| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-26页 |
| ·共轭亚油酸的结构和特点 | 第10页 |
| ·共轭亚油酸的主要来源 | 第10-14页 |
| ·天然来源 | 第11-12页 |
| ·对亚油酸的瘤胃生物氢化作用 | 第11页 |
| ·内源合成 | 第11-12页 |
| ·人工合成 | 第12-14页 |
| ·化学合成 | 第14页 |
| ·微生物合成 | 第14页 |
| ·CLA检测方法 | 第14-16页 |
| ·紫外检测法(UV) | 第14-15页 |
| ·红外检测法(IR) | 第15页 |
| ·气相色谱法(GC) | 第15页 |
| ·高效液相色谱法(Ag~+-HPLC) | 第15页 |
| ·气-质联用(GC-MS) | 第15-16页 |
| ·核磁光谱法 | 第16页 |
| ·共轭亚油酸的生理功能 | 第16-19页 |
| ·抗癌功能 | 第16-17页 |
| ·抗氧化作用 | 第17页 |
| ·降低血液和肝脏中的胆固醇 | 第17页 |
| ·生长促进因子 | 第17-18页 |
| ·对免疫系统的影响 | 第18页 |
| ·减脂功能 | 第18-19页 |
| ·其他功能 | 第19页 |
| ·精氨酸的特点及生理功能 | 第19-20页 |
| ·细胞凋亡 | 第20-26页 |
| ·细胞凋亡的检测 | 第21-23页 |
| ·显微镜和电镜分析 | 第21-22页 |
| ·染色分析 | 第22页 |
| ·流式细胞仪检测法 | 第22-23页 |
| ·酶联免疫法 | 第23页 |
| ·细胞凋亡基因 | 第23-26页 |
| ·Bcl-2基因家族 | 第23页 |
| ·p53基因 | 第23-24页 |
| ·Caspase基因 | 第24-26页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第26-43页 |
| ·实验材料 | 第26-29页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·仪器设备 | 第28-29页 |
| ·试剂配制 | 第29-32页 |
| ·4M H_2SO_4 | 第29页 |
| ·3M HCl | 第29页 |
| ·尿素甲醇饱和溶液 | 第29页 |
| ·1%的硫酸-甲醇溶液 | 第29页 |
| ·磷酸盐缓冲溶液(PBS) | 第29-30页 |
| ·10×PBS | 第29-30页 |
| ·1×PBS | 第30页 |
| ·RPMI 1640培养基 | 第30页 |
| ·胰蛋白酶 | 第30页 |
| ·7.4%NaHCO_3溶液 | 第30页 |
| ·MTT 溶液 | 第30页 |
| ·Hoeehst33342溶液 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第31页 |
| ·30%聚丙烯酰胺凝胶 | 第31页 |
| ·20%十二烷基磺酸钠(SDS) | 第31页 |
| ·浓缩胶缓冲液 | 第31页 |
| ·分离胶缓冲液 | 第31页 |
| ·10×电泳缓冲液 | 第31页 |
| ·10%过硫酸胺(APS) | 第31页 |
| ·蛋白免疫印记(Western blot) | 第31-32页 |
| ·10×running buffer | 第31-32页 |
| ·10×transfer buffer | 第32页 |
| ·转移平衡液 | 第32页 |
| ·PBST 缓冲液 | 第32页 |
| ·封闭剂(5%脱脂奶粉) | 第32页 |
| ·显影液 | 第32页 |
| ·定影液 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-43页 |
| ·共轭亚油酸的纯化 | 第32-33页 |
| ·皂化水解 | 第32-33页 |
| ·纯化—尿素包合法 | 第33页 |
| ·共轭亚油酸的甲酯化 | 第33页 |
| ·共轭亚油的高效气相色谱分析 | 第33页 |
| ·ACLA的制备 | 第33-34页 |
| ·ACLA的鉴定 | 第34页 |
| ·傅里叶红外光谱检测 | 第34页 |
| ·高效液相色谱检测 | 第34页 |
| ·T24细胞常规培养 | 第34-35页 |
| ·细胞复苏 | 第34-35页 |
| ·细胞传代 | 第35页 |
| ·细胞冻存 | 第35页 |
| ·倒置显微镜观察细胞形态学变化 | 第35-36页 |
| ·MTT比色法检测细胞活力 | 第36-37页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡(Annexin V/PI双染法) | 第37-38页 |
| ·Hoechst 33342染色 | 第38页 |
| ·Western blotting蛋白印迹 | 第38-42页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第39页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第39-40页 |
| ·转膜 | 第40-41页 |
| ·封闭 | 第41页 |
| ·一抗孵育 | 第41页 |
| ·洗膜 | 第41页 |
| ·二抗孵育 | 第41页 |
| ·洗膜 | 第41页 |
| ·ECL显影 | 第41-42页 |
| ·统计分析 | 第42-43页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第43-58页 |
| ·共轭亚油酸纯化实验结果 | 第43-45页 |
| ·尿素-甲醇添加量对CLA纯化率的影响 | 第43页 |
| ·包合温度对CLA纯化率的影响 | 第43-44页 |
| ·包合时间对CLA纯化率的影响 | 第44-45页 |
| ·ACLA 表征 | 第45-47页 |
| ·ACLA傅里叶红外光谱分析 | 第45-46页 |
| ·ACLA高效液相色谱分析 | 第46-47页 |
| ·MTT法检测ACLA对T24细胞活力的影响 | 第47-48页 |
| ·流式细胞仪检测ACLA对T24细胞凋亡诱导作用 | 第48-50页 |
| ·荧光显微镜检测ACLA对T24细胞凋亡诱导作用 | 第50-52页 |
| ·ACLA诱导T24细胞凋亡机制 | 第52-58页 |
| ·ACLA下调T24细胞中p-Akt蛋白表达 | 第52-53页 |
| ·ACLA对T24细胞中Bcl-2家族蛋白的影响 | 第53-55页 |
| ·ACLA对T24细胞中Caspase-3蛋白表达的影响 | 第55-56页 |
| ·ACLA对T24细胞中PPARγ蛋白表达的影响 | 第56-58页 |
| 第四章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 硕士期间研究成果 | 第66页 |