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丝胶肽的制备及其生物活性功能和结构的研究

摘要第1-6页
Abstract第6-16页
第一章 绪论第16-37页
   ·丝胶的性质与结构第16-17页
   ·丝胶提取方法的研究进展第17-18页
     ·化学方法第17-18页
       ·酸析法第17页
       ·化学混凝法第17页
       ·有机溶剂沉淀法第17-18页
     ·物理方法第18页
       ·离心法第18页
       ·超滤浓缩法第18页
   ·丝胶的开发和利用第18-23页
     ·在食品中的应用第19-21页
       ·丝胶及其水解产物的营养价值和生物活性功能第19-21页
       ·丝胶及其水解产物食品开发现状及前景第21页
     ·在医药中的应用第21-22页
     ·在化妆品中的应用第22-23页
     ·在材料中的应用第23页
   ·酶法制备生物活性肽的研究进展第23-25页
   ·类黑精的研究进展第25-27页
   ·本课题立题背景和意义第27-28页
   ·本论文主要研究内容第28页
 参考文献第28-37页
第二章 丝绸废水中丝胶的提取及其理化性质第37-60页
   ·前言第37页
   ·实验材料与仪器第37-38页
     ·实验材料与主要试剂第37-38页
     ·主要仪器第38页
   ·实验方法第38-42页
     ·原料的预处理第38页
     ·酸析法提取丝胶第38-39页
     ·低温乙醇沉淀法提取丝胶第39页
     ·丝绸生产废水中丝胶的提取工艺第39页
     ·分析方法第39-41页
       ·基本成分分析第39页
       ·氮可溶解指数(NSI)测定第39-40页
       ·蚕腥味的分析第40页
       ·氨基酸组成分析第40页
       ·蛋白质或多肽疏水值的计算[7]第40页
       ·HPLC 测定相对分子质量分布(<10,000)第40页
       ·凝胶过滤色谱和SDS-PAGE 电泳测定相对分子质量分布(>10,000)第40-41页
     ·丝胶蛋白质的超微结构测定第41页
     ·丝胶蛋白质的热性质测定第41页
     ·圆二色性(CD)测定第41页
     ·红外光谱(IR)测定第41页
     ·气相色谱质谱联用分析丝胶中挥发性组分第41-42页
       ·挥发性组分的固相微萃取(SPME)第41-42页
       ·气相色谱质谱联用分析第42页
   ·结果与讨论第42-57页
     ·丝胶提取方法的比较第42-44页
     ·预处理的丝胶及醇提的丝胶理化性质第44-45页
     ·醇提丝胶蛋白质氨基酸组成和疏水性第45-46页
     ·醇提丝胶蛋白质相对分子质量分布第46-48页
     ·丝胶蛋白质的超微结构第48-49页
     ·丝胶蛋白质的热性质第49-51页
     ·丝胶蛋白质分子构象第51-53页
       ·圆二色性第51-52页
       ·红外光谱第52-53页
     ·丝胶中挥发性组分第53-57页
   ·本章小结第57-58页
 参考文献第58-60页
第三章 酶法水解丝胶蛋白的研究第60-74页
   ·前言第60页
   ·实验材料与设备第60-61页
     ·实验材料和主要试剂第60页
     ·仪器设备第60-61页
   ·实验方法第61-62页
     ·水解度(DH)测定第61页
     ·酶解工艺及酶解产物的分离第61页
     ·丝胶酶解工艺条件的优化第61-62页
     ·理化性质分析第62页
       ·基本成分分析第62页
       ·氨基酸组成测定第62页
       ·相对分子质量分布测定第62页
   ·结果与讨论第62-72页
     ·不同蛋白酶对丝胶蛋白水解能力的比较第62-64页
     ·AS1398 蛋白酶水解丝胶蛋白的影响因素第64-66页
       ·底物浓度对丝胶蛋白水解度的影响第64页
       ·pH 对丝胶蛋白水解度的影响第64-65页
       ·加酶量([E]/[S])对丝胶蛋白水解度的影响第65-66页
     ·AS1398 蛋白酶酶解条件的优化第66-70页
       ·回归分析第67-70页
       ·最优酶解条件的确定及其验证第70页
     ·丝胶蛋白酶解产物的组成分析第70-72页
   ·本章小结第72页
 参考文献第72-74页
第四章 丝胶酶解产物的精制及其生物活性的的研究第74-95页
   ·前言第74页
   ·实验材料与设备第74-75页
     ·实验材料和主要试剂第74-75页
     ·仪器设备第75页
   ·实验方法第75-79页
     ·DA201-C 大孔吸附树脂对丝胶酶解产物的分离第75-76页
     ·采用DA201-C 大孔吸附树脂对丝胶酶解产物进行脱盐第76页
     ·DA201-C 大孔吸附树脂对丝胶酶解产物脱色效果的分析第76页
     ·理化性质分析第76页
       ·基本成分分析第76页
       ·氨基酸组成测定第76页
       ·相对分子量分布测定第76页
     ·生物活性的分析第76-79页
       ·二苯基苦味肼基自由基(DPPH·)清除能力的测定第76-77页
       ·Fe~(2+) 螯合力的测定第77页
       ·抑制酪氨酸酶活性的测定第77-78页
       ·对鱼糜肌动球蛋白质冷冻变性保护作用的分析第78-79页
   ·结果与讨论第79-91页
     ·丝胶酶解产物的初分离第79-82页
     ·丝胶酶解产物的脱盐第82-83页
