| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 绪论 | 第16-33页 |
| 1 黄曲霉毒素概述 | 第16-23页 |
| ·黄曲霉毒素的种类及结构 | 第16-17页 |
| ·黄曲霉毒素的理化性质 | 第17-18页 |
| ·黄曲霉毒素的危害及分布 | 第18页 |
| ·黄曲霉毒素的合成代谢途径 | 第18-19页 |
| ·黄曲霉毒素B_1的限量标准 | 第19-20页 |
| ·黄曲霉毒素致癌机理浅析 | 第20页 |
| ·黄曲霉毒素的测定方法 | 第20-23页 |
| ·生物学测定方法 | 第21页 |
| ·理化检测方法 | 第21-22页 |
| ·免疫学检测方法 | 第22-23页 |
| 2 人工抗原的制备方法 | 第23-26页 |
| ·肟化法 | 第24-25页 |
| ·碳二亚胺法 | 第24页 |
| ·活泼脂法 | 第24-25页 |
| ·混合酸酐法 | 第25页 |
| ·胺甲基化反应法 | 第25-26页 |
| ·环氧化物法 | 第26页 |
| 3 ELISA检测方法研究 | 第26-31页 |
| ·ELISA检测方法 | 第26-29页 |
| ·间接法测抗体 | 第26-27页 |
| ·双抗体夹心法测抗原 | 第27-28页 |
| ·间接竞争法测抗原 | 第28-29页 |
| ·血清抗体的制备 | 第29-31页 |
| ·免疫动物的选择 | 第29-30页 |
| ·免疫抗原的剂量 | 第30页 |
| ·免疫佐剂的应用及乳化 | 第30页 |
| ·免疫方案 | 第30页 |
| ·抗血清的效价 | 第30-31页 |
| ·抗血清的保存 | 第31页 |
| 4 实验目的意义及主要研究内容 | 第31-33页 |
| 第一章 黄曲霉菌的培养及AFB_1的提取、分离纯化 | 第33-43页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| ·菌种 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·主要试剂的配制 | 第33-34页 |
| 2 试验方法及操作步骤 | 第34-38页 |
| ·黄曲霉菌的培养 | 第34页 |
| ·黄曲霉菌的复苏 | 第34页 |
| ·黄曲霉菌的扩大培养 | 第34页 |
| ·黄曲霉毒素B_1的提取 | 第34-35页 |
| ·黄曲霉毒素粗液的提取 | 第35页 |
| ·黄曲霉毒素粗液的过滤、萃取 | 第35页 |
| ·黄曲霉毒素粗液的浓缩 | 第35页 |
| ·黄曲霉毒素B_1的纯化 | 第35-37页 |
| ·氧化铝柱层析 | 第35-36页 |
| ·硅胶柱层析 | 第36-37页 |
| ·黄曲霉毒素B_1的检测 | 第37-38页 |
| ·TLC检测 | 第37页 |
| ·HPLC检测 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-41页 |
| ·黄曲霉菌培养结果分析 | 第38页 |
| ·黄曲霉毒素B_1提取结果分析 | 第38-39页 |
| ·黄曲霉毒素B_1纯化结果分析 | 第39-41页 |
| ·氧化铝柱层析TLC检测结果 | 第39页 |
| ·硅胶柱层析TLC检测结果 | 第39-40页 |
| ·硅胶柱层析分离纯化后四种不同的展层剂TLC检测结果 | 第40-41页 |
| ·黄曲霉毒素B_1的HPLC检测结果分析 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| ·培养条件对黄曲霉毒素B_1提取结果的探讨 | 第41-42页 |
| ·洗脱剂对纯化黄曲霉毒素B_1结果的探讨 | 第42-43页 |
| 第二章 AFB_1人工抗原的高效合成研究 | 第43-55页 |
| 1 材料 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·主要试剂的配制 | 第43-44页 |
| 2 试验方法及操作步骤 | 第44-46页 |
| ·AFB_1肟化产物的制备 | 第44-45页 |
| ·AFB_1肟化率的计算 | 第45页 |
| ·AFB_1肟与C-BSA偶联物的制备 | 第45页 |
| ·反应物起始摩尔比对偶联比的影响 | 第45-46页 |
| ·偶联比的计算 | 第46页 |
| ·AFB_1-BSA人工抗原的鉴定 | 第46页 |
| ·AFB_1-BSA偶联物的紫外光谱分析 | 第46页 |
| ·AFB_1-BSA偶联物的SDS-PAGE电泳分析 | 第46页 |
| ·AFB_1-BSA偶联物的红外光谱分析 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-53页 |
| ·AFB_1肟化物的制备 | 第47-48页 |
| ·肟化时间对肟化反应的影响 | 第47页 |
| ·肟化率 | 第47-48页 |
| ·AFB_1肟与C-BSA偶联物的制备 | 第48-53页 |
| ·反应物起始摩尔比对产物偶联比的影响 | 第48-51页 |
| ·AFB_1-BSA偶联物的纯化和结构鉴定 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·AFB_1肟化物制备中肟化反应条件的选择 | 第53页 |
| ·AFB_1-BSA偶联方法的选择 | 第53-55页 |
| 第三章 黄曲霉毒素B_1抗血清的制备与研究 | 第55-75页 |
| 1 材料 | 第55-57页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·主要溶液配制 | 第55-57页 |
| ·实验动物 | 第57页 |
| 2 试验方法及操作步骤 | 第57-63页 |
| ·动物饲养及处理 | 第57页 |
| ·抗体的制备 | 第57-58页 |
| ·人工抗原的浓度测定 | 第57-58页 |
| ·人工抗原的乳化 | 第58页 |
| ·免疫动物 | 第58页 |
| ·抗血清的制备与保存 | 第58-59页 |
| ·抗血清的特异性和效价鉴定 | 第59-60页 |
| ·抗体特异性的鉴定 | 第59页 |
| ·间接非竞争酶联免疫法检测抗体效价 | 第59-60页 |
| ·间接竞争ELISA法检测抗体灵敏度 | 第60-61页 |
| ·AFB_1抗血清与其类似物交叉反应情况测定 | 第61页 |
| ·AFB_1加标回收检测 | 第61-63页 |
| 3 结果 | 第63-70页 |
| ·阴性血清琼脂双向扩散实验结果 | 第63-64页 |
| ·AFB_1BSA人工抗原BSA蛋白浓度测定 | 第64页 |
| ·AFB_1抗血清的免疫反应性 | 第64-67页 |
| ·免疫小鼠血清效价的鉴定 | 第65页 |
| ·小鼠抗血清效价的变化趋势 | 第65-66页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第66页 |
| ·小鼠抗血清最佳免疫方案的确定 | 第66-67页 |
| ·抗血清的特异性鉴定 | 第67-68页 |
| ·抗体灵敏度的测定 | 第68-70页 |
| ·抗血清与其类似物交叉反应情况 | 第70页 |
| ·AFB_1的加标回收测定 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-75页 |
| ·人工抗原与动物免疫 | 第71页 |
| ·人工抗原的结合比对效价的影响 | 第71-72页 |
| ·抗体效价的测定和特异性鉴定 | 第72-73页 |
| ·样品加标回收实验 | 第73-75页 |
| 第五章 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
