| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第15-23页 |
| 1.1 生物胺与食品安全 | 第15-19页 |
| 1.1.1 常见生物胺及其对人体的危害 | 第15-16页 |
| 1.1.2 腐胺的产生机理 | 第16-17页 |
| 1.1.3 腐胺合成途径 | 第17-18页 |
| 1.1.4 产生生物胺的微生物种类 | 第18-19页 |
| 1.2 影响食品中腐胺产生的因素 | 第19-20页 |
| 1.3 腐胺检测方法的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.1 分析方法 | 第20页 |
| 1.3.2 分子生物学方法 | 第20-21页 |
| 1.4 研究内容和目的意义 | 第21-23页 |
| 1.4.1 研究主要内容 | 第21-22页 |
| 1.4.2 研究目的意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与仪器 | 第23-25页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 仪器 | 第24-25页 |
| 3 试验方法 | 第25-38页 |
| 3.1 培养条件的筛选 | 第25页 |
| 3.2 不同氨基酸底物对阴沟肠杆菌腐胺积累量的影响 | 第25-29页 |
| 3.2.1 不同氨基酸底物条件下阴沟肠杆菌菌液的OD值测定 | 第25页 |
| 3.2.2 不同氨基酸底物条件下阴沟肠杆菌腐胺积累量的测定 | 第25-26页 |
| 3.2.3 阴沟肠杆菌基因组DNA提取方法 | 第26页 |
| 3.2.4 目的基因PCR扩增、纯化及回收 | 第26-27页 |
| 3.2.5 目的片段与T载体连接 | 第27-28页 |
| 3.2.6 重组质粒转化E.coli DH5α感受态菌 | 第28页 |
| 3.2.7 质粒提取方法 | 第28页 |
| 3.2.8 测序 | 第28-29页 |
| 3.3 不同pH胁迫对阴沟肠杆菌腐胺积累量的影响 | 第29-32页 |
| 3.3.1 不同pH胁迫下阴沟肠杆菌菌液的OD值测定 | 第29页 |
| 3.3.2 不同pH胁迫下阴沟肠杆菌菌液的p H测定 | 第29页 |
| 3.3.3 不同pH胁迫下阴沟肠杆菌腐胺积累量的测定 | 第29页 |
| 3.3.4 不同pH胁迫下对阴沟肠杆菌基因表达量的影响 | 第29-32页 |
| 3.4 NaCl胁迫对阴沟肠杆菌的影响 | 第32页 |
| 3.4.1 不同浓度NaCl胁迫下阴沟肠杆菌菌液的OD值测定 | 第32页 |
| 3.4.2 不同浓度NaCl胁迫下阴沟肠杆菌菌液的p H测定 | 第32页 |
| 3.4.3 不同浓度NaCl胁迫下阴沟肠杆菌腐胺积累量的测定 | 第32页 |
| 3.4.4 不同浓度NaCl胁迫对阴沟肠杆菌基因表达量的影响 | 第32页 |
| 3.5 鸟氨酸脱羧酶的酶学性质及动力学研究 | 第32-38页 |
| 3.5.1 鸟氨酸脱羧酶基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 3.5.2 鸟氨酸脱羧酶表达载体的构建 | 第33-35页 |
| 3.5.3 鸟氨酸脱羧酶基因的诱导表达 | 第35-36页 |
| 3.5.4 表达产物的活性鉴定 | 第36页 |
| 3.5.5 鸟氨酸脱羧酶最适温度的研究 | 第36页 |
| 3.5.6 鸟氨酸脱羧酶最适p H的研究 | 第36页 |
| 3.5.7 NaCl对酶活力的影响 | 第36-37页 |
| 3.5.8 鸟氨酸脱羧酶动力学研究 | 第37-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-54页 |
| 4.1 不同底物条件下对阴沟肠杆菌影响试验结果分析 | 第38-40页 |
| 4.1.1 不同底物条件下阴沟肠杆菌OD值变化 | 第38页 |
| 4.1.2 不同底物条件下阴沟肠杆菌p H变化 | 第38-39页 |
| 4.1.3 不同底物条件下阴沟肠杆菌腐胺积累量变化 | 第39-40页 |
| 4.1.4 PCR扩增及测序 | 第40页 |
| 4.2 不同pH梯度处理对阴沟肠杆菌影响试验结果分析 | 第40-44页 |
| 4.2.1 不同pH梯度处理下阴沟肠杆菌OD值变化规律 | 第40-41页 |
| 4.2.2 不同pH梯度处理下阴沟肠杆菌的p H变化规律 | 第41-42页 |
| 4.2.3 不同pH梯度处理下阴沟肠杆菌菌液鸟氨酸含量变化规律 | 第42页 |
| 4.2.4 不同pH梯度处理下阴沟肠杆菌积累腐胺变化规律 | 第42-43页 |
| 4.2.5 不同pH胁迫对阴沟肠杆菌基因表达影响分析 | 第43-44页 |
| 4.3 NaCl胁迫处理对阴沟肠杆菌影响试验结果分析 | 第44-47页 |
| 4.3.1 不同浓度NaCl处理下阴沟肠杆菌OD值变化 | 第44页 |
| 4.3.2 不同浓度NaCl处理下阴沟肠杆菌pH值变化 | 第44-45页 |
| 4.3.3 不同浓度NaCl处理下阴沟肠杆菌菌液鸟氨酸含量变化规律 | 第45-46页 |
| 4.3.4 不同浓度NaCl处理下阴沟肠杆菌积累腐胺含量变化规律 | 第46页 |
| 4.3.5 NaCl胁迫对阴沟肠杆菌基因表达影响分析 | 第46-47页 |
| 4.4 外源表达鸟氨酸脱羧酶的酶学性质及动力学研究 | 第47-54页 |
| 4.4.1 pCold1-orn表达载体的构建 | 第47页 |
| 4.4.2 pCold1-orn表达载体的双酶切验证 | 第47-48页 |
| 4.4.3 pCold1-orn在大肠杆菌中的诱导表达 | 第48-49页 |
| 4.4.4 对ODC的氨基酸序列分析 | 第49-50页 |
| 4.4.5 温度对外源表达鸟氨酸脱羧酶活性的影响 | 第50-51页 |
| 4.4.6 pH对外源表达鸟氨酸脱羧酶活性的影响 | 第51-52页 |
| 4.4.7 外源表达鸟氨酸脱羧酶动力学常数的测定结果 | 第52页 |
| 4.4.8 NaCl浓度对外源表达酪氨酸脱羧酶活性的影响 | 第52-54页 |
| 5 讨论 | 第54-57页 |
| 5.1 环境条件对生物胺产生的影响 | 第54-55页 |
| 5.2 胁迫环境对生物胺产生相关基因表达的影响 | 第55-56页 |
| 5.3 存在不足 | 第56页 |
| 5.4 展望 | 第56-57页 |
| 6 结论 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第69页 |