     ·丝胶酶解产物的脱色第83-85页
     ·DK-3 组分生物活性分析第85-88页
       ·DK-3 组分清除DPPH·的效果第86-87页
       ·DK-3 组分对酪氨酸酶活性的抑制作用第87页
       ·DK-3 组分对Fe2+螯合能力第87-88页
     ·DK-1 组分对鱼糜肌动球蛋白质冷冻变性保护作用第88-91页
       ·DK-1 组分对肌动球蛋白总巯基含量变化的影响第89页
       ·DK-1 组分对肌动球蛋白表面疏水性变化的影响第89-90页
       ·DK-1 组分对肌动球蛋白降解的影响第90-91页
   ·本章小结第91-92页
 参考文献第92-95页
第五章 丝胶酶解产物中抗氧化性类黑精的研究第95-130页
   ·前言第95-96页
   ·实验材料与设备第96-97页
     ·实验材料和主要试剂第96页
     ·仪器设备第96-97页
   ·实验方法第97-100页
     ·SDS-PAGE 结合过碘酸--希夫(PAS)染色鉴定糖蛋白第97页
     ·O-糖肽键的测定――β-消去反应第97页
     ·气相色谱质谱联用测定丝胶酶解产物中挥发性杂环化合物第97页
     ·聚酰胺色谱分离类黑精第97-98页
     ·半制备RP-HPLC 分离类黑精第98页
     ·RP-HPLC 分析类黑精第98页
     ·清除DPPH·自由基活性分析第98页
     ·对过氧化氢(H202)氧化损伤的PC12 细胞保护作用第98-99页
     ·相对分子质量分布测定第99页
     ·氨基酸组成分析第99页
     ·MALDI-TOF MS 质谱测定类黑精质量指纹图谱第99页
     ·ESI-MS-MS 质谱分析特征肽段氨基酸序列第99页
     ·红外光谱分析第99页
     ·类黑精组分的酸水解第99-100页
     ·半制备RP-HPLC 分离酸水解样品中色素组分第100页
     ·RP-HPLC 分析酸水解样品中色素组分第100页
     ·核磁共振(NMR)分析第100页
   ·结果与讨论第100-125页
     ·丝胶酶解产物中类黑精的形成第100-104页
       ·丝胶糖蛋白的性质第100-102页
       ·丝胶酶解产物中挥发性杂环化合物第102-104页
     ·丝胶酶解产物中类黑精的分离纯化第104-108页
       ·聚酰胺柱层析分离纯化DK-3 组分第104-105页
       ·RP-HPLC 分离纯化P-2 组分第105-108页
     ·RP-M 类黑精组分抗氧化活性第108-109页
       ·清除DPPH·自由基的能力第108页
       ·RP-M 类黑精组分对过氧化氢(H_2O_2)氧化损伤的PC12 细胞保护作用第108-109页
     ·RP-M 类黑精组分相对分子质量第109-110页
     ·RP-M 类黑精组分氨基酸组成第110-111页
     ·RP-M 类黑精组分质量指纹图谱第111-112页
     ·RP-M 类黑精组分的结构特征第112-120页
       ·ESI-MS-MS 解析RP-M 类黑精组分中特征短肽的氨基酸序列第112-118页
       ·RP-M 类黑精组分的红外光谱第118-120页
       ·RP-M 类黑精组分的紫外-可见吸收光谱第120页
     ·酸水解样品中色素组分的分离及结构特征的分析第120-125页
   ·本章小结第125-126页
 参考文献第126-130页
第六章 丝胶肽抗衰老作用的研究第130-146页
   ·前言第130-131页
   ·实验材料与设备第131-133页
     ·实验材料和主要试剂第131-132页
       ·实验动物第131页
       ·实验材料第131页
       ·主要试剂第131-132页
     ·仪器设备第132-133页
   ·实验方法第133-137页
     ·动物分组、造模及给药第133页
     ·水迷宫实验第133-134页
     ·血清中SOD 活力和MDA 含量的测定第134页
     ·脏器系数测定第134-135页
     ·大鼠脑组织海马区组织形态学的观察(HE 染色)第135页
     ·大鼠脑组织中Bcl-2 mRNA 表达水平的半定量RT-PCR 分析第135-136页
       ·大鼠脑组织取材第135页
       ·组织中总RNA 的抽提第135页
       ·PCR 引物序列及扩增片断长度第135-136页
       ·RT-PCR 反应第136页
       ·目的片断的扩增第136页
     ·数据统计学处理第136-137页
   ·结果与讨论第137-143页
     ·丝胶肽对D-半乳糖致衰老模型老鼠血清中SOD 活性和MDA 含量的影响第137-138页
     ·丝胶肽对D-半乳糖致衰老模型老鼠免疫器官重量的影响第138-139页
     ·丝胶肽对D-半乳糖致衰老模型老鼠脑组织老化的影响第139-143页
       ·丝胶肽对D-半乳糖致衰老模型老鼠学习记忆能力的影响第139-141页
       ·丝胶肽对D-半乳糖致衰老模型老鼠脑组织海马神经细胞形态学的影响第141-142页
       ·丝胶肽对D-半乳糖致衰老模型老鼠脑组织Bcl-2 mRNA 表达的影响第142-143页
   ·本章小结第143页
 参考文献第143-146页
主要结论第146-148页
展望第148-149页
论文创新点第149-150页
致谢第150-151页
附录:作者攻读博士学位期间发表的论文第151页

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