| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| ·食品中环境内分泌干扰物的研究背景 | 第12-16页 |
| ·食品中常见的环境内分泌干扰物质 | 第13-14页 |
| ·环境内分泌干扰物的危害性 | 第14-15页 |
| ·健康的危害性 | 第14页 |
| ·生态危害性 | 第14-15页 |
| ·食品中潜在环境内分泌干扰物的生物检测 | 第15-16页 |
| ·受体结合实验法 | 第15页 |
| ·酵母双杂交法 | 第15-16页 |
| ·哺乳动物双杂交法 | 第16页 |
| ·食品中环境内分泌干扰物作用机体的受体通道研究背景 | 第16-22页 |
| ·与环境内分泌干扰物作用机体相关的核受体 | 第16-18页 |
| ·雌激素受体 | 第17页 |
| ·雄激素受体 | 第17页 |
| ·孤儿受体 | 第17-18页 |
| ·其他核受体 | 第18页 |
| ·与环境内分泌干扰物作用机体相关的其他受体 | 第18-19页 |
| ·膜受体 | 第18页 |
| ·芳烃受体 | 第18-19页 |
| ·环境内分泌干扰物作用机体的受体途径 | 第19-22页 |
| ·雌激素受体（ER）介导的信号通道 | 第19-20页 |
| ·雄激素受体（AR）介导的信号通道 | 第20页 |
| ·芳烃受体（AhR）介导的信号通道 | 第20页 |
| ·孤儿受体（Orphan Receptor）介导的信号通道 | 第20-21页 |
| ·其他受体介导的信号通道 | 第21页 |
| ·多种EDCs 和多种通道的协同作用 | 第21-22页 |
| ·本课题的立论依据及主要研究内容 | 第22-25页 |
| ·立论依据 | 第22-23页 |
| ·主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第25-37页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·实验常用试剂 | 第25页 |
| ·拟研究的潜在环境内分泌干扰物 | 第25-26页 |
| ·质粒、细胞株 | 第26页 |
| ·关键机器 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-36页 |
| ·Trizol 试剂提取细胞总RNA 方法 | 第26-27页 |
| ·细胞总RNA 的DNase I 酶处理及纯化 | 第27页 |
| ·反转录反应(cDNA 第一链的合成) | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第29-33页 |
| ·目的片段的PCR 扩增 | 第29页 |
| ·目的基因片段与表达载体的双酶切 | 第29-30页 |
| ·目的基因片段与表达载体的切胶纯化 | 第30-31页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31-32页 |
| ·重组受体蛋白阳性表达质粒的蓝白斑筛选 | 第32页 |
| ·重组受体蛋白阳性表达质粒的提取与鉴定 | 第32-33页 |
| ·GST-ERα、ERRγ、VDR 和TIF2-BAP 融合蛋白的表达和纯化 | 第33-34页 |
| ·h ERα、hERRγ、hVDR 结合活性化学物质的虚拟筛选 | 第34-35页 |
| ·受体结合测试方法的建立 | 第35-36页 |
| ·统计分析 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第37-76页 |
| ·食品中潜在EDCs 的重组受体结合活性测试方法的建立 | 第37-50页 |
| ·重组受体蛋白阳性表达质粒的蓝白斑筛选 | 第37-38页 |
| ·pGEX-4T-1-hERα重组质粒的蓝白斑筛选结果 | 第37页 |
| ·pGEX-4T-1-h ERRγ重组质粒的蓝白斑筛选结果 | 第37-38页 |
| ·pGEX-4T-1-hVDR 重组质粒的蓝白斑筛选结果 | 第38页 |
| ·重组受体蛋白表达质粒的鉴定 | 第38-40页 |
| ·目的 DNA 的氨基酸序列测定 | 第40-42页 |
