| CONTENS | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 1 前言 | 第17-31页 |
| ·立题背景 | 第17-18页 |
| ·文献综述 | 第18-29页 |
| ·乳酸乳球菌的简介 | 第18页 |
| ·L. lactis 的有氧呼吸代谢 | 第18-22页 |
| ·L. lactis 的丙酮酸代谢及其调节 | 第22-24页 |
| ·催化 L-乳酸氧化生成丙酮酸的酶 | 第24-29页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| ·课题来源 | 第30页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-48页 |
| ·材料与设备 | 第31-34页 |
| ·实验菌株与载体 | 第31页 |
| ·合成的引物 | 第31-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第33-34页 |
| ·软件及网络资源 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-48页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34-36页 |
| ·L. lactis MG1363 中 L-LDH 活性的测定 | 第36-37页 |
| ·重组 fni 基因表达菌株的构建 | 第37-39页 |
| ·重组 FNI 的表达纯化及活性测定 | 第39-41页 |
| ·NADH 氧化酶表达菌株的构建 | 第41-43页 |
| ·用 pQE 表达载体构建 ldh 的表达菌株 | 第43-44页 |
| ·用 pEASY 载体构建 ldh 的表达菌株 | 第44-46页 |
| ·细胞内代谢物的测定 | 第46-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-72页 |
| ·生物信息学评估催化乳酸氧化的酶 | 第48-54页 |
| ·非黄素含铁硫簇多亚基蛋白同源物 | 第48-49页 |
| ·含黄素和铁硫簇蛋白的同源物 | 第49页 |
| ·α-羟酸脱氢酶同源蛋白 | 第49-53页 |
| ·L-nLDH 催化乳酸氧化的可能性 | 第53-54页 |
| ·L. lactis 呼吸及发酵培养物的 LDH 活性 | 第54-57页 |
| ·L. lactis 呼吸及发酵培养物的生长曲线 | 第54-55页 |
| ·L. lactis 呼吸及发酵培养物的 LDH 活性 | 第55-57页 |
| ·重组 FNI 的表达纯化及酶学性质分析 | 第57-61页 |
| ·fni 基因表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·重组 FNI 的 SDS-PAGE 分析 | 第58页 |
| ·重组 FNI 产物的光谱扫描 | 第58-59页 |
| ·NMR 测定重组 FNI 的 II 型 IPP 异构酶活性 | 第59-60页 |
| ·重组 FNI 乳酸脱氢酶活性的测定 | 第60-61页 |
| ·重组 NoxE 的表达纯化及性质测定 | 第61-63页 |
| ·noxE 基因表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·NoxE 纯化产物的 SDS-PAGE 分析 | 第62页 |
| ·重组 NoxE 的光谱吸收特性 | 第62-63页 |
| ·NoxE 活性及对 FNI 乳酸氧化活性的影响 | 第63页 |
| ·重组 LDHA 表达菌株的构建 | 第63-67页 |
| ·利用 pQE 载体构建 LDHA 表达菌株 | 第63-65页 |
| ·利用 pEASY 载体构建 LDHA 表达菌株 | 第65-67页 |
| ·重组 LDHA 酶学性质的测定 | 第67-70页 |
| ·LDHA 的酶促动力学分析 | 第67页 |
| ·效应物对 LDHA 活性的影响 | 第67-68页 |
| ·腺嘌呤核苷酸对 LDHA 活性的影响 | 第68-69页 |
| ·底物和产物浓度对 LDHA 活性的影响 | 第69-70页 |
| ·NoxE 对 LDHA 乳酸氧化活性的影响 | 第70页 |
| ·呼吸培养物细胞内代谢物分析 | 第70-72页 |
| 4 讨论 | 第72-79页 |
| ·呼吸代谢的发生时期 | 第72-73页 |
| ·有氧呼吸积累更高生物量的原因 | 第73页 |
| ·L. lactis 利用乳酸的独特性 | 第73-74页 |
| ·FNI 不具备显著 LDH 活性的分析 | 第74-75页 |
| ·LutABC 蛋白复合物的功用 | 第75页 |
| ·重新审视 L-nLDH 的乳酸氧化能力 | 第75-76页 |
| ·L. lactis 中乳酸氧化依赖于培养时期 | 第76页 |
| ·乳酸氧化依赖于有氧呼吸培养方式 | 第76-77页 |
| ·呼吸培养物利用乳酸的必然性分析 | 第77-78页 |
| ·模拟体内环境的酶活测定体系 | 第78-79页 |
| 5 结论 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 附录 | 第91-97页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第97页 |
