| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 葡萄酒概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 葡萄酒的发展 | 第10页 |
| 1.1.2 葡萄酒的营养价值 | 第10-11页 |
| 1.2 葡萄酒风味物质概述 | 第11-13页 |
| 1.2.1 高级醇 | 第11-12页 |
| 1.2.2 酸类物质 | 第12页 |
| 1.2.3 酯类物质 | 第12-13页 |
| 1.2.4 其他物质 | 第13页 |
| 1.3 葡萄酒发酵过程中高级醇的形成与控制 | 第13-16页 |
| 1.3.1 高级醇的形成机理 | 第13-15页 |
| 1.3.2 影响葡萄酒中高级醇含量的主要因素 | 第15-16页 |
| 1.4 低产高级醇酿酒酵母菌株的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.1 诱变筛选低产高级醇酿酒酵母菌株 | 第16-17页 |
| 1.4.2 原生质体融合筛选低产高级醇酿酒酵母菌株 | 第17页 |
| 1.4.3 基因工程的方法构建低产高级醇酿酒酵母菌株 | 第17-18页 |
| 1.5 本课题的立题依据及研究内容 | 第18-20页 |
| 1.5.1 本课题立题依据 | 第18页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-42页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第20-24页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第23-24页 |
| 2.2 分析方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 CO_2排放量的测定 | 第24页 |
| 2.2.2 酒精度测定 | 第24-25页 |
| 2.2.3 还原糖的测定 | 第25页 |
| 2.2.4 总酸测定 | 第25-26页 |
| 2.2.5 高级醇的测定 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-42页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第26-30页 |
| 2.3.2 目的片段的获取及纯化 | 第30-33页 |
| 2.3.3 重组质粒的构建 | 第33-37页 |
| 2.3.4 酵母转化 | 第37-38页 |
| 2.3.5 KanMX筛选标记的去除 | 第38页 |
| 2.3.6 实时荧光定量PCR | 第38-41页 |
| 2.3.7 葡萄酒发酵试验 | 第41页 |
| 2.3.8 葡萄酒酵母耐受性试验 | 第41页 |
| 2.3.9 生长曲线的测定 | 第41-42页 |
| 3 结果与讨论 | 第42-102页 |
| 3.1 出发菌株的筛选 | 第42-48页 |
| 3.1.1 葡萄酒酵母菌株耐受性试验 | 第42-45页 |
| 3.1.2 葡萄酒酿造试验 | 第45-47页 |
| 3.1.3 小结 | 第47-48页 |
| 3.2 ILV2基因缺失对葡萄酒酵母高级醇生成量的影响 | 第48-59页 |
| 3.2.1 ILV2基因一个等位基因缺失重组菌株WY-V21的获得 | 第48-51页 |
| 3.2.2 ILV2基因两个等位基因缺失重组菌株WY-V22的获得 | 第51-53页 |
| 3.2.3 ILV2基因三个等位基因缺失重组菌株WY-V23的获得 | 第53-55页 |
| 3.2.4 基因表达水平的测定 | 第55-56页 |
| 3.2.5 重组菌株与出发菌株生长、发酵性能的比较 | 第56-58页 |
| 3.2.6 重组菌株与出发菌株高级醇生成量的测定 | 第58页 |
| 3.2.7 小结 | 第58-59页 |
| 3.3 ILV3基因缺失对葡萄酒酵母高级醇生成量的影响 | 第59-68页 |
| 3.3.1 ILV3基因一个等位基因缺失重组菌株WY-V31的获得 | 第59-62页 |
| 3.3.2 ILV3基因两个等位基因缺失重组菌株WY-V32的获得 | 第62-65页 |
| 3.3.3 基因表达水平的测定 | 第65页 |
| 3.3.4 重组菌株与出发菌株生长、发酵性能的比较 | 第65-67页 |
| 3.3.5 重组菌株与出发菌株高级醇生成量的测定 | 第67页 |
| 3.3.6 小结 | 第67-68页 |
| 3.4 ILV5基因缺失对葡萄酒酵母高级醇生成量的影响 | 第68-77页 |
| 3.4.1 ILV5基因一个等位基因缺失重组菌株WY-V51的获得 | 第68-70页 |
| 3.4.2 ILV5基因两个等位基因缺失重组菌株WY-V52的获得 | 第70-72页 |
| 3.4.3 ILV5基因三个等位基因缺失重组菌株WY-V53的获得 | 第72-74页 |
| 3.4.4 基因表达水平的测定 | 第74页 |
| 3.4.5 重组菌株与出发菌株生长性能及发酵性能的比较 | 第74-76页 |
| 3.4.6 重组菌株与出发菌株高级醇生成量的测定 | 第76-77页 |
| 3.4.7 小结 | 第77页 |
| 3.5 ILV6基因游离过表达对葡萄酒酵母高级醇生成量的影响 | 第77-81页 |
| 3.5.1 基因重组质粒Yep-PI6K的构建 | 第77-78页 |
| 3.5.2 ILV6基因游离过表达重组菌株WY-V6的获得 | 第78页 |
| 3.5.3 基因表达水平的测定 | 第78-79页 |
| 3.5.4 重组菌株与出发菌株生长、发酵性能的比较 | 第79-80页 |
| 3.5.5 重组菌株与出发菌株高级醇生成量的测定 | 第80-81页 |
| 3.5.6 小结 | 第81页 |
| 3.6 BAT2基因缺失对葡萄酒酵母高级醇生成量的影响 | 第81-89页 |
| 3.6.1 BAT2基因一个等位基因缺失重组菌株WY-T21的获得 | 第81-84页 |
| 3.6.2 BAT2基因两个等位基因缺失重组菌株WY-T22的获得 | 第84-86页 |
| 3.6.3 基因表达水平的测定 | 第86页 |
| 3.6.4 重组菌株与出发菌株生长、发酵性能的比较 | 第86-88页 |
| 3.6.5 重组菌株与出发菌株高级醇生成量的测定 | 第88-89页 |
| 3.6.6 小结 | 第89页 |
| 3.7 BAT1基因缺失对葡萄酒酵母高级醇生成量的影响 | 第89-97页 |
| 3.7.1 BAT1基因一个等位基因缺失重组菌株WY-T11的获得 | 第89-91页 |
| 3.7.2 BAT1基因两个等位基因缺失重组菌株WY-T12的获得 | 第91-93页 |
| 3.7.3 基因表达水平的测定 | 第93-94页 |
| 3.7.4 重组菌株与出发菌株生长、发酵性能的比较 | 第94-96页 |
| 3.7.5 重组菌株与出发菌株高级醇生成量的测定 | 第96页 |
| 3.7.6 小结 | 第96-97页 |
| 3.8 BAT2和BAT1基因双敲除对葡萄酒酵母高级醇生成量的影响 | 第97-102页 |
| 3.8.1 BAT2和BAT1基因双敲除重组菌株WY-T22T11的获得 | 第97-98页 |
| 3.8.2 基因表达水平的测定 | 第98页 |
| 3.8.3 重组菌株与出发菌株生长、发酵性能的比较 | 第98-100页 |
| 3.8.4 重组菌株与出发菌株高级醇生成量的测定 | 第100页 |
| 3.8.5 小结 | 第100-102页 |
| 4 结论 | 第102-103页 |
| 5 展望 | 第103-104页 |
| 6 参考文献 | 第104-109页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文 | 第109-110页 |
| 8 致谢 | 第110页 |