| ·ERα-LBD 氨基酸序列测定 | 第40页 |
| ·ERRγ-LBD 序列测定 | 第40-41页 |
| ·VDR-LBD 序列测定 | 第41页 |
| ·TIF2-BAP 序列测定 | 第41-42页 |
| ·目的DNA 氨基酸序列分析 | 第42-43页 |
| ·ERα-LBD 氨基酸序列分析 | 第42页 |
| ·ERRγ-LBD 氨基酸序列分析 | 第42页 |
| ·VDR-LBD 氨基酸序列分析 | 第42-43页 |
| ·TIF2-BAP 氨基酸序列分析 | 第43页 |
| ·目的基因编码的核苷酸序列分析 | 第43-45页 |
| ·ERα-LBD 编码的核苷酸序列分析 | 第43-44页 |
| ·ERRγ-LBD 编码的核苷酸序列分析 | 第44页 |
| ·VDR-LBD 编码的核苷酸序列分析 | 第44页 |
| ·TIF2-BAP 编码的核苷酸序列分析 | 第44-45页 |
| ·重组受体蛋白的表达与纯化 | 第45-46页 |
| ·食品中具有重组受体蛋白结合活性的化学物质的虚拟筛选 | 第46-47页 |
| ·重组受体结合活性的磷酸对硝基苯酚法的验证 | 第47-50页 |
| ·hERα结合活性的磷酸对硝基苯酚法的验证 | 第47-48页 |
| ·hERRγ结合活性的磷酸对硝基苯酚法的验证 | 第48-49页 |
| ·hVDR 结合活性的磷酸对硝基苯酚法的验证 | 第49-50页 |
| ·重组受体与食品中潜在环境内分泌干扰物的结合 | 第50-60页 |
| ·食品中潜在环境内分泌干扰物的hERα结合活性 | 第50-55页 |
| ·对羟基苯甲酸酯类化合物的hERα结合活性 | 第50-51页 |
| ·水杨酸酯类化合物的hERα结合活性 | 第51页 |
| ·邻苯二甲酸酯类化合物的hERα结合活性 | 第51-52页 |
| ·双酚A 及其类似化合物的hERα结合活性 | 第52-53页 |
| ·异黄酮类化合物的hERα结合活性 | 第53-54页 |
| ·重金属类物质的hERα结合活性 | 第54-55页 |
| ·食品中潜在环境内分泌干扰物的hERRγ结合活性 | 第55-59页 |
| ·对羟基苯甲酸酯类化合物的hERRγ结合活性 | 第55-56页 |
| ·水杨酸酯类化合物的hERRγ结合活性 | 第56-57页 |
| ·邻苯二甲酸酯类化合物的hERRγ结合活性 | 第57-58页 |
| ·双酚A 及其类似化合物的hERRγ结合活性 | 第58页 |
| ·重金属类化合物的ERRγ结合活性 | 第58-59页 |
| ·食品中潜在环境内分泌干扰物的hVDR 结合活性 | 第59-60页 |
| ·结合活性的比较分析 | 第60-69页 |
| ·潜在EDCs 与hERα的结合活性比较分析 | 第60-64页 |
| ·水杨酸甲酯、对羟基苯甲酸甲酯与hERα结合活性比较 | 第60-61页 |
| ·水杨酸乙酯、对羟基苯甲酸乙酯与hERα结合活性比较 | 第61-62页 |
| ·水杨酸苯酯、水杨酸苄酯、水杨酸苯乙酯与hERα结合活性比较 | 第62-63页 |
| ·水杨酸苄酯、对羟基苯甲酸苄酯、苯甲酸苄酯与hERα结合活性比较 | 第63-64页 |
| ·潜在EDCs 与hERRγ的结合活性分析 | 第64-68页 |
| ·水杨酸甲酯、对羟基苯甲酸甲酯与hERRγ结合活性比较 | 第64-65页 |
| ·水杨酸乙酯、对羟基苯甲酸乙酯与hERRγ结合活性比较 | 第65-66页 |
| ·水杨酸苯酯、水杨酸苄酯、水杨酸苯乙酯与hERRγ结合活性比较 | 第66-67页 |
| ·水杨酸苄酯、对羟基苯甲酸苄酯、苯甲酸苄酯与hERRγ结合活性比较 | 第67-68页 |
| ·四溴双酚A 与hERα、hERRγ结合活性比较分析 | 第68-69页 |
| ·对实验数据的进一步docking 验证 | 第69-74页 |
| ·四溴双酚A 与雌激素受体、雌激素相关受体结合的对接模拟 | 第70-72页 |
| ·对羟基苯甲酸甲酯、水杨酸甲酯与雌激素受体结合的对接模拟 | 第72-73页 |
| ·对羟基苯甲酸甲酯、水杨酸甲酯与雌激素相关受体结合的对接模拟 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 个人简历 | 第85页 |
