| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-35页 |
| ·IFN-α、IFN-β和 IFN-γ概述 | 第15-17页 |
| ·IFN-λs（III 型干扰素）研究进展 | 第17-30页 |
| ·基因及蛋白结构 | 第17-18页 |
| ·表达和调节 | 第18-19页 |
| ·IFN-λs 的受体 | 第19-20页 |
| ·信号转导 | 第20-22页 |
| ·抗病毒 | 第22-28页 |
| ·抗肿瘤活性 | 第28-29页 |
| ·免疫调节活性 | 第29-30页 |
| ·牛干扰素研究进展 | 第30-32页 |
| ·利用毕赤酵母表达外源蛋白的研究 | 第32-34页 |
| ·毕赤酵母及其他常用表达系统简介 | 第32页 |
| ·毕赤酵母可溶性表达影响因素 | 第32-34页 |
| ·利用毕赤酵母表达干扰素的研究 | 第34页 |
| ·目的与意义 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-53页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·质粒、宿主菌 | 第35页 |
| ·细胞、病毒、培养基、血清 | 第35页 |
| ·酶、抗体、生化试剂和耗材 | 第35-36页 |
| ·主要仪器和设备 | 第36页 |
| ·试剂配制 | 第36-37页 |
| ·试验方法 | 第37-53页 |
| ·牛 IFN-λ3（boIFN-λ3）在毕赤酵母中的分泌表达 | 第37-45页 |
| ·重组牛 IFN-α/IFN-β/IFN-γ的表达 | 第45-47页 |
| ·重组牛 IFN-λ3/IFN-α/IFN-β/IFN-γ生物学活性初步测定 | 第47页 |
| ·重组牛 IFN-λ3 的理化特性分析 | 第47-48页 |
| ·重组牛 IFN-λ3 和 IFN-α/IFN-β/IFN-γ的细胞毒性检测 | 第48页 |
| ·重组牛 IFN-λ3 和 IFN-α/IFN-β/IFN-γ比较对 Mx1 蛋白和 ISRE 活性的影响 | 第48-49页 |
| ·重组牛 IFN-λ3 和 IFN-α/IFN-β/IFN-γ抗病毒活性比较研究 | 第49-51页 |
| ·ncpBVDV 持续性细胞感染对重组牛 IFN-λ3 抗病毒活性影响 | 第51-52页 |
| ·统计学方法 | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-85页 |
| ·牛 IFN-λ3 在毕赤酵母中的分泌表达 | 第53-63页 |
| ·牛 IFN-λ3 的基因优化 | 第53页 |
| ·牛 IFN-λ3 PCR 扩增 | 第53-54页 |
| ·重组表达载体 pPICZαA-boIFN-λ3 的构建和鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组 boIFN-λ3 酵母菌株的筛选鉴定 | 第55-56页 |
| ·高表达重组酵母菌株的筛选 | 第56-58页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白 boIFN-λ3 和 boIFN-λ3*的 Western blot 分析 | 第59-60页 |
| ·重组蛋白 boIFN-λ3 和 boIFN-λ3*的纯化 | 第60-62页 |
| ·重组蛋白 boIFN-λ3 和 boIFN-λ3*的糖基化分析 | 第62页 |
| ·抗 boIFN-λ3 多克隆抗体的制备 | 第62-63页 |
| ·重组牛 IFN-α/IFN-β/IFN-γ的表达 | 第63-67页 |
| ·重组 boIFN-β的表达 | 第63-66页 |
| ·重组 boIFN-α的表达 | 第66-67页 |
| ·重组 boIFN-γ的表达 | 第67页 |
| ·重组牛 IFN-λ3/IFN-α/IFN-β/IFN-γ生物学活性初步测定 | 第67-68页 |
| ·重组牛 IFN-λ3 理化特性分析 | 第68-70页 |
| ·重组牛 IFN-λ3 和 IFN-α/IFN-β/IFN-γ的细胞毒性检测 | 第70-71页 |
| ·重组 boIFN-λ3 的细胞毒性检测 | 第70页 |
| ·重组 boIFN-α/IFN-β/IFN-γ细胞毒性检测 | 第70-71页 |
| ·牛 IFN-λ3 可刺激细胞产生 Mx1 蛋白并活化 ISRE | 第71-75页 |
| ·牛 IFN-λ3 刺激多种牛源细胞产生 Mx1 蛋白 | 第71-72页 |
| ·牛 IFN-λ3 和 boIFN-α/IFN-β/IFN-γ均能够诱导 ISRE 启动子活性 | 第72-75页 |
| ·重组牛 IFN-λ3 和 boIFN-α/IFN-β/IFN-γ均具有抗 IBRV/FMDV 和 BVDV 活性 | 第75-81页 |
| ·重组牛 IFN-λ3 和 IFN-α/IFN-β/IFN-γ均具有抗 IBRV 活性 | 第75-76页 |
| ·重组牛 IFN-λ3 和 boIFN-α/IFN-β/IFN-γ均具有抗 FMDV 活性 | 第76-79页 |
| ·重组 boIFN-λ3 条件性的抑制 cp 型和 ncp 型 BVDV 增殖 | 第79-81页 |
| ·ncpBVDV 持续性细胞感染不影响重组牛 IFN-λ3 抗病毒活性 | 第81-85页 |
| ·boIFN-λ3 压力筛选下 ncpBVDV 仍能建立持续性细胞感染状态 | 第81-83页 |
| ·细胞感染 ncpBVDV 后不影响 boIFN-λ3 抗其他病毒活性 | 第83-85页 |
| 4 讨论 | 第85-92页 |
| ·酵母分泌表达和纯化 | 第85-86页 |
| ·重组牛 IFN-λ3 的理化特性和生物活性 | 第86-87页 |
| ·牛 IFN-λ3 与 boIFN-α/IFN-β/IFN-γ抗病毒活性比较分析 | 第87-89页 |
| ·牛 IFN-λ3 与 boIFN-α/IFN-β/IFN-γ协同抗病毒研究 | 第89-90页 |
| ·ncpBVDV 持续性细胞感染与 IFN-λ3 抗病毒的关系 | 第90-92页 |
| 5 结论 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-106页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第106页 |
