 产物及质粒的双酶切 | 第52页 |
| 3.3.4 重组表达载体的构建 | 第52-55页 |
| 3.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 重组蛋白 A4-Oxa 在大肠杆菌中的表达 | 第56-68页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第56-59页 |
| 4.1.1 菌种 | 第56页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
| 4.1.3 主要仪器和设备 | 第57页 |
| 4.1.4 培养基与常用溶液 | 第57-59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-62页 |
| 4.2.1 大肠杆菌 BL21 (DE3)感受态的制备及转化 | 第59-60页 |
| 4.2.2 重组蛋白 A4-Oxa 在大肠杆菌 BL21 (DE3)中的表达 | 第60页 |
| 4.2.3 重组蛋白 A4-Oxa 的 SDS-PAGE 电泳分析及蛋白含量的测定 | 第60-61页 |
| 4.2.4 重组蛋白 A4-Oxa 的 ZEA 降解活性检测 | 第61页 |
| 4.2.5 IPTG 添加量对重组蛋白 A4-Oxa 表达量的影响 | 第61页 |
| 4.2.6 诱导表达时间对重组蛋白 A4-Oxa 表达量的影响 | 第61-62页 |
| 4.3 实验结果 | 第62-67页 |
| 4.3.1 重组大肠杆菌 BL21(DE3)/pET32a(+)-A4-Oxa 的菌落 PCR 鉴定 | 第62页 |
| 4.3.2 重组蛋白 A4-Oxa 的表达及蛋白含量的测定 | 第62-64页 |
| 4.3.3 重组蛋白 A4-Oxa 的 ZEA 降解活性检测 | 第64页 |
| 4.3.4 IPTG 添加量对重组蛋白表达量的影响 | 第64-66页 |
| 4.3.5 诱导表达时间对重组蛋白表达量的影响 | 第66-67页 |
| 4.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 结论与展望 | 第68-71页 |
| 一、结论 | 第68-69页 |
| 二、创新点 | 第69-70页 |
| 三、展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附件 | 第84页 |
