| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 1 前言 | 第13-20页 |
| 1.1 甲壳素 | 第13页 |
| 1.2 甲壳低聚糖 | 第13-14页 |
| 1.2.1 甲壳低聚糖的水溶性 | 第13页 |
| 1.2.2 甲壳低聚糖的抗氧化活性 | 第13-14页 |
| 1.2.3 甲壳低聚糖的抗肿瘤活性 | 第14页 |
| 1.3 甲壳低聚糖的制备方法 | 第14-15页 |
| 1.3.1 化学降解法 | 第14-15页 |
| 1.3.2 物理降解法 | 第15页 |
| 1.3.3 酶解法 | 第15页 |
| 1.4 甲壳素酶的研究概况 | 第15-19页 |
| 1.4.1 甲壳素酶的发现 | 第15页 |
| 1.4.2 甲壳素酶的来源 | 第15-16页 |
| 1.4.2.1 动物来源的甲壳素酶 | 第16页 |
| 1.4.2.2 植物来源的甲壳素酶 | 第16页 |
| 1.4.2.3 微生物来源的甲壳素酶 | 第16页 |
| 1.4.3 甲壳素酶性质 | 第16-17页 |
| 1.4.3.1 相对分子量 | 第16-17页 |
| 1.4.3.2 最适温度和热稳定性 | 第17页 |
| 1.4.3.3 最适p H及稳定性 | 第17页 |
| 1.4.3.4 金属离子对甲壳素酶的影响 | 第17页 |
| 1.4.4 甲壳素酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.4.5 甲壳素的物理预处理法研究现状 | 第18-19页 |
| 1.4.5.1 粉碎法 | 第18页 |
| 1.4.5.2 蒸汽爆法 | 第18-19页 |
| 1.4.5.3 辐照法 | 第19页 |
| 1.4.5.4 高压均质法 | 第19页 |
| 1.5 本论文的立题依据与研究内容 | 第19-20页 |
| 1.5.1 本论文的立题依据 | 第19-20页 |
| 1.5.2 本论文的研究内容 | 第20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 材料 | 第20页 |
| 2.2 主要试剂 | 第20-22页 |
| 2.3 仪器设备 | 第22-24页 |
| 2.4 实验方法 | 第24-35页 |
| 2.4.1 产甲壳素菌株筛选及鉴定 | 第24-27页 |
| 2.4.1.1 甲壳素及其衍生物的制备 | 第24页 |
| 2.4.1.3 产甲壳素酶菌株初筛 | 第24页 |
| 2.4.1.4 产甲壳素酶菌株复筛 | 第24-25页 |
| 2.4.1.5 甲壳素酶活力的测定 | 第25-26页 |
| 2.4.1.6 菌株鉴定 | 第26-27页 |
| 2.4.2 产甲壳素酶菌株A1发酵条件研究 | 第27-28页 |
| 2.4.2.1 菌株A1发酵培养条件研究 | 第27-28页 |
| 2.4.2.2 菌株A1的生长曲线及产酶曲线测定 | 第28页 |
| 2.4.3 甲壳素酶的分离纯化 | 第28-30页 |
| 2.4.3.1 发酵液的制备 | 第28-29页 |
| 2.4.3.2 硫酸铵沉淀 | 第29页 |
| 2.4.3.3 DEAE-52 阴离子交换柱层析 | 第29页 |
| 2.4.3.4 Sephadex G-75 凝胶过滤柱层析 | 第29-30页 |
| 2.4.3.5 蛋白质标准曲线的制作 | 第30页 |
| 2.4.3.6 SDS-PAGE测定甲壳素酶纯度及分子量 | 第30页 |
| 2.4.4 甲壳素酶酶学性质研究 | 第30-32页 |
| 2.4.4.1 最适温度的测定 | 第30-31页 |
| 2.4.4.2 最适pH的测定 | 第31页 |
| 2.4.4.3 温度对酶稳定性的影响 | 第31页 |
| 2.4.4.4 pH对酶稳定性的影响 | 第31页 |
| 2.4.4.5 抑制剂和激活剂对酶活力的影响 | 第31页 |
| 2.4.4.6 金属离子对酶活力的影响 | 第31页 |
| 2.4.4.7 酶促反应米氏常数(Km)的测定 | 第31-32页 |
| 2.4.4.8 羧甲基甲壳素溶液在甲壳素酶作用下的粘度变化 | 第32页 |
| 2.4.5 甲壳素微观结构分析 | 第32-33页 |
| 2.4.5.1 甲壳素脱乙酰度的测定 | 第32页 |
| 2.4.5.2 甲壳素结晶度的测定 | 第32页 |
| 2.4.5.3 甲壳素表面形态的电镜观察 | 第32-33页 |
| 2.4.6 不同处理方法对甲壳素微观结构的影响 | 第33页 |
| 2.4.6.1 蒸汽爆破 | 第33页 |
| 2.4.6.2 高压均质 | 第33页 |
| 2.4.6.3 辐照 | 第33页 |
| 2.4.7 酶水解甲壳素的研究 | 第33-34页 |
| 2.4.7.1 非专一性甲壳素水解酶的筛选 | 第33-34页 |
| 2.4.7.2 木瓜蛋白酶水解甲壳素的研究 | 第34页 |
| 2.4.7.3 灰色链霉菌（Streptomyces griseus）甲壳素酶水解甲壳素的研究 | 第34页 |
| 2.4.7.4 多粘类芽孢杆菌A1甲壳素酶水解甲壳素的研究 | 第34页 |
| 2.4.8 甲壳素降解产物的分析 | 第34-35页 |
| 2.4.8.1 水解产物的GPC分析 | 第34页 |
| 2.4.8.2 水解产物的高效液相(HPLC)分析 | 第34-35页 |
| 2.4.8.3 水解产物的质谱分析 | 第35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-73页 |
| 3.1 产甲壳素酶菌株的筛选及鉴定 | 第35-38页 |
| 3.1.1 产甲壳素酶菌株初筛 | 第35页 |
| 3.1.2 产甲壳素酶菌株复筛 | 第35页 |
| 3.1.3 菌种鉴定 | 第35-38页 |
| 3.1.3.1 形态学鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.3.2 16S rDNA鉴定及系统进化树的构建 | 第36-37页 |
| 3.1.3.3 生理生化鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2 产甲壳素酶菌株A1发酵条件研究 | 第38-43页 |
| 3.2.1 碳源对发酵产酶的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.2 氮源对发酵产酶的影响 | 第39页 |
| 3.2.3 碳氮比对发酵产酶的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.4 培养温度对发酵产酶的影响 | 第40页 |
| 3.2.5 培养基初始p H对发酵产酶的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.6 接种龄对发酵产酶的影响 | 第41页 |
| 3.2.7 接种量对发酵产酶的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.8 菌株的生长曲线和产酶曲线测定 | 第42-43页 |
| 3.3 甲壳素酶的分离纯化 | 第43-46页 |
| 3.3.1 硫酸铵沉淀 | 第43-44页 |
| 3.3.2 DEAE-52 离子交换柱层析 | 第44页 |
| 3.3.3 Sephadex G-75 凝胶过滤柱层析 | 第44-45页 |
| 3.3.4 回收率和纯化倍数 | 第45页 |
| 3.3.5 酶纯度鉴定和相对分子量测定 | 第45-46页 |
| 3.4 甲壳素酶酶学性质研究 | 第46-51页 |
| 3.4.1 最适温度 | 第46-47页 |
| 3.4.2 最适pH | 第47页 |
| 3.4.3 温度对酶稳定性的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.4 pH对酶稳定性的影响 | 第48页 |
| 3.4.5 抑制剂和激活剂对酶活力的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.6 金属离子对酶活力的影响 | 第49页 |
| 3.4.7 酶促反应米氏常数(Km)的测定 | 第49-50页 |
| 3.4.8 羧甲基甲壳素溶液在甲壳素酶作用下的粘度变化 | 第50-51页 |
| 3.5 不同处理方法对甲壳素微观结构的影响 | 第51-65页 |
| 3.5.1 蒸汽爆破对甲壳素的影响 | 第51-60页 |
| 3.5.1.1 蒸汽爆破次数对甲壳素的影响 | 第51-53页 |
| 3.5.1.2 不同蒸汽爆破压力对甲壳素的影响 | 第53-55页 |
| 3.5.1.3 蒸汽爆破保留时间对甲壳素的影响 | 第55-58页 |
| 3.5.1.4 蒸汽爆破料液比对甲壳素的影响 | 第58-60页 |
| 3.5.2 高压均质对甲壳素的影响 | 第60-63页 |
| 3.5.3 辐照对甲壳素的影响 | 第63-65页 |
| 3.6 酶水解甲壳素的研究 | 第65-70页 |
| 3.6.1 非专一性酶水解甲壳素 | 第65-66页 |
| 3.6.1.1 非专一性酶的筛选 | 第65页 |
| 3.6.1.2 木瓜蛋白酶水解甲壳素 | 第65-66页 |
| 3.6.2 灰色链霉菌（Streptomyces griseus）甲壳素酶水解甲壳素 | 第66-67页 |
| 3.6.3 多粘类芽孢杆菌A1甲壳素酶水解甲壳素 | 第67-70页 |
| 3.6.3.1 蒸汽爆破处理对甲壳素酶水解甲壳素效果的影响 | 第67-69页 |
| 3.6.3.2 高压均质处理对甲壳素酶水解甲壳素效果的影响 | 第69页 |
| 3.6.3.3 辐照处理对甲壳素酶水解甲壳素效果的影响 | 第69-70页 |
| 3.7 水解产物的分析 | 第70-73页 |
| 3.7.1 GPC分析 | 第70-72页 |
| 3.7.2 HPLC分析 | 第72-73页 |
| 3.7.3 质谱分析 | 第73页 |
| 4 讨论与结论 | 第73-80页 |
| 4.1 讨论 | 第73-77页 |
| 4.1.1 产甲壳素酶菌株的筛选及产酶条件的研究 | 第73-74页 |
| 4.1.2 甲壳素酶分离纯化 | 第74-75页 |
| 4.1.3 甲壳素酶酶学性质的研究 | 第75页 |
| 4.1.4 甲壳素预处理的研究 | 第75-76页 |
| 4.1.5 酶水解甲壳素的研究 | 第76页 |
| 4.1.6 水解产物的分析 | 第76-77页 |
| 4.2 结论 | 第77-79页 |
| 4.3 创新点 | 第79页 |
| 4.4 存在的问题与展望 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 附录 作者攻读硕士学位期间获奖和发表论文情况 | 第86页 |
